蛋氨酸鉻對(duì)熱應(yīng)激條件下肉雞免疫應(yīng)答的影響

王 會(huì)

（棗莊市畜牧漁業(yè)技術(shù)推廣中心，山東棗莊 277800）

高溫應(yīng)激是家禽業(yè)非常關(guān)注的問題，嚴(yán)重的熱應(yīng)激對(duì)飼料轉(zhuǎn)化效率、生長(zhǎng)性能具有不利影響。李玉保等（2005）研究證實(shí)，高溫環(huán)境可影響雞的特異性免疫反應(yīng)。鉻在三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)（碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)）代謝方面起重要作用，因?yàn)樗瞧咸烟悄褪芤蜃拥某煞?，可以增?qiáng)胰島素功能。應(yīng)激和疾病會(huì)增加尿中鉻的排泄量，并可能加劇邊際鉻缺乏癥，而補(bǔ)充鉻在減少應(yīng)激副作用、降低皮質(zhì)醇水平和提高免疫力方面有效（徐熔澤，2017）。通常這些因素在提高生長(zhǎng)性能中十分重要。目前針對(duì)家禽鉻的適宜添加水平研究有限，同時(shí)大多數(shù)家禽飼料基本上是由植物源成分組成的，通常鉻含量很低。蛋氨酸鉻是一種新發(fā)現(xiàn)的有機(jī)鉻源，其生物利用度和作用在肉雞中報(bào)道較少。因此，本研究旨在探討不同濃度的蛋氨酸鉻對(duì)熱應(yīng)激肉雞免疫反應(yīng)的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物分組與日糧 將剛孵化的288 只體重接近的雄性肉雞隨機(jī)分為4 組，每組4 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)18 只。各組日糧分別以蛋氨酸鉻（1000 mg 鉻/kg）的形式在基礎(chǔ)日糧（表1）中添加0、0.2、0.4 和0.8 mg/kg 鉻。試驗(yàn)日糧為粉料形式，分為1 ～21 d 和22 ～42 d 兩階段進(jìn)行。

表1 1 ～42 d 肉雞日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

分別于出生后第4 天和第13 天口服傳染性支氣管炎活疫苗。所有雛雞均于出生后第9 天肌內(nèi)接種新城疫滅活疫苗。

1.2 樣品采集與分析 在試驗(yàn)中期（21 d）和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（42 d），每個(gè)重復(fù)選擇平均體重接近的2只肉雞，通過翅下靜脈采集血5 mL（使用EDTA作為抗凝血?jiǎng)?，樣品?500 g 離心15 min，分離血漿用于測(cè)定新城疫和傳染性支氣管炎病毒的抗體效價(jià)。利用血凝抑制試驗(yàn)評(píng)估新城疫病毒抗體滴度，并以2 為對(duì)數(shù)底數(shù)表示。用ELISA 法測(cè)定傳染性支氣管炎病毒抗體效價(jià)。

血液涂片使用May-Greenwald-Giemsa 染色，異嗜細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的比例以總共100 個(gè)細(xì)胞 為 基 礎(chǔ)（Gross 和Siegel，1983）。用ELISA 試劑盒測(cè)定血漿皮質(zhì)醇濃度，OD 值設(shè)為450 nm，根據(jù)試劑盒公司建議的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算皮質(zhì)醇濃度（mg/mL）。在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)（42 d），每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2 只肉雞進(jìn)行屠宰，收集脾臟和法氏囊，稱重，以其與活體肉雞體重比值來表示相對(duì)重量。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)分析采用SAS 軟件完全隨機(jī)設(shè)計(jì)的方差分析程序，采用Duncan’s 法進(jìn)行多重比較，P ＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 蛋氨酸鉻對(duì)肉雞抗體滴度的影響 由表2可 知，0.8 mg/kg 鉻 組21 和42 d 肉 雞 血 液 新 城疫抗體滴度較對(duì)照組分別顯著提高43.98% 和46.10%（P ＜0.05），同時(shí)21 d 肉雞傳染性支氣管炎抗體滴度顯著提高35.76%（P ＜0.05），各組42 d 肉雞傳染性支氣管炎抗體滴度無顯著影響（P ＞0.05）。此外，對(duì)照組肉雞在21 d 血漿皮質(zhì)醇濃度較其他組分別提高15.90%、20.85% 和24.45%（P ＜0.05），同時(shí)對(duì)照組肉雞在42 d 時(shí)，血漿皮質(zhì)醇濃度較0.4 和0.8 mg/kg 鉻組顯著提高13.02% 和18.68%（P ＜0.05）。

2.2 蛋氨酸鉻對(duì)肉雞淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響由 表3 可 知，0.4 和0.8 mg/kg 鉻 組21 d 淋 巴 細(xì)胞數(shù)量較對(duì)照組顯著提高8.87% 和12.37%（P＜0.05），但嗜異細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值顯著降低22.73% 和25.76%（P ＜0.05）。 各 組 肉 雞 在21 日齡時(shí)血液嗜異細(xì)胞數(shù)量無顯著影響（P ＞0.05）。0.8 mg/kg 鉻組42 d 嗜異細(xì)胞數(shù)量及嗜異細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值最低（P ＜0.05），但血液淋巴細(xì)胞數(shù)量最高（P ＜0.05）。

2.3 蛋氨酸鉻對(duì)肉雞淋巴器官相對(duì)重量的影響從表4 可知，各組肉雞法氏囊和脾臟相對(duì)重量無顯著差異（P ＞0.05）。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)，各處理組肉雞在21 和42 d 時(shí)兩種病毒抗體滴度（新城疫和傳染性支氣管炎）高于對(duì)照組。據(jù)報(bào)道，在高溫應(yīng)激下，以氯化鉻或酵母鉻的形式補(bǔ)充2 或10 mg/kg 的鉻可以提高肉雞對(duì)新城疫的抗體滴度（Guo 等，1999），同時(shí)Lee等（2003）也報(bào)道了以吡啶甲酸鉻的形式補(bǔ)充0.4 mg/kg 鉻可以提高肉雞新城疫的抗體效價(jià)。本試驗(yàn)研究結(jié)果均與這些研究結(jié)果一致。但也有一些關(guān)于補(bǔ)充鉻對(duì)血清皮質(zhì)醇水平無顯著影響的報(bào)道（Pollard 等，2002）。

表2 日糧添加不同水平蛋氨酸鉻對(duì)肉雞抗體滴度的影響

表3 日糧添加不同水平蛋氨酸鉻對(duì)肉雞嗜異細(xì)胞與淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響

表4 日糧添加不同水平蛋氨酸鉻對(duì)肉雞淋巴器官相對(duì)重量的影響 %

各種應(yīng)激源如寒冷應(yīng)激、短暫暴露于高溫、隔離和運(yùn)輸?shù)葧?huì)增加血漿皮質(zhì)醇濃度，而吡啶甲酸鉻中高濃度的鉻可以直接抑制激動(dòng)劑，刺激腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞系中的皮質(zhì)醇分泌（Kim 等，2006）。熱應(yīng)激條件下雛雞抗體產(chǎn)生量下降，這種減少可能是由于應(yīng)激下炎癥細(xì)胞因子的增加間接導(dǎo)致的，因?yàn)檠装Y細(xì)胞因子可以通過刺激下丘腦產(chǎn)生促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子，后者可增加垂體分泌促腎上腺皮質(zhì)激素，后者可以刺激腎上腺產(chǎn)生皮質(zhì)酮，而皮質(zhì)酮可以抑制抗體的產(chǎn)生（Gross 和Sigel，1992）。

在本研究中，0.8 mg/kg 鉻增加了淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，降低了嗜異細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值，嗜異細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值是確定家禽應(yīng)激的一個(gè)重要指標(biāo)，因此，本研究結(jié)果說明了鉻緩解了肉雞的熱應(yīng)激。鉻增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的確切機(jī)制尚不清楚。但本研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加鉻降低了血漿皮質(zhì)醇水平。皮質(zhì)醇是最重要的糖皮質(zhì)激素，具有免疫抑制作用，抑制抗體、淋巴細(xì)胞功能和白細(xì)胞群的產(chǎn)生和作用。日糧補(bǔ)充蛋氨酸鉻對(duì)肉雞淋巴器官相對(duì)重量無顯著影響。Toghyani 等（2007）報(bào)道，在熱應(yīng)激條件下，肉雞日糧中以吡啶甲酸鉻的形式補(bǔ)充鉻后，淋巴器官相對(duì)重量無顯著影響，但未補(bǔ)充鉻的試驗(yàn)組淋巴器官重量有所下降，其推測(cè)可能是由于熱應(yīng)激條件下采食量的減少，降低了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的供應(yīng)。

4 結(jié)論

總的來說，肉雞日糧以蛋氨酸鉻的形式補(bǔ)充0.8 mg/kg 鉻可以改善熱應(yīng)激條件下肉雞的免疫反應(yīng)，但后續(xù)研究需進(jìn)一步評(píng)估蛋氨酸鉻對(duì)不同飼養(yǎng)條件下肉雞生長(zhǎng)性能和免疫反應(yīng)的影響。