EB-DNA檢測(cè)對(duì)鼻咽癌早期診斷及預(yù)后評(píng)估的臨床意義

尚 潔 高 娟 楊 青

鼻咽癌是指發(fā)生于鼻咽腔頂部和側(cè)壁的惡性腫瘤，是我國(guó)高發(fā)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率位居耳鼻咽喉惡性腫瘤之首。數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)及東南亞地區(qū)鼻咽癌發(fā)病率較高，約為10/10萬，國(guó)內(nèi)廣東、廣西、湖南、福建、香港、臺(tái)灣等地區(qū)為高發(fā)地[1-3]。鼻咽癌發(fā)病具有明顯的種族、地區(qū)和家族聚集現(xiàn)象，全球約80%的鼻咽癌發(fā)生于我國(guó)，鼻咽癌高發(fā)年齡為30～50歲，男性發(fā)病率為女性的2～3倍[4-5]。目前的研究指出，鼻咽癌發(fā)病機(jī)制尚不清晰，但一般認(rèn)為遺傳因素、環(huán)境因素、病毒感染等均對(duì)鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展有一定影響。EB病毒是皰疹病毒科嗜淋巴細(xì)胞病毒屬的成員，基因組為DNA，EB病毒具有在體內(nèi)外專一性的感染人類及某些靈長(zhǎng)類B細(xì)胞的生物學(xué)特征，約有90%以上的健康成人攜帶該病毒，目前有較多研究指出，EB病毒的感染與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[6-8]。目前雖然已有研究證實(shí)EB病毒與鼻咽癌的發(fā)生發(fā)展存在聯(lián)系，但關(guān)于EB-DNA檢測(cè)在鼻咽癌早期診斷及預(yù)后判斷中價(jià)值的研究較少[9-11]。本文作者通過研究發(fā)現(xiàn)，EB-DNA檢測(cè)在鼻咽癌早期診斷及預(yù)后判斷中具有較重要的臨床意義，能夠用于評(píng)估鼻咽癌分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等指標(biāo)，有可能成為鼻咽癌的重要血清學(xué)標(biāo)志物，現(xiàn)詳述如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選擇2015年2月至2018年2月于我院確診的93例鼻咽癌患者為研究對(duì)象，按照病情分別將其分為A組(初診33例)、B組(放療后病情持續(xù)緩解者20例)、C組(放療后病情出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移24例)和D組(放療后出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)者16例)，另選同期于我院接受體格檢查的30例健康個(gè)體為健康對(duì)照組，選取同期于我院確診為非鼻咽癌的30例患者為病例對(duì)照組。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①鼻咽癌患者均經(jīng)病理學(xué)檢測(cè)并確診；②意識(shí)清晰能夠配合實(shí)施調(diào)研；③病歷資料齊全；④調(diào)研經(jīng)醫(yī)院倫理學(xué)會(huì)批準(zhǔn)實(shí)施；⑤患者及其家屬對(duì)本次調(diào)研過程、方法、原理清楚明白并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并精神疾患者；②合并嚴(yán)重肝腎功能障礙者；③依從性較差者。剔除標(biāo)準(zhǔn)：①隨訪期間失訪者；②主動(dòng)要求退出調(diào)研者。

1.2 方法

分別采集6組個(gè)體外周靜脈血5 ml置于EDTA抗凝管中，離心后分離上層血漿，置于-80 ℃條件下凍存，并使用試劑盒提取血漿DNA，操作嚴(yán)格按照說明書實(shí)施，并計(jì)算不同組別患者血漿EB-DNA含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般臨床資料對(duì)比

經(jīng)評(píng)估對(duì)比發(fā)現(xiàn)，6組個(gè)體一般臨床資料如性別、年齡等對(duì)比差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 一般臨床資料對(duì)比

2.2 不同組別EB-DNA檢出率差異性分析

經(jīng)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，A組患者EB-DNA檢出率為93.94%(31/33)，B組檢出率為55.00%(11/20)，C組檢出率為95.83%(23/24)，D組檢出率為93.75%(15/16)，健康對(duì)照組檢出率為3.33%(1/30)，病例對(duì)照組檢出率為13.33%(4/13)。對(duì)比顯示，A、C、D 3組患者EB-DNA檢出率明顯高于B組、健康對(duì)照組和病例對(duì)照組(P<0.05)；B組檢出率明顯高于對(duì)照組(P<0.05)。

2.3 不同分期初診鼻咽癌患者EB-DNA中位拷貝數(shù)對(duì)比

將A組患者按照T、N、M分期進(jìn)行對(duì)比，發(fā)現(xiàn)T3～T4期患者EB-DNA中位拷貝數(shù)高于T1～T2期患者，N0～N1期患者EB-DNA中位拷貝數(shù)低于N2～N3期患者，M0期患者EB-DNA中位拷貝數(shù)低于M1期患者(P<0.05)，如表2所示。

表2 不同分期初診鼻咽癌患者EB-DNA中位拷貝數(shù)對(duì)比

2.4 不同EB-DNA拷貝水平鼻咽癌患者預(yù)后對(duì)比

將33例初診鼻咽癌患者按照EB-DNA中位數(shù)將其分為≥40000拷貝/ml(15例)和<40000拷貝/ml(18例)2組。隨訪20個(gè)月，≥40000拷貝/ml患者無復(fù)發(fā)生存率為46.67%(7/15)，<40000拷貝/ml患者為88.89%(16/18)，2組對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.906，P=0.02)。

3 討論

鼻咽癌是一種高發(fā)于我國(guó)南部地區(qū)的惡性腫瘤，臨床表現(xiàn)較為復(fù)雜，包括鼻出血、頭痛、視力障礙、聽力下降等，部分患者還會(huì)出現(xiàn)腦神經(jīng)損害。目前鼻咽癌的首選治療手段仍為放射治療，但臨床實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，即使經(jīng)過合理的放射治療和規(guī)范的綜合治療，部分患者仍會(huì)出現(xiàn)局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[12-14]。及早準(zhǔn)確的診斷是提高鼻咽癌患者生存率的基礎(chǔ)，目前鼻咽癌常用的復(fù)診手段仍主要為影像學(xué)檢查，但鼻咽癌患者接受治療后會(huì)出現(xiàn)局部水腫、組織結(jié)構(gòu)紊亂、纖維化、黏膜炎或疤痕，明顯改變鼻咽癌患者的CT或MRI征象，影響臨床醫(yī)師對(duì)鼻咽癌病程的判斷[15]。此外還有研究指出，CT、MRI等影像學(xué)檢查對(duì)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病灶診斷特異性較低，難以早期實(shí)施評(píng)估[16]。病理學(xué)檢測(cè)仍是鼻咽癌復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，但一方面復(fù)發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶標(biāo)本采集難度較大，尤其是部分黏膜下復(fù)發(fā)或鼻咽深部復(fù)發(fā)灶，另一方面病理學(xué)檢測(cè)為侵入性操作，可能會(huì)對(duì)預(yù)后產(chǎn)生一定的不良影響，因而實(shí)施便捷性較低[17-18]。

EB病毒是一種于1964年被學(xué)者Epstein和Barr培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)的，該病毒屬于皰疹病毒科R亞科，能夠感染人和靈長(zhǎng)類動(dòng)物的B淋巴細(xì)胞。一般情況下EB細(xì)胞感染人后會(huì)終生潛伏存在，但部分個(gè)體也會(huì)出現(xiàn)惡性轉(zhuǎn)化進(jìn)而形成腫瘤，如淋巴瘤、鼻咽癌等，已有的大量研究表明EB病毒是鼻咽癌的重要誘發(fā)因子，在鼻咽癌患者體內(nèi)常常存在高滴度的抗EB病毒不同抗原的特異性抗體。學(xué)者羅欣等[19]的研究指出，BE病毒在B淋巴細(xì)胞內(nèi)會(huì)發(fā)生增殖，以環(huán)狀DNA的形式游離于細(xì)胞質(zhì)中，并整合于染色體內(nèi)，當(dāng)鼻咽癌細(xì)胞死亡后，整合在DNA內(nèi)的EB病毒片段會(huì)釋放入血，EB-DNA拷貝數(shù)會(huì)出現(xiàn)明顯上升，該學(xué)者認(rèn)為EB-DNA能夠用于鼻咽癌患者病情評(píng)估及預(yù)后判斷中。學(xué)者鄭傳勝等[20]的研究也指出，EB-DNA能夠用于鼻咽癌早期診斷、預(yù)后判斷和療效監(jiān)測(cè)中，其對(duì)鼻咽癌診斷的靈敏度和特異度可達(dá)96.00%和93.00%。

本文作者通過設(shè)立不同分組的方式，就EB-DNA對(duì)鼻咽癌早期診斷及預(yù)后判斷的臨床意義進(jìn)行了分析。結(jié)果顯示，鼻咽癌患者EB-DNA的檢出率明顯高于對(duì)照組和其他病例對(duì)照組患者，進(jìn)一步的對(duì)比可以發(fā)現(xiàn)，接受化療后出現(xiàn)復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者EB-DNA拷貝數(shù)明顯高于化療后持續(xù)好轉(zhuǎn)的患者，這些都提示EB-DNA對(duì)鼻咽癌診斷具有較強(qiáng)的特異性和靈敏性，可以作為鼻咽癌初篩手段之一。而后本文作者又將鼻咽癌患者按照TNM分期進(jìn)行了分組對(duì)比，結(jié)果顯示T3～T4期患者EB-DNA中位拷貝數(shù)高于T1～T2期患者，N0～N1期患者EB-DNA中位拷貝數(shù)低于N2～N3期患者，M0期患者EB-DNA中位拷貝數(shù)低于M1期患者，這些結(jié)果都提示鼻咽癌患者血清EB-DNA含量與其分期存在一定相關(guān)性，分析其原因與羅欣的研究結(jié)果一致，為腫瘤細(xì)胞死亡后EB-DNA入血所致。學(xué)者杜云等[21]的研究則指出，隨著鼻咽癌患者病理分期的增加，腫瘤細(xì)胞會(huì)不斷凋亡使EB-DNA入血，使血清EB-DNA水平提升，這對(duì)鑒別鼻咽癌分期具有一定參考價(jià)值。學(xué)者葉倩等[22]的研究則直接指出，EB-DNA與鼻咽癌患者TNM分期相關(guān)，EB-DNA濃度越高，患者分期越晚。最后本文作者還就EB-DNA與鼻咽癌預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行了分析，通過將初診鼻咽癌患者按照EB-DNA水平的不同進(jìn)行分組對(duì)比發(fā)現(xiàn)，EB-DNA水平較高的患者無進(jìn)展生存期明顯低于EB-DNA水平較低的患者。學(xué)者令狐穎等[23]通過將130例鼻咽癌患者按照EB抗體濃度進(jìn)行分組的方式，發(fā)現(xiàn)抗體低、中、高滴度組患者近期放療有效率分別為90.32%、68.57%和51.56%，平均生存時(shí)間分別為(23.78±1.10)、(27.39±2.45)和(31.11±2.10)個(gè)月，各組間對(duì)比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，該學(xué)者認(rèn)為EB-DNA可以用于鼻咽癌患者近期療效及遠(yuǎn)期生存情況的評(píng)估因素，這與本文的研究結(jié)果相一致。

總而言之，EB-DNA檢測(cè)在鼻咽癌早期診斷及預(yù)后判斷中具有較重要的臨床意義，能夠用于評(píng)估鼻咽癌分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等指標(biāo)，有可能成為鼻咽癌的重要血清學(xué)標(biāo)志物。