虹鱒魚細(xì)菌性腎病風(fēng)險(xiǎn)分析

文/王靜波 徐立蒲 王小亮 張文 王姝 曹歡 呂曉楠

2018年6月中旬，甘肅省某鮭鱒魚養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)口虹鱒三倍體發(fā)眼卵孵化出的魚苗出現(xiàn)連續(xù)發(fā)病死亡情況，累計(jì)死亡率達(dá)到50%，發(fā)病期間養(yǎng)殖水溫11℃～12℃。發(fā)病魚體色發(fā)黑，均有腹水，解剖后可見腎、肝腫大。腎臟普遍可見直徑2mm～4mm的顆粒狀肉芽腫（圖1）。病魚腎組織印片經(jīng)革蘭氏染色后在高倍視野下（1000×）可見大量革蘭氏陽(yáng)性短桿菌，長(zhǎng)約1μm（圖2）。

取患病魚的腎組織，樣品編號(hào)分別為180705（簡(jiǎn)寫：05）、180712（簡(jiǎn)寫：12），分別經(jīng)研磨、抽提核酸、PCR及套式PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，均未見383 bp片段，而均可見320 bp片段特異性擴(kuò)增條帶，陰性對(duì)照和空白對(duì)照無(wú)擴(kuò)增條帶（圖3）。套式PCR產(chǎn)物經(jīng)純化測(cè)序及BLAST同源性檢索，結(jié)果顯示其與鮭腎桿菌的同源性最高。序列分析結(jié)果表明其與鮭腎桿菌ATCC 33209（GenBank登陸號(hào)：CP000910）同源性達(dá)99.67%。

上述結(jié)果提示患病魚腎組織中存在的大量革蘭氏陽(yáng)性短桿菌是鮭腎桿菌。結(jié)合發(fā)病魚癥狀，判斷該場(chǎng)發(fā)病虹鱒患細(xì)菌性腎病。

細(xì)菌性腎?。╞acterial kidney disease，BKD）是由鮭腎桿菌（Renibacterium salmoninarum）引起的鮭科魚類病害，是一種典型的慢性傳染病。目前尚無(wú)有效的治療藥物，因其危害性大曾被列為OIE必須申報(bào)疫病。

鮭腎桿菌（Renibacterium salmoninarum）是革蘭氏陽(yáng)性桿菌中腎桿菌屬的唯一種，屬細(xì)胞內(nèi)寄生菌。腎桿菌為形狀規(guī)則的短桿菌，菌體大小在（0.3～1.5）μm×（0.1～1）μm之間，棒狀、常成對(duì)或短鏈狀，呈多形性；無(wú)莢膜；不產(chǎn)生孢子，不能運(yùn)動(dòng)，不產(chǎn)酸，是鮭科魚的專性病原菌。鮭腎桿菌在體外培養(yǎng)時(shí)對(duì)生長(zhǎng)條件要求苛刻，培養(yǎng)基要求含有半胱氨酸和血清，或血清的成分，且需要較長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)（15℃培養(yǎng)2周～3周或更長(zhǎng)）才能形成可見菌落。易感種類有鮭鱒，尤其是大馬哈魚（太平洋鮭）。

圖1 病魚腎臟可見顆粒狀肉芽腫（箭頭示）

圖2 腎組織印片中可見革蘭氏陽(yáng)性短桿菌（1000×）

圖3 病魚組織的鮭腎桿菌P 57表面蛋白基因 PCR和套式PCR擴(kuò)增電泳圖

上世紀(jì)三十年代，美國(guó)首次報(bào)道棕鮭、虹鱒和溪鱒發(fā)生BKD。此后，加拿大、智利、英國(guó)、法國(guó)、德國(guó)、冰島、意大利、西班牙、南斯拉夫等地養(yǎng)殖的14種鮭科魚類報(bào)道發(fā)生BKD，均給當(dāng)?shù)氐孽q科魚養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成巨大的損失。我國(guó)2015年首次報(bào)道在養(yǎng)殖大鱗大麻哈魚體內(nèi)檢測(cè)到鮭腎桿菌。

這種細(xì)菌廣泛存在于淡水和海水環(huán)境，當(dāng)感染魚群出現(xiàn)漸進(jìn)性消瘦或其他明顯的癥狀時(shí)，已無(wú)治療價(jià)值。該細(xì)菌能通過(guò)精、卵垂直傳播，而且沒有有效的治療藥物。該病多呈較長(zhǎng)的潛伏期（慢性經(jīng)過(guò)），從感染后到死亡需要較長(zhǎng)的時(shí)間。發(fā)病較適宜的水溫范圍在4℃～20℃，但7℃以下一般多不易發(fā)病，18℃以上時(shí)的死亡率明顯降低，所以一般發(fā)病期水溫多在7℃～18℃。

風(fēng)險(xiǎn)分析與評(píng)估：我國(guó)2015年首次報(bào)道在流水養(yǎng)殖大鱗大麻哈魚體內(nèi)檢測(cè)到鮭腎桿菌，累計(jì)死亡率可達(dá)50%以上。2018年甘肅省某養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖6cm～8cm的進(jìn)口虹鱒三倍體發(fā)病，并在病魚體內(nèi)檢測(cè)到鮭腎桿菌，這也是我國(guó)首次報(bào)道在虹鱒魚體內(nèi)檢到鮭腎桿菌，累計(jì)死亡率可達(dá)50%。鑒于此，我國(guó)虹鱒魚養(yǎng)殖業(yè)疫病防控形勢(shì)嚴(yán)峻。據(jù)2017年中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒，我國(guó)鮭鱒魚總產(chǎn)量4.1萬(wàn)噸，其中鱒魚總產(chǎn)量3.7萬(wàn)噸（主要是虹鱒產(chǎn)量），約占鮭鱒魚總產(chǎn)量的90%，且虹鱒魚產(chǎn)量有逐年增長(zhǎng)趨勢(shì)，虹鱒魚已是我國(guó)重要的魚類養(yǎng)殖對(duì)象之一。由于缺少有效的敏感藥物治療細(xì)菌性腎病，因此只能采取預(yù)防措施，做好疫病監(jiān)測(cè)、苗種檢疫工作是未來(lái)控制細(xì)菌性腎病傳播的有效途徑。同時(shí)養(yǎng)殖者也應(yīng)高度關(guān)注引種工作，避免引入帶病苗種。根據(jù)OIE法典第1.2章《（疫?。┝腥朊浀臉?biāo)準(zhǔn)》：該病病原明確，且有成熟可靠的檢測(cè)方法；該病對(duì)鮭鱒魚危害極大，在我國(guó)已有點(diǎn)狀發(fā)生，該病是制約鮭鱒魚養(yǎng)殖健康發(fā)展的重要因素。我國(guó)尚有大部分養(yǎng)殖鮭鱒魚的地區(qū)沒有被感染，需要采取嚴(yán)格控制、撲滅等措施，防止擴(kuò)散。

防控措施：一是加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和檢疫，由于鮭腎桿菌可以隨苗種的流通而擴(kuò)散，因此加強(qiáng)對(duì)疫病的監(jiān)測(cè)與檢疫顯得尤為重要；二是魚卵消毒，該菌能通過(guò)精、卵垂直傳播，故在孵化期間也需要對(duì)魚卵進(jìn)行消毒處理，可以參考虹鱒魚傳染性造血器官壞死病防控中魚卵消毒方法進(jìn)行處理；三是對(duì)感染的場(chǎng)池、用具應(yīng)徹底消毒，以切斷傳染源。