不同培養(yǎng)基在沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)中的檢出效果觀察

黎青梅 黃煥宜 黎莉 何國(guó)華 陳冬玲

（陽(yáng)江市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 廣東 陽(yáng)江 529599）

沙門(mén)菌為腸道常見(jiàn)的革蘭陰性桿菌，是引起細(xì)菌性食物中毒、腸胃炎、傷寒等多種疾病的重要病原體之一[1-2]。沙門(mén)菌引起的腸胃炎和腹瀉具有潛伏期短，發(fā)展迅速，病情嚴(yán)重等特點(diǎn)[3]，全世界每年感染沙門(mén)菌的病人約9400 萬(wàn)，其中最終造成15.5 萬(wàn)死亡。在我國(guó)引起食物中毒的細(xì)菌中沙門(mén)菌占首位，嚴(yán)重威脅人類的身體健康。為了能夠有效找到沙門(mén)氏菌的檢驗(yàn)、分離、鑒定技術(shù)，我院對(duì)其進(jìn)行了研究，本文主要針對(duì)增菌后在不同培養(yǎng)基中對(duì)沙門(mén)氏菌檢出效果進(jìn)行分析。

1.材料

1.1 標(biāo)本來(lái)源

選取2018 年1 月—12 月在陽(yáng)江市人民醫(yī)院因急性腹瀉送檢的肛拭樣本200 例，納入標(biāo)準(zhǔn)：患者糞便如水樣便、稀便、膿血便、黏液便；大便鏡檢白細(xì)胞≥5/高倍視野）、可見(jiàn)紅細(xì)胞和巨噬細(xì)胞；不考慮采集樣本前患者是否使用過(guò)抗菌藥物。

1.2 儀器與試劑

SBG增菌液、木糖賴氨酸Tergitol 4（XLT4）培養(yǎng)基、SS平板、木糖賴氨酸脫氧膽鹽（XLD）、沙門(mén)菌顯色培養(yǎng)基（CAS）、沙門(mén)氏菌診斷血清，恒溫培養(yǎng)箱，生物安全柜，全自動(dòng)細(xì)菌鑒定及藥敏分析儀。

2.方法

2.1 肛拭樣本的接種

本實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組（SBG 增菌液接種法）和對(duì)照組（直接接種法）兩組，每例糞便樣本均分別采用SBG 增菌液接種法和直接接種法接種。實(shí)驗(yàn)組先采用SBG 增菌液增菌18 ～24 小時(shí)，后再轉(zhuǎn)種XLT4 培養(yǎng)基、SS 平板、XLD 培養(yǎng)基、CAS 培養(yǎng)基。對(duì)照組則未采用增菌法，直接接種XLT4 培養(yǎng)基、SS 平板、XLD培養(yǎng)基、CAS 培養(yǎng)基。35℃培養(yǎng)18 ～24 小時(shí)后，觀察平板上菌落生長(zhǎng)情況。

2.2 沙門(mén)菌的鑒定與分型

選取可疑菌落（在XLT4 培養(yǎng)基、SS 平板、XLD 培養(yǎng)基為中等大小，黑色菌落；CAS 培養(yǎng)基為中等大小，紫色菌落）沙門(mén)菌的血清學(xué)鑒定和藥敏實(shí)驗(yàn)，血清學(xué)實(shí)驗(yàn)鑒定為沙門(mén)菌菌株送到廣東省疾病預(yù)防控制中心做血清分型。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

為減少誤差，所有培養(yǎng)基均由同組檢驗(yàn)科醫(yī)師進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用SPSS23.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.結(jié)果

3.1 增菌對(duì)處理提高沙門(mén)菌檢出率

實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的沙門(mén)菌陽(yáng)性例數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）。因此，通過(guò)增菌處理后，樣本中的沙門(mén)菌檢出例數(shù)得到顯著提高，更能有效地檢出沙門(mén)菌，見(jiàn)表1。

表1 兩組標(biāo)本沙門(mén)菌檢出結(jié)果比較（例）

3.2 4 種培養(yǎng)基培養(yǎng)增菌后沙門(mén)菌檢出率

為了進(jìn)一步考察SBG 增菌后何種培養(yǎng)基（XLT4，SS，XLD 和CAS）培養(yǎng)更能有助于沙門(mén)菌檢出，對(duì)增菌后的200 例標(biāo)本采用檢出率指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。其中CAS 沙門(mén)菌陽(yáng)性例數(shù)最多，檢出率也最高（27.5%）。XLT4 與SS 檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；XLT4 與XLD 檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；XLT4 與CAS 檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；SS 與XLD 檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；SS 與CAS 檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；XLD 與CAS 檢出率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；即兩兩比較檢出率差異都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表2。

表2 增菌后不同培養(yǎng)基沙門(mén)菌檢出率比較（n=200）

3.3 4 種培養(yǎng)基增菌后沙門(mén)菌準(zhǔn)確率

實(shí)驗(yàn)組200 例糞便樣本檢出的可疑沙門(mén)氏菌，經(jīng)廣東省疾病預(yù)防控制中心鑒定，確認(rèn)沙門(mén)氏菌49 例。其中，以CAS 培養(yǎng)出的沙門(mén)菌準(zhǔn)確率最高（98%）。經(jīng)比較，XLT4 與CAS 準(zhǔn)確率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；其余組合準(zhǔn)確率差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）；總體上，采用CAS 培養(yǎng)基培養(yǎng)準(zhǔn)確率略高于其它三種培養(yǎng)基，見(jiàn)表3。

表3 增菌后不同培養(yǎng)基沙門(mén)菌準(zhǔn)確率比較

3.4 沙門(mén)菌菌株分型

實(shí)驗(yàn)組經(jīng)鑒定和血清分型，確診49 株沙門(mén)菌，其中以鼠傷寒沙門(mén)菌變種為主，其次是腸炎沙門(mén)菌和鼠傷寒沙門(mén)菌，共占69.38%（34/49），各沙門(mén)菌血清型分離結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 49 株沙門(mén)菌血清型分布

4.討論

沙門(mén)菌菌體大小約（0.6 ～0.9）×（1 ～3）微米，無(wú)芽胞，無(wú)莢膜。除雞白痢沙門(mén)氏菌和雞傷寒沙門(mén)氏菌外，大多有周身鞭毛。營(yíng)養(yǎng)要求不高，分離培養(yǎng)常采用腸道選擇鑒別培養(yǎng)基。生化反應(yīng)對(duì)本屬菌的鑒別具有重要參考意義。不液化明膠，不分解尿素，不產(chǎn)生吲哚，不發(fā)酵乳糖和蔗糖，能發(fā)酵葡萄糖、甘露醇、麥芽糖和衛(wèi)芽糖，大多產(chǎn)酸產(chǎn)氣，少數(shù)只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣[4]。VP 試驗(yàn)陰性，有賴氨酸脫羧酶。對(duì)熱抵抗力不強(qiáng)，在60℃ 15 分鐘可被殺死。在水中存活2 ～3 周。在5%的石炭酸中，5 分鐘死亡。

增菌是沙門(mén)菌培養(yǎng)重要的一步，常用于臨床實(shí)驗(yàn)室細(xì)菌的分離培養(yǎng)。SBG 增菌液是一種選擇性培養(yǎng)基，含有蛋白胨、酵母膏粉、甘露醇、亞硒酸氫鈉、磺胺吡啶鈉和磺綠等成分，既可以滿足沙門(mén)菌及一般細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖所必需的碳源、氮源和微量元素，有利于受損傷的沙門(mén)菌修復(fù)，使受損傷的沙門(mén)菌恢復(fù)到損傷前的穩(wěn)定的生理狀態(tài)，又可以抑制革蘭氏陽(yáng)性菌和非沙門(mén)氏菌的大多數(shù)革蘭氏陰性腸道菌，利于沙門(mén)菌的分離培養(yǎng)[5]。我院研究糞便標(biāo)本采用運(yùn)送培養(yǎng)基和一次性采樣拭子采集，可保證標(biāo)本運(yùn)送與保存時(shí)致病菌不受影響，可排除分析前標(biāo)本的影響。

直接接種的糞便樣本檢出率低，本實(shí)驗(yàn)中檢出率僅為4.5%，其原因一方面由于糞便樣本中存在的沙門(mén)菌數(shù)量少或采樣前服用抗菌藥物導(dǎo)致的沙門(mén)菌減少而低于培養(yǎng)的閾值；另一方面由于沙門(mén)菌抵抗力不強(qiáng)，在采樣后到接種期間受環(huán)境各種因素如溫度、酸堿度的影響，造成不同程度的損傷。綜合以上各種因素的影響最終導(dǎo)致檢出率減低，結(jié)果出現(xiàn)假陰性。所以增菌意義重大。

使用增菌液結(jié)合培養(yǎng)基培養(yǎng)是檢測(cè)沙門(mén)菌感染最簡(jiǎn)便、最快捷、最經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的方法，且該方法檢測(cè)準(zhǔn)確率較高，大大減少了人力資源和實(shí)驗(yàn)材料的浪費(fèi)， 但在這次研究發(fā)現(xiàn)，反復(fù)出現(xiàn)了如銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、變形菌、摩氏摩根菌等假陽(yáng)性菌，使用不同培養(yǎng)基最終檢出率也有一定的差異，不同菌型的細(xì)菌區(qū)分較為困難，在實(shí)際應(yīng)用中也沒(méi)有明確的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，因?yàn)椴煌牟≡](méi)有適合其生長(zhǎng)的特定培養(yǎng)基。因此臨床在對(duì)沙門(mén)菌感染患者進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，可使用兩種或多種培養(yǎng)基分別進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)，以提高陽(yáng)性檢出率，減少漏診或誤診。

綜上所述，本結(jié)果表明，SBG 增菌液增菌的實(shí)驗(yàn)組，與直接培養(yǎng)的對(duì)照組相比，檢出率明顯提高。通過(guò)增菌后，若使用單個(gè)培養(yǎng)基可考慮CAS 培養(yǎng)基，沙門(mén)菌培養(yǎng)檢出率和準(zhǔn)確性較高；若聯(lián)合兩種培養(yǎng)建可考慮CAS 培養(yǎng)基和SS 培養(yǎng)基。臨床操作時(shí)可根據(jù)實(shí)際情況選擇培養(yǎng)基類型。