降脂膠囊的質量標準提升研究

曾芳俐 張磊 馮華

【摘?要】?目的： 建立降脂膠囊的質量標準研究。方法： 采用薄層色譜法鑒別制劑中的葛根及葛根素;采用高效液相色譜法對制劑中的活性成分葛根素進行含量測定，用DiamosilC18（4.6mm×250mm，5μm）為色譜柱，甲醇-水（30∶70）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為250 nm，柱溫35 ℃。結果： 在薄層鑒別色譜中，葛根和葛根素斑點清晰分離，效果好，Rf值達到要求，陰性對照無干擾。含量測定中葛根素在32.32～290.88μg的范圍內與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9999;專屬性強、重現(xiàn)性好，平均回收率為99.15%、RSD為0.66%（n=6）。結論： 所建立的鑒別方法操作簡單，專屬性強;定量方法穩(wěn)定靈敏，重現(xiàn)性良好，該標準可以作為降脂膠囊的質量控制。

【關鍵詞】?降脂膠囊;薄層色譜法;高效液相色譜法;質量標準

【中圖分類號】R268?【文獻標志碼】 A?【文章編號】1007-8517（2020）17-0035-04

Abstract：Objective To establish the quality standard of Jiangzhi capsule.Methods Radix puerariae and puerarin in the preparation were identified by TLC， and the content of Puerarin in the preparation was determined by HPLC. Diamosil C18 （4.6 mm × 250 mm， 5 μm） was used as the column， methanol water （30∶70） as the mobile phase， the flow rate was 1.0mL/min， the detection wavelength was 250nm， the column temperature was 35 ℃. Results In TLC， the spots of puerarin and puerarin were separated clearly， the effect was good， RF value met the requirements， and negative control had no interference. In the content determination， puerarin has a good linear relationship with peak area in the range of 32.32-290.88 μg，r=0.9999; It has strong specificity and good reproducibility， with an average recovery of 99.15% and RSD of 0.66% （n=6）. Conclusion The established identification method is simple and specific， and the quantitative method is stable， sensitive and reproducible， which can be used as the quality control of Jiangzhi capsule.

Keywords：Jiangzhi Capsule;TLC;HPLC;Quality Standard

降脂膠囊主要由葛根、何首烏、銀杏葉、山楂、水蛭、海藻六味中藥材組成[1]，具有消食除痰，活血祛瘀功效。用于脾運失常所致的頭暈、頭痛、胸悶、四肢沉重及高血脂等癥。目前，該制劑已應用于臨床治療中，由于該中藥復方制劑具有藥味較多，成分復雜等特點，現(xiàn)行標準難以保證降脂膠囊質量。為有效控制降脂膠囊的生產質量，本文對其質量標準進行了系統(tǒng)的研究。

1?儀器與材料

1.1?儀器?島津 LC-20AD高效液相色譜議（包括二元泵，紫外檢測器，柱溫箱，自動進樣器，Shimadzu分析儀器工作站和處理軟件），DiamosilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）為色譜柱;AB265-S型梅特勒電子天平（北京中恒日鑫科技有限公司），KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2?材料?葛根對照藥材、葛根素對照品（購于中國食品藥品檢定研究院，批號分別：121551-201103，110752-201806 ），甲醇為色譜純（天津市科密歐化學試劑有限公司，批號：20180409），水為娃娃哈純凈水，其他試劑均為分析純，3批降脂膠囊（批號分別為：161201、180309、180901）遵義市中醫(yī)院購買，陰性樣品自制。

2?方法與結果

2.1?薄層鑒別[2-6]?取樣品約2.0 g，加甲醇10 mL，放置2小時，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇0.5 mL使溶解，作為供試品溶液。另取葛根對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液，再取葛根素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液，同樣品制法制成陰性樣品溶液。吸取上述4種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G板上，以三氯甲烷-甲醇-水（10∶3∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。結果表明，分離度好，斑點顯色清晰，而陰性無干擾，見圖1。

2.2?含量測定[2-9]2.2.1?色譜條件?DiamosilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）為色譜柱，甲醇-水（30∶70）為流動相，流速1.0 mL/min，檢測波長為250 nm，柱溫35 ℃。進樣量10 μL，相連兩峰分離度應符合規(guī)定，理論塔板數(shù)按葛根素峰計，應不低于4000。

2.2.2?對照品溶液的制備?精密稱取葛根素照品適量，加甲醇溶解制成含葛根素16.16 μg/mL的對照品溶液，搖勻，用0.45 μm 的微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3?供試品溶液制備?取內容物約1.0 g（批號：180901），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25 mL，超聲處理30 min，取出，放冷至室溫，用甲醇補足損失的重量，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4?陰性溶液制備?取缺葛根藥材處方下自制陰性樣品，按“2.2.3”項下供試品溶液制備方法制備成陰性對照溶液。精密吸取10 μL注入高效液相色譜儀，按照色譜條件下測定，結果表明陰性對照的色譜圖在葛根素相應的保留時間無干擾峰，詳見色譜圖2。

2.2.5?線性關系的考察?精密吸取對照品溶液2 μL、6 μL、10 μL、14 μL、18 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積，分別以葛根素濃度（μg）為橫坐標，峰面積積分值（A）為縱坐標，繪制標準曲線，計算，回歸方程為：Y=63415X-301.5，R = 0.9999;在32.32～290.88 μg/mL范圍內呈良好的線性關系。

2.2.6?精密度試驗?精密吸對照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀中，連續(xù)測定6次，記錄峰面積，結果葛根素峰面積的RSD為1.33%%，結果表明儀器精密度良好。

2.2.7?穩(wěn)定性試驗?分別吸?。ㄅ?80901）同一供試品溶液于0、4、8、12、16、20、24 h，精密吸（批號180901）樣品制備的供試品溶液10 μL進樣，測得峰面積，RSD均值為0.12%，表明在24 h內穩(wěn)定。

2.2.8?重復性試驗 取同一批樣品（批號180901）6份，精密稱定，按照“2.2.3”項下方法制備成供試品溶液。測定峰面積，計算葛根素平均含量為0.36 mg/g，RSD為0.13%，結果表明重復性好。

2.2.9?加樣回收試驗取（已知含量含葛根素0.36 mg/g）的樣品6份，每份約0.5 g，精密稱定，精密稱取葛根素對照品適量，按“2.2.3”項下的方法操作，計算回收率，葛根素平均回收率為99.15%、RSD為0.66%，見表1。

2.2.10?3批樣品含量測?結果詳見表2。

3?討論

葛根和葛根素的薄層鑒別研究中分別比較了含4%醋酸鈉的硅膠G薄層板、聚酰胺薄層板、硅膠G薄層板和硅膠 GF254 薄層板的效果，結果發(fā)現(xiàn)硅膠G薄層板清晰圓整和，硅膠GF254薄層板展開的斑點次之，Rf值到不到要求，而聚酰胺層析板和4%醋酸鈉的硅膠 G 薄層板的斑點分離不理想，所以鑒別過程中選擇硅膠G板用。試驗過程中，對不同的展開劑進行了對比研究，分別嘗試了以二氯甲烷-甲 醇-水（7∶2.5∶0.25）、三氯甲烷-甲醇（8∶2）、三氯甲烷-甲醇-水 （10∶2.5∶0.25）、三氯甲烷-甲醇-水 （10∶3∶0.1）4 種展開劑。結果表明，以三氯甲烷-甲醇-水（10∶3∶0.1）為展開劑的斑點與周圍雜質斑點分離較好。

降脂膠囊為復方制劑，為了制定出一種適合降脂膠囊的科學、合理、可行的質量控制分析方法，本論文作了如下研究工作：本實驗使用甲醇-水（15∶85）、甲醇-0.1%磷酸溶液（10∶90）、乙睛-水（15∶85）作為流動相，但是葛根素分離效果不好，并且樣品峰不能回到基線上，所以最后確定以甲醇-水（30∶70）為流動相，不但分離效果最好，并且樣品峰能回到基線。

綜上所述，本試驗對降脂膠囊中的葛根分別進行了薄層鑒別和含量測定研究，所建立的方法穩(wěn)定可靠、重復性好、專屬性強，陰性無干擾，可以有效控制降脂膠囊中葛根藥材的質量，適用于降脂膠囊的質量控制。

參考文獻

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（收稿日期：2020-04-15?編輯：劉斌）