猴頭菇活性成分輔助治療運(yùn)動(dòng)障礙作用機(jī)制*

李翠紅

（鄭州科技學(xué)院，河南 鄭州 450064）

運(yùn)動(dòng)障礙是對(duì)一組神經(jīng)性疾病的總稱，主要是指自主運(yùn)動(dòng)的能力出現(xiàn)問題，身體動(dòng)作不連貫，肌肉不受控制，運(yùn)動(dòng)遲緩或不能完成一些自主運(yùn)動(dòng)[1]。運(yùn)動(dòng)障礙的主要表現(xiàn)有2類，一種表現(xiàn)為肌肉無力、運(yùn)動(dòng)遲緩甚至不能運(yùn)動(dòng)，如肌無力，肌肉萎縮、僵硬等；另一種就是肌肉間歇性或連續(xù)性的痙攣，如癲癇、舞蹈癥、面部肌肉抽搐和常見的帕金森綜合癥等[2-3]。由于運(yùn)動(dòng)性障礙主要是由于腦部神經(jīng)組織發(fā)生的病變導(dǎo)致的，因此除采用一些必要的康復(fù)訓(xùn)練組合治療外，對(duì)神經(jīng)和肌肉組織的營養(yǎng)必不可少。

猴頭菇（Hericium erinaceus） 是一種大型食藥兼用真菌，生長在闊葉林或針葉林的樹干樹洞中，成熟的猴頭菇子實(shí)體形態(tài)為絨毛狀的白色、略帶黃棕色，從形色上看很像毛猴的頭部，因而得名[4]。猴頭菇不僅是一道珍饈美味，近年來其藥用價(jià)值不斷被挖掘，利用猴頭菇制成的“健胃靈”、“復(fù)方猴頭沖劑”和“猴頭菌片”等中成藥在治療胃腸病癥、炎癥等方面取得了很好的療效[5]。猴頭菇中的多種生物活性物質(zhì)在抗氧化性、抗腫瘤和抗炎等方面具有獨(dú)特的功效，這為運(yùn)動(dòng)障礙癥的輔助治療提供了新思路[6]。

1 猴頭菇活性成分提取與鑒定

1.1 材料與試劑

猴頭菇（Hericium erinaceus） 購寧德市榮祥貿(mào)易有限公司，菌蓋直徑4 cm～8 cm，雜質(zhì)≤1.0%，水分≤92.0%。

蒸餾水、無水乙醇（AR），天津市天力化學(xué)試劑有限公司；鹽酸（AR）、鎂粉，西安市灞橋化學(xué)試劑廠；檸檬酸（99%），成都萬象宏潤生物科技有限公司；三氯化鋁（AR），武漢欣欣佳麗生物科技有限公司；1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶（1-Methyl-4-phenyl-1，2，3，6-tetrahydropyridine，MPTP），上海易匯生物科技有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

BS-224型電子天平，德國SARTORIUS公司；SJBC-1000型立式粉碎機(jī)，臺(tái)州市世金塑膠機(jī)械有限公司；UV紫外線燈，香河揚(yáng)紫特光電設(shè)備有限公司；DD-5M低速離心機(jī)，長沙湘智離心機(jī)儀器有限公司；SHA-C往復(fù)式水浴恒溫振蕩器，常州金壇良友儀器有限公司；DZF-6090型立式真空干燥箱，上海舍巖儀器有限公司；XD-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海賢德實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3 活性成分提取

采用醇提混合超聲波輔助提取猴頭菇活性物質(zhì)。取猴頭菇干品清洗干凈后切段、烘干、粉碎、過篩；按料液比為1∶20，依次加入無水乙醇和檸檬酸的混合液，在60℃下水浴提取4 h；自然冷卻后，設(shè)超聲波提取功率為700 W，提取時(shí)間為60 s，提取溫度為60℃進(jìn)行提?。惶崛∫赫婵粘闉V，濾液在40℃下真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)回收溶劑，然后用蒸餾水定容；3 000 r·min-1離心20 min后收集上清液，過濾、濃縮后即得猴頭菇活性物質(zhì)粗提取液。

1.4 活性成分定性檢測

1.4.1 多糖、多酚類和甾醇類物質(zhì)的定性檢測

將猴頭菇粗提取液放入高效液相色譜儀進(jìn)樣系統(tǒng)中，按操作流程通過圖譜信號(hào)來檢測所含物質(zhì)成分，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)樣品的色譜圖可以找到多糖和多酚的特定色譜，因此判斷提取液中含有多糖類和多酚類物質(zhì)。甾醇類物質(zhì)主要是麥角甾醇，同樣采用郭華等人提出的高效液相色譜法進(jìn)行定性測定[8]。

1.4.2 黃酮類物質(zhì)定性檢測

1）取少量猴頭菇粗提取液，加入乙醇溶解混勻后，再加入鹽酸，鎂粉，觀察溶液出現(xiàn)微櫻桃紅色。

2）另取少量猴頭菇粗提取液滴兩滴在干凈的濾紙上，再滴上1%三氯化鋁乙醇溶液，自然晾干后在紫外線燈下觀察，發(fā)現(xiàn)有黃綠色熒光斑點(diǎn)。通過以上2種反應(yīng)證明，猴頭菇粗提取液中含有黃酮類物質(zhì)。

2 小鼠運(yùn)動(dòng)障礙試驗(yàn)

2.1 試驗(yàn)動(dòng)物及分組

試驗(yàn)選用SPF級(jí)小鼠，體重20 g左右，由鄭州市惠濟(jì)區(qū)華興實(shí)驗(yàn)動(dòng)物養(yǎng)殖場提供，生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（豫） 2019-0002。按標(biāo)準(zhǔn)小動(dòng)物飼養(yǎng)條件，分籠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，采用腹腔注射的方法進(jìn)行MPTP模型的建立，給小鼠每天注射20 mg·kg-1的MPTP，連續(xù)2周。給藥后觀察小鼠，出現(xiàn)步態(tài)不穩(wěn)、弓背、豎毛、抽搐或顫抖，自主運(yùn)動(dòng)減少等現(xiàn)象時(shí)，說明MPTP模型成功。剔除吞咽和飲水困難的小鼠，同時(shí)，在轉(zhuǎn)棒儀和爬桿試驗(yàn)裝置進(jìn)行1周適應(yīng)性訓(xùn)練，剔除不合格的小鼠。

將合格小鼠隨機(jī)分5組，每組10只。運(yùn)動(dòng)障礙組：采用MPTP建模的小鼠；高劑量組：每日1次定時(shí)經(jīng)口灌胃400 mg·kg-1的猴頭菇粗提取液；中劑量組：每日1次定時(shí)經(jīng)口灌胃灌胃200 mg·kg-1的猴頭菇粗提取液；低劑量組：每日1次定時(shí)經(jīng)口灌胃灌胃100 mg·kg-1的猴頭菇粗提取液；對(duì)照組：不進(jìn)行MPTP建模，每日1次定時(shí)經(jīng)口灌胃小鼠同等劑量的純凈水。以上各組均連續(xù)注射、灌胃2周。

2.2 試驗(yàn)方法

1）轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)。轉(zhuǎn)棒儀用于檢測小鼠的運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力。末次灌胃1 h后進(jìn)行轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)，采用小鼠轉(zhuǎn)輪（直徑 35 mm），將轉(zhuǎn)棒儀轉(zhuǎn)速設(shè)置為30 r·min-1，測試限時(shí)5 min，記錄每只小鼠掉下轉(zhuǎn)輪的時(shí)間，中間休息時(shí)間1 min，共記錄3次，每次可同時(shí)對(duì)8只小鼠進(jìn)行試驗(yàn)。

2）爬桿試驗(yàn)。爬桿試驗(yàn)用于檢測小鼠肢體協(xié)調(diào)能力。轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)結(jié)束1 h后進(jìn)行小鼠爬桿試驗(yàn)，在試驗(yàn)裝置下端放入鼠籠中，將小鼠放于試驗(yàn)裝置上端的圓球上，開始記時(shí)，記錄小鼠頭朝上轉(zhuǎn)為頭向下的時(shí)間和爬到桿底時(shí)間，每只小鼠測試3次，將3次平均時(shí)間作為小鼠爬桿時(shí)間。

3）敞箱試驗(yàn)。敞箱試驗(yàn)系統(tǒng)采用計(jì)算機(jī)視覺相關(guān)算法測量小鼠進(jìn)入敞箱后的各種行為（運(yùn)動(dòng)、靜止等）以及動(dòng)物在各劃定區(qū)域的行為參數(shù)。利用敞箱引起小鼠的焦慮及恐懼，以測量小鼠的運(yùn)動(dòng)量和運(yùn)動(dòng)模式變化。主要用于評(píng)價(jià)小鼠對(duì)新環(huán)境的適應(yīng)能力和運(yùn)動(dòng)能力的評(píng)估。

2.3 試驗(yàn)結(jié)果與分析

猴頭菇活性成分對(duì)小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間的影響試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 猴頭菇活性成分對(duì)運(yùn)動(dòng)障礙小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間的影響Tab.1 Effect of the active ingredients of Hericium erinaceus on the transfer time of exercise impaired mice

由表1可知，與對(duì)照組相比，運(yùn)動(dòng)障礙組、低劑量組、中劑量組和高劑量組的小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間均大幅縮短，說明MPTP對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)能力產(chǎn)生了明顯影響，使小鼠出現(xiàn)了運(yùn)動(dòng)障礙的癥狀表現(xiàn)，運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性下降明顯。與運(yùn)動(dòng)障礙組相比，灌胃猴頭菇粗提取液的3組小鼠的轉(zhuǎn)棒時(shí)間均有所增長，中劑量組的效果最好，適當(dāng)增加猴頭菇粗提取液的劑量能夠延長小鼠轉(zhuǎn)棒時(shí)間，一定程度上改善了小鼠的運(yùn)動(dòng)障礙癥狀，小鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力有所提高。猴頭菇活性成分對(duì)小鼠爬桿時(shí)間的影響試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 猴頭菇活性成分對(duì)運(yùn)動(dòng)障礙小鼠爬桿時(shí)間的影響Tab.2 Effect of the active ingredients of Hericium erinaceus on the climbing time of dyskinesia mice

由表2可知。與對(duì)照組相比，運(yùn)動(dòng)障礙組、低劑量組、中劑量組和高劑量組的小鼠爬桿時(shí)間均有所延長，說明MPTP對(duì)小鼠的肢體協(xié)調(diào)能力產(chǎn)生了明顯影響，使小鼠出現(xiàn)了肢體協(xié)調(diào)能力下降的運(yùn)動(dòng)障礙癥狀。與運(yùn)動(dòng)障礙組相比，灌胃猴頭菇粗提取液的3個(gè)劑量組，小鼠平均爬桿時(shí)間均有所減少，而且灌胃的劑量與小鼠爬桿時(shí)間呈正比量價(jià)關(guān)系，高劑量的猴頭菇粗提取液對(duì)小鼠的肢體協(xié)調(diào)能力影響顯著，能有效改善小鼠帕金森病引起的運(yùn)動(dòng)障礙癥狀。猴頭菇活性成分對(duì)小鼠開場試驗(yàn)的影響試驗(yàn)結(jié)果見表3。

表3 猴頭菇活性成分對(duì)運(yùn)動(dòng)障礙小鼠開場試驗(yàn)行為的影響Tab.3 Effect of the active ingredients of Hericium erinaceus on the opening test behavior of dyskinesia mice

由表3可知，與對(duì)照組相比，運(yùn)動(dòng)障礙組、低劑量組、中劑量組和高劑量組的小鼠進(jìn)入開場中心區(qū)域的次數(shù)明顯減少，而且小鼠的活動(dòng)總路程也明顯減少。說明MPTP對(duì)小鼠的運(yùn)動(dòng)能力和焦慮程度影響較大，小鼠只在開場的周邊活動(dòng)，較少進(jìn)入中心區(qū)域，小鼠的焦慮情緒增加。與運(yùn)動(dòng)障礙組相比，灌胃猴頭菇粗提取液的3組小鼠進(jìn)入開場中心區(qū)域的次數(shù)均有所增加，而且活動(dòng)的總路程也有增加，說明猴頭菇粗提取液能夠提高小鼠的運(yùn)動(dòng)能力，減少小鼠的焦慮感。

4 討論

猴頭菇中含有比較多的不飽和脂肪酸，可以很好的降低膽固醇含量、軟化血管。血液供給量的提升，對(duì)腦部神經(jīng)元細(xì)胞的營養(yǎng)和受損修復(fù)有一定的作用。而帕金森癥這種運(yùn)動(dòng)障礙病正是一種神經(jīng)退化性的疾病，其主要病因就是腦黑質(zhì)區(qū)中的多巴胺神經(jīng)元的損傷和死亡，導(dǎo)致休內(nèi)多巴胺的運(yùn)輸出現(xiàn)問題。而多巴胺是大腦重要的神經(jīng)傳導(dǎo)遞質(zhì)，是調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的重要物質(zhì)，也是控制人體運(yùn)動(dòng)的重要物質(zhì)。帕金森病就是多巴胺減少而引起的運(yùn)動(dòng)障礙。小鼠的轉(zhuǎn)棒試驗(yàn)和爬桿試驗(yàn)都說明，灌胃了猴頭菇活性物質(zhì)的小鼠，其肢體協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)能力和反應(yīng)能力都有所提升。說明猴頭菇活性成分對(duì)有運(yùn)動(dòng)障礙小鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)有一定的修復(fù)作用，能夠營養(yǎng)腦神經(jīng)元細(xì)胞，減少多巴胺神經(jīng)元的死亡。

小鼠開場試驗(yàn)中在中心區(qū)域進(jìn)出次數(shù)的減少，說明小鼠對(duì)陌生的開場試驗(yàn)環(huán)境有一定的恐懼感，處于一種焦慮的狀態(tài)，不愿意像正常嚙齒動(dòng)物一樣對(duì)新環(huán)境進(jìn)行探索，只在靠邊的位置活動(dòng)，以增加自身的安全感。而灌胃猴頭菇活性成分后，小鼠在開場試驗(yàn)中的表現(xiàn)出了一定的興奮性，進(jìn)入中心次數(shù)和活動(dòng)量明顯增加。這也驗(yàn)證了猴頭菇活性成分對(duì)神經(jīng)性遞質(zhì)的減少有抵制作用，可以改善焦慮、記憶衰退等神經(jīng)性問題，提高小鼠的運(yùn)動(dòng)興奮度，小鼠開場試驗(yàn)中活動(dòng)總路程的增加也說明了猴頭菇活性成分對(duì)運(yùn)動(dòng)障礙的抵抗作用。