電針對復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征I型大鼠模型局部組織氧化應(yīng)激反應(yīng)的干預(yù)作用

李曉潔,尹誠語,鄭小莉,聶慧敏,曾丹怡,王潔,陳瑞香,劉伯宇,臺燕,邵曉梅,劉伯一?

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)第三臨床醫(yī)學(xué)院,浙江省針灸神經(jīng)病學(xué)研究重點實驗室,杭州 310053;2.浙江中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,杭州 310053;3.浙江中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥科學(xué)研究院,杭州 310053)

復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征(complex regional pain syndrome,CRPS)是一種好發(fā)于身體局部區(qū)域,尤其是四肢,以疼痛為主要特征,并伴有感覺、運(yùn)動、自主神經(jīng)、血管、皮膚等異常改變的臨床疼痛綜合征[1]。CRPS可分為I型和II型:CRPS-I型沒有明確的神經(jīng)損傷,CRPS-II型則有明確的神經(jīng)損傷[2]。手術(shù)、骨折、肢體創(chuàng)傷、缺血或神經(jīng)損傷等?？蓪?dǎo)致CRPS-I發(fā)生。據(jù)流行病學(xué)統(tǒng)計,在某些骨折或腦卒中患者中,CRPS-I的發(fā)生率可達(dá)48.8%[3]。CRPS-I的疼痛癥狀是最影響患者的臨床癥狀,往往導(dǎo)致患者身心遭受巨大折磨,嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[4-5]。目前臨床上常用于治療CRPS-I疼痛的藥物為非甾體類抗炎藥、阿片類藥物及抗抑郁藥等[6-7]。然而這些藥物的治療效果局限,且長期服用會產(chǎn)生很多不良反應(yīng)[8]。

目前人們對引發(fā)CRPS-I的機(jī)制尚不清楚,因此為了闡明其具體機(jī)制,Coderre等[9]于大鼠下肢近踝關(guān)節(jié)處套入O型橡膠圈進(jìn)行加壓3 h,形成缺血再灌注,從而引發(fā)慢性缺血痛模型(chronic post ischemia pain,CPIP)。CPIP模型成功模擬出類似于患者CRPS-I的兩個階段表現(xiàn):即早期出現(xiàn)肢體的充血和水腫,隨后出現(xiàn)慢性神經(jīng)病理樣疼痛[10]。目前此模型已經(jīng)成為研究CRPS-I最為常用的動物模型之一。近期有研究發(fā)現(xiàn)CPIP模型局部腳掌炎癥組織出現(xiàn)了氧化應(yīng)激產(chǎn)物水平的升高,而利用抗氧化劑干預(yù)后則可顯著緩解CPIP模型動物表現(xiàn)的疼痛癥狀[11-13]。上述研究提示,局部組織氧化應(yīng)激反應(yīng)在介導(dǎo)CPIP模型動物疼痛機(jī)制中具有重要作用。

針刺鎮(zhèn)痛是我國傳統(tǒng)中醫(yī)療法,具有悠久歷史。目前針刺在臨床上已經(jīng)用于多種急慢性痛的治療[14-15]。針刺鎮(zhèn)痛具有良好療效,且無毒副作用[16-17]。近期有證據(jù)顯示,針刺在臨床上對CRPS-I患者的疼痛癥狀具有良好的治療作用[18-20]。然而目前針刺治療CRPS-I疼痛癥狀的相關(guān)機(jī)制尚不明確。有研究顯示針刺可有效抑制中樞腦區(qū)神經(jīng)元缺血后所伴發(fā)的氧化應(yīng)激反應(yīng)水平的升高[21]。上述研究提示,針刺治療CRPS-I疼痛的機(jī)制很有可能與其抑制局部組織發(fā)生的氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。因此,本研究準(zhǔn)備建立CPIP大鼠模型模擬CRPS-I,首先觀察電針對CPIP大鼠模型疼痛癥狀的干預(yù)作用,并進(jìn)一步研究電針對該模型大鼠局部腳掌組織中氧化應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)控作用,從而探索電針治療CRPS-I疼痛癥狀的內(nèi)在機(jī)制,為電針在臨床上治療CRPS-I提供新的理論支支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物

6～8周齡清潔級SD雄性大鼠48只,體重220～250 g,購自中國科學(xué)院上海實驗動物中心【SCXK(滬)2019-0016】,分籠飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心【SYXK(浙)2019-0008】。飼養(yǎng)期間環(huán)境溫度為20～22℃,12 h光暗循環(huán),自由飲水,給予嚙齒動物標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料。本實驗所有實驗程序均按照《國家衛(wèi)生研究院實驗動物護(hù)理和使用指南》(國家衛(wèi)生研究院出版物第8023號,1978年修訂)進(jìn)行,并經(jīng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物倫理委員會批準(zhǔn)(審批號:ZSLL-2017-183)。

1.1.2 實驗試劑

小鼠單克隆抗DNA/RNA損傷抗體(美國,Abcam,生產(chǎn)貨號:ab62623);驢抗小鼠熒光二抗(美國,Abcam,生產(chǎn)貨號:ab150111,Alexa Fluor-647);戊巴比妥鈉(北京嵐秦化工科技有限公司,批號:201857-33-0);微量還原型谷胱甘肽測定試劑盒(南京建成生物工程研究所,貨號:A006-2-1);SOD檢測試劑盒(WST-1法,南京建成生物工程研究所,貨號:A001-3-2);MDA測定試劑盒(TBA法,南京建成生物工程研究所,貨號:A003-1-2);過氧化氫檢測試劑盒(碧云天,貨號:S0038)。其余試劑均為國產(chǎn)分析級純。

1.1.3 實驗儀器

纖毛機(jī)械刺激針(vonFrey觸覺纖維絲,美國Stoelting公司),韓式穴位神經(jīng)刺激儀(HANS-200 A,聯(lián)創(chuàng)科技南京濟(jì)生醫(yī)療科技有限公司),全能臺式高速冷凍離心機(jī)(Sorvall Biofuge Stratos,美國Thermo Scientific公司),Thermo冰凍切片機(jī)(HM550,美國Thermo Scientific公司),激光共聚焦顯微鏡(型號:NiKON Elements AR,日本Nikon公司)。M4多功能酶標(biāo)儀(SMP500-15956-JUHX,美國SoftMax公司),華佗牌一次性針灸針(0.18 mm×13 mm,蘇州醫(yī)療用品廠有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 分組

SD大鼠48只,隨機(jī)數(shù)字表法均分為4組,每組12只,即假模型組,模型組,電針組,假電針組。

1.2.2 造模與電針干預(yù)在大鼠體重達(dá)310～320 g后進(jìn)行模型制備。參照文獻(xiàn)建立CPIP模型[9-10],3%戊巴比妥鈉(0.15 mL/100 g)腹腔注射麻醉,75%乙醇對造模部位進(jìn)行消毒。其后將內(nèi)徑為3.2 mm的O型橡膠圈套扎于大鼠右后足近踝關(guān)節(jié)處,于3 h后剪斷O型圈。電針組和假電針組做相同處理。假模型組于相同部位套扎提前剪斷的O型圈,其余處理均同其他組。

電針組:于造模后1 d進(jìn)行電針干預(yù),穴位參照全國中醫(yī)藥行業(yè)高等教育“十二五”規(guī)劃教材《實驗針灸學(xué)》(第9版)選擇雙側(cè)“足三里”和“昆侖”穴,采用0.18 mm×13 mm一次性毫針,進(jìn)針后連接“HANS-200 A韓氏穴位暨神經(jīng)刺激儀”,治療參數(shù):治療頻率為2/100 Hz,刺激電流為0.5～1.5 mA(初始強(qiáng)度為0.5 mA,每隔10 min增加0.5 mA)共30 min,每天1次。

假電針組:進(jìn)針時僅刺破皮層,不進(jìn)入肌層,進(jìn)針后連接“HANS-200 A韓氏穴位暨神經(jīng)刺激儀”,但不開啟即不通電的狀態(tài),治療時間和針刺穴位與電針組相同。

1.2.3 行為學(xué)檢測

采用機(jī)械縮爪閾值(paw withdraw threshold,PWT)檢測大鼠造模前后以及電針干預(yù)后患側(cè)足跖機(jī)械痛閾。將大鼠置于鐵絲網(wǎng)上,其足部可暴露于鐵絲網(wǎng)眼中,蓋以透明的有機(jī)玻璃罩,適應(yīng)環(huán)境安靜30 min后(即停止梳理毛發(fā)和探索性活動),按照文獻(xiàn)創(chuàng)建的Up and Down方法測定機(jī)械痛閾[22]。首先從4.0 g開始,將纖毛垂直刺向大鼠左后爪足底皮膚,稍用力,直至其彎曲成“S”形,注意避開足墊,若大鼠有縮足反射,則換小一號力量刺激絲,反之,則換大一號力量刺激絲,每次刺激持續(xù)時間最長5 s,測試間隔時間大于1 min。記錄大鼠對不同力量刺激絲的一系列反應(yīng)。若大鼠出現(xiàn)快速的縮足反射或舔足反應(yīng),則記為陽性反應(yīng),以“X”表示;若無反應(yīng),則視為陰性反應(yīng),以“O”表示,可得到一串以“O”或“X”組合的序列,以出現(xiàn)“X”的前一次“O”作為起點,選擇包括該起點的6次連續(xù)刺激反應(yīng),如“OXOXOO”,作為推算50%機(jī)械縮足閾的關(guān)鍵序列,推算公式50%機(jī)械縮足閾(g)=(10[Xf+κδ])/10000,其中Xf為序列中最后一根vonFrey刺激絲的對數(shù)值;κ為根據(jù)測量所得“X”、“O”序列查表后得到的值,δ為各個刺激絲力度取對數(shù)后差值的平均值,在此約等于0.231。由公式推算50%機(jī)械縮足閾的值。

1.2.4 免疫熒光檢測

每組選取5只大鼠麻醉后,開胸暴露心臟,經(jīng)升主動脈快速灌注4℃生理鹽水,其后迅速推注4%多聚甲醛約150 mL,再予4%多聚甲醛緩慢滴注15 min左右,待大鼠肢體僵硬,快速將大鼠右側(cè)足底皮膚組織分離,放入含有4%多聚甲醛的EP管內(nèi),固定3 h,依次置于15%(24 h,沉底)、30%(48 h,沉底)蔗糖溶液中脫水,液氮速凍,-80℃保存。

免疫熒光法檢測8-OHG(DNA/RNA氧化應(yīng)激損傷標(biāo)記物):取出-80℃保存?zhèn)溆玫拇笫笞愕灼つw組織,行OCT包埋,冰凍切片(10μm),進(jìn)行貼片。采用抗8-OHG抗體標(biāo)記局部組織中發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)損傷的細(xì)胞。步驟:5%正常驢血清封閉37℃封閉1 h,勿洗,加入單克隆小鼠抗8-OHG抗體(含5%正常驢血清TBST稀釋),4℃孵育過夜,清洗6次×10 min,加入驢抗小鼠熒光二抗(ab150111)37℃孵育1 h,避光,清洗6次×10 min,風(fēng)干,采用抗熒光淬滅封片液封片。激光共聚焦顯微鏡在647 nm激光下進(jìn)行拍攝。隨后使用Image Pro Plus 5.0軟件分析。

1.2.5 氧化應(yīng)激相關(guān)分子檢測

每組選取5只大鼠麻醉后,開胸暴露心臟,經(jīng)升主動脈快速灌注4℃生理鹽水,采集右后爪組織樣品用于生化分析,按照試劑商制定的操作標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行測定。準(zhǔn)確稱取組織重量,按重量∶體積=1∶9的比例,加入生理鹽水制備組織勻漿,2500 r/min,離心10 min,取上清液待測。

還原型谷胱甘肽(GSH-Px)測定:按步驟加入檢測試劑,混勻,靜置5 min,通過多功能酶標(biāo)儀420 nm波長處讀數(shù),報告的結(jié)果是每豪克蛋白質(zhì)的GSH含量,單位為μmol/mg蛋白質(zhì)。

超氧化物歧化酶(SOD)測定:根據(jù)試劑盒說明書,依次加入工作液與待測樣本,置37℃恒溫箱孵育20 min,采用多功能酶標(biāo)儀在480 nm處讀數(shù),報告的結(jié)果是每毫克蛋白質(zhì)SOD的活力,單位為U/mg蛋白質(zhì)。

過氧化氫(H2O2)測定:根據(jù)試劑盒說明書,將工作液與待測樣本充分混勻,通過多功能酶標(biāo)儀在405 nm處讀數(shù)測定,報告的結(jié)果是每毫克蛋白質(zhì)的H2O2含量,單位為μmol/mg蛋白質(zhì)。

丙二醛(MDA)測定:按說明書要求,首先將工作液與待測樣本混勻,100℃加熱15 min后,水浴冷卻至室溫,在室溫下1000 r/min離心10 min,移取上清液加入96孔板中,采用多功能酶標(biāo)儀在562 nm處讀數(shù),報告的結(jié)果是每毫克蛋白質(zhì)MDA的含量,單位為μmol/mg蛋白質(zhì)。用牛血清白蛋白作為標(biāo)準(zhǔn),使所有生化測量標(biāo)準(zhǔn)化。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

實驗數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(±sˉx)來表示,采用GraphPad prism 7進(jìn)行統(tǒng)計分析。兩組間比較采用獨立樣本Student’st檢驗,多組間比較采用單因素或雙因素重復(fù)測量方差分析,組間比較,采用Tukey法檢驗。均以P<0.05視作差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CPIP模型大鼠患側(cè)腳掌腫脹狀態(tài)及機(jī)械痛變化情況觀察

我們分別建立假模型組(Sham組)和CPIP模型組(CPIP組)。圖1A顯示大鼠在CPIP造模過程中,不同時間點患側(cè)腳掌腫脹程度變化情況(如圖1A箭頭所示)。與Sham組相比,CPIP組大鼠側(cè)肢體逐漸顯示出進(jìn)行性加重的腫脹,充血,甚至發(fā)紺。與Sham組相比,模后1 d腳掌腫脹程度最為顯著,差異具有顯著性(P<0.05)。腫脹持續(xù)1 d,在模后第2天出現(xiàn)逐漸消退,并恢復(fù)正常(圖1B)。上述現(xiàn)象與以往文獻(xiàn)報道和我們近期研究結(jié)果一致[9-10,23]。接下來繼續(xù)觀察CPIP組大鼠患側(cè)腳掌機(jī)械痛變化情況。如圖2A所示,兩組大鼠機(jī)械痛在造模前差異不具有顯著性。造模后,與Sham組相比,CPIP組大鼠50%機(jī)械縮爪閾值(50%PWTs)出現(xiàn)明顯降低,差異具有顯著性(P<0.01),且一直持續(xù)到觀察的第10天。上述現(xiàn)象與以往文獻(xiàn)報道一致[9-10,23],提示CPIP模型建立成功(圖1,圖2)。

2.2 電針對CPIP模型組大鼠機(jī)械痛過敏的治療作用

我們分別建立了假模型組(Sham組)、CPIP模型組(CPIP組)、CPIP模型+電針組(CPIP+EA組)以及CPIP模型+假電針組(CPIP+Sham EA組)。圖3A為造模時間、機(jī)械痛測定時間、電針治療時間以及組織取材時間點的示意圖。各組大鼠患側(cè)機(jī)械痛于造模前差異不具有顯著性。如圖3B所示,造模后與Sham組相比,CPIP組大鼠50%PWTs出現(xiàn)降低,且持續(xù)到模后第10天,差異具有顯著性(P<0.01)。經(jīng)電針治療后,CPIP+EA組大鼠50%PWTs相比CPIP+Sham EA組出現(xiàn)提升,且在觀察期內(nèi),機(jī)械痛過敏現(xiàn)象出現(xiàn)了累計的緩解效應(yīng),且差異具有顯著性(P<0.01)。結(jié)果提示,電針可有效緩解CPIP組大鼠機(jī)械痛過敏(圖3)。

2.3 電針對CPIP模型大鼠患側(cè)足底氧化應(yīng)激反應(yīng)干預(yù)作用

為了進(jìn)一步探討電針對CPIP大鼠患側(cè)足底組織中氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響,我們于造模后第10天收集各組大鼠患側(cè)足底組織進(jìn)行氧化應(yīng)激分子檢測,如表1所示,與Sham組相比,CPIP組大鼠患側(cè)足底組織中超氧化物歧化酶(SOD)和還原型谷胱甘肽(GSH-Px)含量顯著下降(P<0.01)。而氧化應(yīng)激產(chǎn)物丙二醛(MDA)和過氧化氫(H2O2)含量出現(xiàn)明顯上調(diào)(P<0.05或P<0.01)。這一結(jié)果提示,CPIP模型組大鼠患側(cè)足底組織有明顯氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生。經(jīng)電針治療后,如表1所示,與CPIP+ShamEA組相比,CPIP+EA組大鼠患側(cè)足底組織恢復(fù)了SOD和GSH-Px的耗竭,并恢復(fù)了局部組織中內(nèi)源性抗氧化能力(P<0.01)。此外,經(jīng)電針治療可降低CPIP模型大鼠足底組織內(nèi)氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA和H2O2的生成(P<0.05或P<0.01)。上述結(jié)果提示,電針可有效降低CPIP模型組大鼠患側(cè)足底組織中氧化應(yīng)激反應(yīng)水平(表1)。

圖1 大鼠造模前后患側(cè)足部狀態(tài)變化圖Note.A indicated the representative graphs of ipsilateral hind paw thickness before and after CPIP model establishment in rats.B indicated the changes of ipsilateral hind paw thickness at different time points before and after CPIP model establishment in rats.Compared with Sham group,?P<0.05,n=5.Figure 1 Changes of ipsilateral hind paw thickness before and after CPIP model establishment

圖2 CPIP模型組和假模型組患側(cè)痛閾變化圖Note.A indicated the ipsilateral pain threshold changes of the CPIP group and the Sham group at different time points during the experimental process.B indicated the normalized area under the pain threshold curve(AUC)of panel(A)and both groups were normalized with Sham group.Compared with Sham group,??P<0.01,n=5.Figure 2 Ipsilateral pain threshold changes in CPIP group and Sham group

圖3 各組大鼠患側(cè)機(jī)械痛變化情況Note.A indicated the experimental scheme of EA intervention on CPIP rats model;B indicated the ipsilateral pain threshold changes of Sham group,CPIP group,CPIP+EA group,CPIP+Sham EA group before and after EA intervention.C indicated the normalized area under the ipsilateral pain threshold curve(AUC)of panel(B)and each group was normalized with Sham group.Compared with Sham group,??P<0.01.Compared with CPIP+Sham EA group,##P<0.01,n=5.Figure 3 Changes of ipsilateral mechanical pain in rats of each group

2.4 電針對CPIP模型組大鼠患側(cè)足底組織中細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷標(biāo)記物8-羥基-鳥嘌呤(8-OHG)表達(dá)的干預(yù)作用

氧化應(yīng)激損傷與炎癥和疼痛反應(yīng)密切相關(guān),而8-OHG作為氧化應(yīng)激損傷的標(biāo)記物[21],因此我們進(jìn)一步觀察了大鼠患側(cè)足底組織中8-OHG的表達(dá)。如圖4A-B免疫熒光結(jié)果顯示,與Sham組相比,CPIP組大鼠患側(cè)足底組織中8-OHG免疫熒光強(qiáng)度明顯增加(P<0.01),提示CPIP模型大鼠患側(cè)足底組織伴有顯著細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷發(fā)生。而經(jīng)電針治療后,與CPIP+Sham EA組相比,CPIP+EA組大鼠患側(cè)足底組織中8-OHG表達(dá)出現(xiàn)顯著下降(P<0.01)。上述結(jié)果提示,電針可以有效降低CPIP模型組大鼠患側(cè)足底組織出現(xiàn)的細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷(圖4)。

3 討論

CRPS-I是一種好發(fā)于身體局部區(qū)域,尤其是四肢,以疼痛為主要特征,并伴有感覺、運(yùn)動、自主神經(jīng)、血管、皮膚和骨的異常改變的臨床疼痛綜合征。目前臨床常用藥物(包括非甾體抗炎藥、阿片類藥物等)治療CRPS-I疼痛的效果有限,且長期服用往往導(dǎo)致嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生,如胃腸道不適,肝腎功能損害,耐藥性等[24]。因此尋找對CRPS-I有效且副作用小的療法亟待解決。

眾所周知,針刺作為我國一種傳統(tǒng)中醫(yī)療法,具有悠久歷史。目前眾多基礎(chǔ)和臨床研究數(shù)據(jù)均證實[25-26],針刺可以作為一種治療慢性痛的綠色有效手段,并且無毒副作用。因此針刺已經(jīng)被世界上多個國家應(yīng)用于慢性痛的臨床治療之中。近期有研究發(fā)現(xiàn),針刺可以有效改善CRPS-I患者疼痛癥狀和肢體功能狀態(tài)[27-28],提示針刺可以作為臨床上治療CRPS-I的有效療法。

表1 各組大鼠患側(cè)足底組織中氧化應(yīng)激相關(guān)分子水平的變化(n=5)Table 1 Changes of oxidative stress related molecules in ipsilateral plantar tissues of rats in each group(n=5)

圖4 各組大鼠患側(cè)局部組織中氧化損傷標(biāo)記物8-OHG表達(dá)水平Note.A indicated the representative immunostaining images of the ipsilateral hind paw tissue of Sham group,CPIP group,CPIP+EA group,CPIP+Sham EA group,and red fluorescence indicated the positive expression of 8-OHG.B indicated the mean fluorescence intensity of 8-OHGpositive expression of the ipsilateral hind paw tissue in each group.Compared with Sham group,??P<0.01.Compared with CPIP+Sham EA group,##P<0.01,n=5.Figure 4 Expression level of oxidative damage marker 8-OHG in ipsilateral hind paw tissues of rats in each group

在本實驗中,我們對針刺治療CRPS-I的可能機(jī)制進(jìn)行了探討。我們首先成功建立了目前國際上比較公認(rèn)可以模擬CRPS-I的動物模型,即CPIP大鼠模型。本課題組在前期研究中已經(jīng)成功制備了該大鼠模型,因此為本實驗?zāi)Ｐ偷某晒⑻峁┝丝煽康募夹g(shù)支持和保障[9,23]。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)該CPIP模型大鼠患側(cè)肢體表現(xiàn)出明顯且持續(xù)的機(jī)械痛過敏癥狀。這一現(xiàn)象與以往報道及我們近期的研究結(jié)果相一致,因此提示模型的成功制備[24]。近期有研究發(fā)現(xiàn)CPIP模型動物局部腳掌組織有氧化應(yīng)激產(chǎn)物水平的升高,而利用抗氧化劑阻斷氧化應(yīng)激反應(yīng),則可顯著緩解CPIP模型動物表現(xiàn)的疼痛癥狀[13]。而氧化應(yīng)激產(chǎn)物可通過進(jìn)一步激活外周感覺神經(jīng)元末梢所表達(dá)的痛敏感TRPA1離子通道,引發(fā)動作電位產(chǎn)生,從而產(chǎn)生疼痛信號[29-30]。我們的研究發(fā)現(xiàn),CPIP模型大鼠足底組織中氧化應(yīng)激反應(yīng)水平顯著升高,具體表現(xiàn)為抗氧化應(yīng)激物質(zhì)SOD和GSH水平下降以及氧化應(yīng)激及脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA和H2O2含量上升,并且細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷標(biāo)記物8-OHG水平也出現(xiàn)顯著上調(diào)。這一系列結(jié)果進(jìn)一步肯定了CPIP模型大鼠患側(cè)局部組織中確實有明顯氧化應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生。因此局部組織氧化應(yīng)激反應(yīng)在介導(dǎo)CPIP模型動物疼痛機(jī)制中參與重要作用。

在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)電針可有效緩解CPIP模型大鼠機(jī)械痛過敏癥狀,這一發(fā)現(xiàn)與我們團(tuán)隊近期報道結(jié)果相一致[31]。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)電針可有效提高CPIP模型大鼠患側(cè)組織中抗氧化應(yīng)激物質(zhì)SOD和GSH水平,并下調(diào)氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA和H2O2含量。而且電針還可以進(jìn)一步降低局部組織中細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷標(biāo)記物8-OHG表達(dá)水平。這一結(jié)果提示,電針可有效降低CPIP模型大鼠患側(cè)組織中的氧化應(yīng)激水平的升高?？紤]到氧化應(yīng)激反應(yīng)及其產(chǎn)物在CPIP模型動物疼痛機(jī)制中參與了重要作用,因此我們推斷,電針改善CRPS-I大鼠模型痛覺過敏癥狀的機(jī)制,很可能是通過抑制患側(cè)局部炎癥組織中氧化應(yīng)激反應(yīng)水平來實現(xiàn)。

在我們的研究中,采用進(jìn)針時僅刺破皮層,不進(jìn)入肌層,進(jìn)針后連接電針儀,但不通電的方式作為假電針組的設(shè)置。這種假電針的設(shè)置方式可以驗證電刺激所引發(fā)的鎮(zhèn)痛效果,也是我們研究團(tuán)隊及其他一些同行所廣泛使用的一種假電針對照方式[32-35]。但是這種假電針組的設(shè)置并不能有效驗證由穴位特異性所發(fā)揮的效應(yīng),因此具有一定的局限性。目前,除了我們在本研究當(dāng)中所采用的這種假電針組的設(shè)置方式之外,還有一些研究采用在非經(jīng)非穴區(qū)域進(jìn)行電針刺激,以作為假電針組的設(shè)置[36]。因此,在接下來的研究中,我們也將考慮采用這種假電針的設(shè)置方式來進(jìn)一步驗證穴位特異性在電針調(diào)控氧化應(yīng)激以及鎮(zhèn)痛效應(yīng)中所發(fā)揮的作用。

綜上所述,電針對CRPS-I大鼠模型痛覺過敏癥狀的治療作用,很有可能與其對患側(cè)局部組織氧化應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)控有關(guān)。但電針干預(yù)CRPS-I氧化應(yīng)激反應(yīng)水平的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步闡明。這些研究將為針刺治療CRPS-I痛癥提供重要理論依據(jù),并有助于進(jìn)一步推動針刺作為一種“綠色療法”應(yīng)用于CRPS-I痛癥的臨床治療。