• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    后天繼發(fā)性免疫低下動(dòng)物模型研究及在中醫(yī)證候模型的應(yīng)用進(jìn)展

    2020-11-06 05:33:46劉美怡錢(qián)深思容蓉楊勇
    關(guān)鍵詞:動(dòng)物模型造模證候

    劉美怡錢(qián)深思容蓉楊勇?

    (1.山東中醫(yī)藥大學(xué),濟(jì)南 250355;2.山東中醫(yī)藥大學(xué),中醫(yī)藥抗病毒協(xié)同創(chuàng)新中心,濟(jì)南 250355)

    免疫力是指機(jī)體在生存發(fā)展過(guò)程中所形成的識(shí)別“自我”與“非己”,并排斥“非己”而保護(hù)“自我”的能力,即機(jī)體自身的防御機(jī)制。免疫力低下包括因長(zhǎng)期生活作息不規(guī)律或某些原發(fā)疾病等所致的機(jī)體免疫功能下降,還包括老年人的免疫系統(tǒng)功能性衰退而表現(xiàn)出的免疫低下?tīng)顟B(tài)。當(dāng)免疫機(jī)能下降,機(jī)體容易處于亞健康狀態(tài),更容易受到致病因子的侵襲,因此,建立能反映免疫低下特點(diǎn)并可重復(fù)、穩(wěn)定的動(dòng)物模型將對(duì)開(kāi)展相關(guān)疾病的防控具有十分重要意義。本綜述主要介紹免疫低下模型的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、建模方法、評(píng)價(jià)指標(biāo)及其在中醫(yī)證候模型中的應(yīng)用,為今后選擇合適的免疫低下動(dòng)物模型開(kāi)展疾病發(fā)病機(jī)制、藥物評(píng)價(jià)等研究提供參考。

    1 免疫低下動(dòng)物模型分類(lèi)

    免疫低下模型動(dòng)物按照獲得方式不同可分為先天性免疫低下和后天繼發(fā)性免疫低下,前者為先天遺傳性缺陷病所致,后者則主要是由惡性腫瘤、病毒、藥物、營(yíng)養(yǎng)不良等所致。

    1.1 先天性免疫低下動(dòng)物模型

    先天遺傳性免疫損傷常見(jiàn)于以下模型:BALB/c-nu、C3H-nu、C57BL/6-nu、NIH-nu品系裸鼠以及La-sat品系等,是先天缺失一種或兩種免疫器官的模型動(dòng)物;CBA/N、Beige、SCID及B-NSG品系等,是各類(lèi)免疫細(xì)胞存在缺陷的小鼠模型;裸大鼠;SHR品系大鼠;還有C8αt-r缺損癥、C4缺損癥、C5缺損癥及C6缺損癥等補(bǔ)體缺損的免疫功能障礙動(dòng)物模型[1]。這些模型動(dòng)物普遍個(gè)體差異小,動(dòng)物用量少,且由于多是基因改變,免疫學(xué)特性比較穩(wěn)定,免疫缺陷維持時(shí)間較長(zhǎng);但缺點(diǎn)是由于先天免疫低下,有些品系小鼠生命周期僅維持在8.5個(gè)月左右,不利于長(zhǎng)期跟蹤實(shí)驗(yàn),繁殖力差,且價(jià)格大多昂貴,不利于廣泛開(kāi)展使用。

    1.2 后天繼發(fā)性免疫低下動(dòng)物模型

    模型建立多用小鼠、大鼠、家兔、雪貂、比格犬等動(dòng)物。目前常采用物理、化學(xué)及輻射的方法建立免疫低下動(dòng)物模型,雖然此法造成的免疫損傷是暫時(shí)的,但在可獲得性和經(jīng)濟(jì)性上,比先天免疫缺陷動(dòng)物模型更具可操作性?xún)?yōu)勢(shì),本文將對(duì)此進(jìn)行重點(diǎn)闡述。

    2 后天繼發(fā)性免疫低下動(dòng)物模型的建立及評(píng)價(jià)

    2.1 強(qiáng)電刺激法

    電刺激法多選用大鼠,給予10 min的足底電擊刺激(電流強(qiáng)度1.0 mA,共33次,時(shí)間間隔為15 s,每次持續(xù)3 s),進(jìn)行為期14 d的造模。足底電擊可使其免疫受到抑制,IgG抗體水平降低[2]。此方法危險(xiǎn)系數(shù)較高且不易操作,因此,現(xiàn)少有研究采用強(qiáng)電刺激法建立免疫低下動(dòng)物模型。

    2.2 輻射法

    此法多采取3-6 Gy劑量的射線(xiàn)全身均勻照射小鼠或大鼠24 h來(lái)實(shí)現(xiàn),應(yīng)用最多的是60Co-γ射線(xiàn)和X射線(xiàn)。楊芳等[3]提供的方法為:40 cm×40 cm的照射視野,5 Gy劑量的X射線(xiàn)進(jìn)行一次性全身照射,源皮距為100 cm。輻射法所致免疫低下模型多表現(xiàn)為體重下降、活動(dòng)減少,脾和胸腺萎縮,T淋巴細(xì)胞亞群值改變[4],白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)減少等[5]。張蓉等[6]認(rèn)為輻射是一種毒邪,火熱熾盛易耗氣傷陰而氣血虧虛,現(xiàn)也有不少人采用輻射法制備動(dòng)物模型來(lái)研究中醫(yī)證候。郭平等[7]用60Co-γ射線(xiàn)建立血虛證小鼠模型,免疫學(xué)指標(biāo)降低的同時(shí),也出現(xiàn)了血虛證的表現(xiàn)。輻射法致免疫低下動(dòng)物模型多應(yīng)用于中醫(yī)藥抗輻射作用研究及保健食品對(duì)輻射損傷的輔助保護(hù)和免疫調(diào)節(jié)作用研究。此法對(duì)實(shí)驗(yàn)室的要求較高,并且通過(guò)輻射法造模的動(dòng)物生命周期會(huì)縮短[8],不適用于周期較長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)研究。

    2.3 應(yīng)激法

    應(yīng)激所致的肝郁脾虛可使正常免疫功能受阻,由此將應(yīng)激法用于構(gòu)建免疫低下模型。馬濤等[9]對(duì)Wistar大鼠施加束縛夾尾5 min、噪聲12 h、禁食禁水12 h等不可預(yù)見(jiàn)性刺激,進(jìn)行56 d實(shí)驗(yàn),通過(guò)慢性應(yīng)激建立肝郁脾虛抑郁模型,發(fā)現(xiàn)大鼠出現(xiàn)了炎癥反應(yīng),細(xì)胞因子IL-1β含量增加,IFN-γ、IL-2等則減少,脾細(xì)胞免疫功能受損。黃曉峰等[10]每天從17:00-9:00將C57BL/6小鼠(6~8周齡,雌性)置于錐形管中束縛限制其活動(dòng),重復(fù)5 d,通過(guò)慢性心理應(yīng)激也能抑制免疫功能。

    2.4 手術(shù)切除法

    手術(shù)切除法是指通過(guò)切除免疫器官來(lái)實(shí)現(xiàn)免疫低下,如脾切除模型的建立,方法如下:選擇6周齡雄性大鼠,麻醉備皮,沿左上腹旁正中進(jìn)腹剪開(kāi)1.5~2.0 cm大小的切口,結(jié)扎血管和脾蒂,摘除脾后縫合切口。術(shù)后免疫細(xì)胞活性減弱,CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均下降[11]。脾切除所致免疫低下?tīng)顟B(tài)維持時(shí)間較長(zhǎng),適用范圍較廣。

    2.5 免疫抑制劑法

    2.5.1 環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)

    CTX腹腔注射是常用的免疫低下動(dòng)物模型誘導(dǎo)方法。ICR小鼠、BALB/c小鼠、昆明小鼠、A/J小鼠、豚鼠和大鼠是常用的嚙齒類(lèi)模型動(dòng)物,此外還有家兔等哺乳類(lèi)動(dòng)物。CTX給藥劑量和時(shí)間是有效建立免疫低下模型重要的因素,文獻(xiàn)報(bào)道沒(méi)有統(tǒng)一的給藥劑量和時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)。相比較之下,小鼠模型多為80 mg/kg連續(xù)3 d和40 mg/kg連續(xù)10 d腹腔注射給藥。有學(xué)者對(duì)比研究不同劑量CTX對(duì)SD大鼠的造模效果,通過(guò)綜合存活率和白細(xì)胞計(jì)數(shù)兩項(xiàng)指標(biāo)得出:中劑量組(間隔3 d,第1天150 mg/kg,第4天100 mg/kg)是最佳的誘導(dǎo)劑量[12]。吳萌等[13]采用4個(gè)月兔齡的新西蘭大耳家兔,CTX劑量為28.75 mg/(kg·d),連續(xù)注射10 d,胸腺和脾指數(shù)明顯降低。

    CTX建模后,動(dòng)物的體重、精神狀況和自主活動(dòng)量等表觀(guān)指標(biāo)可初步反映動(dòng)物的免疫功能狀況。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn),脾和胸腺指數(shù)降低、白細(xì)胞減少、IL-2、IL-4等細(xì)胞因子含量下降、IgG、IgM血清抗體水平下降、脾淋巴細(xì)胞增殖能力下降、巨噬細(xì)胞吞噬功能減弱、CD4+和CD8+及其比值均下降[14-15]。碳廓清實(shí)驗(yàn)是評(píng)估免疫水平的方法之一,尾靜脈注射墨水是碳廓清實(shí)驗(yàn)最常用的方式,王紅梅等[16]還推薦了內(nèi)眥靜脈注射墨水的方法。

    近些年來(lái),CTX廣泛應(yīng)用于中藥復(fù)方和成分免疫調(diào)節(jié)作用研究的前期模型構(gòu)建,其引起的免疫抑制還可用于構(gòu)建中醫(yī)脾虛證[17]和血虛證[18]模型。

    2.5.2 氫化可的松(hydrocortisone,HY)

    HY可減弱免疫功能,SD大鼠或小鼠常作為此類(lèi)方法的模型動(dòng)物[19]。通常采用25 mg/(kg·d)的劑量,連續(xù)7 d皮下注射HY來(lái)建模。HY溶液一般現(xiàn)用現(xiàn)配,采用無(wú)水乙醇和生理鹽水(1∶5)溶解稀釋[20]。呂穎堅(jiān)等[21]證實(shí)造模后小鼠NK細(xì)胞活性降低、巨噬細(xì)胞吞噬能力減弱,整體免疫水平降低。血清IL-6、TNF-α、IFN-γ、小腸SIgA、IgG及補(bǔ)體C3的含量也可用于評(píng)價(jià)HY是否造模成功[20]。

    錢(qián)宏梁等[22]配置0.0375 mg/mL濃度的HY水溶液于飲水瓶供小鼠飲用,連續(xù)14 d,建立虛證小鼠模型。研究認(rèn)為HY誘導(dǎo)的多是與脾、腎二臟有關(guān)的虛證[23-24],潘志強(qiáng)等[23]認(rèn)為HY用于構(gòu)建虛證動(dòng)物模型時(shí),較之其構(gòu)建免疫低下模型,應(yīng)稍減給藥劑量和延長(zhǎng)造模時(shí)間。

    2.5.3 環(huán)孢素A(ciclosporin A,CsA)

    CsA能有效抑制輔助性T淋巴細(xì)胞活性,抑制CD4+T細(xì)胞增殖,可用于構(gòu)建T細(xì)胞功能障礙免疫低下模型。夏琦等[25]采用0.2 mg/g劑量的CsA溶液,連續(xù)5 d腹腔注射,建立免疫低下小鼠模型。另有文獻(xiàn)報(bào)道了連續(xù)7 d注射30 mg/(kg·d)劑量CsA的可行方法[26]。由于艾滋病毒主要攻擊CD4+T細(xì)胞,所以環(huán)孢素A也用于免疫缺陷型動(dòng)物模型的建立,且研究表明中劑量25 mg/(kg·d)為造模最佳劑量[27]。此法一般采用小鼠作為模型動(dòng)物,灌胃、腹腔注射及肌內(nèi)注射這三種給藥途徑均能建立起免疫低下動(dòng)物模型[26]。

    2.5.4 其他免疫抑制劑

    國(guó)外學(xué)者采用醋酸可的松(100 mg/kg)對(duì)A/J小鼠連續(xù)3 d皮下注射的方法[28],以及地塞米松處理BALB/c小鼠的方法[29],都成功建立了免疫低下模型。也有比格犬模型的報(bào)道,通過(guò)連續(xù)7 d口服潑尼松龍(3.0 mg/kg)建立免疫低下模型[30]。另有研究者將雪貂設(shè)做研究對(duì)象,采用口服免疫抑制劑混合物(20 mg/kg霉酚酸酯,0.5 mg/kg他克莫司和8 mg/kg潑尼松龍)的方法建模[31-32]。由于雪貂呼吸道的受體分布和人類(lèi)十分相似,且會(huì)出現(xiàn)和人一樣的打噴嚏、流鼻涕等表現(xiàn),這些是其他模型動(dòng)物所不具備的特點(diǎn),被普遍認(rèn)為是研究流感病毒的優(yōu)良模型。

    2.6 其他藥物方法

    2.6.1 腺嘌呤

    腺嘌呤可用于構(gòu)建腎虛且免疫低下大鼠模型,需提前用0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液助懸,配置成1.5%的腺嘌呤混懸液,SD大鼠經(jīng)連續(xù)56 d灌胃腺嘌呤懸液(150 mg/kg)后,NK細(xì)胞活性降低、腎形態(tài)異常、補(bǔ)體C3水平下降,脾淋巴細(xì)胞也受到影響[33]。李卓恒等[34]通過(guò)腺嘌呤成功復(fù)制了腎虛大鼠模型,用于腎精虧虛證和腎虛生殖功能損傷的研究。免疫低下與中醫(yī)腎虛證相關(guān)聯(lián),因此可通過(guò)建立免疫低下動(dòng)物模型來(lái)研究中醫(yī)腎虛證,但腺嘌呤致腎虛證造模時(shí)間稍長(zhǎng)。

    2.6.2 利血平

    利血平最初用于中醫(yī)脾虛證、肝郁脾虛證的建模,但其會(huì)造成模型動(dòng)物腸道吸收功能受阻,蛋白質(zhì)合成不足,機(jī)體免疫功能下降,因此可用來(lái)構(gòu)建免疫低下模型??赏ㄟ^(guò)對(duì)小鼠進(jìn)行連續(xù)17 d的背部皮下注射利血平(10-4g/kg)來(lái)建模[35]。研究表明腹腔注射利血平(4 mg/kg)可成功建立大鼠抑郁模型,懸尾實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)、曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)等可作為評(píng)價(jià)造模是否成功的判斷依據(jù)。造模后,胸腺和脾指數(shù)下降,炎性因子IL-1β和TNF-α水平升高[36],利血平所致脾虛證可進(jìn)一步用于構(gòu)建免疫低下模型。

    2.6.3 D-半乳糖(D-galactose,D-gal)

    D-gal常作為致衰劑用于構(gòu)建衰老模型[37-38],但機(jī)體的衰老機(jī)制與免疫功能的變化息息相關(guān)[39],也有少數(shù)人采用D-gal致衰來(lái)間接構(gòu)建免疫低下模型。方法主要有兩種:小鼠采用125 mg/kg的劑量頸背部注射,連續(xù)45 d[40];大鼠采用350 mg/kg的劑量頸背部注射,連續(xù)42 d[41]。研究證實(shí)其可用于陽(yáng)虛證和衰老腎虛模型的制備[41-42]。此法造模周期較長(zhǎng),文獻(xiàn)報(bào)道在6~8周左右。

    3 免疫低下動(dòng)物模型與中醫(yī)證候模型的關(guān)系

    中醫(yī)證候模型是研究疾病發(fā)生發(fā)展及中醫(yī)藥作用機(jī)制的有效工具,是中醫(yī)藥現(xiàn)代化發(fā)展的重要環(huán)節(jié)。中醫(yī)證候模型的建立無(wú)論是采用疾病模型、病因模型、病證結(jié)合模型等都與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的動(dòng)物模型評(píng)價(jià)緊密相關(guān)。已有研究證實(shí),肝郁證、脾虛證、肝郁脾虛證和腎陽(yáng)虛證候與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的免疫低下有一定關(guān)系,都不同程度地抑制了機(jī)體免疫[43-46]?,F(xiàn)將免疫低下模型和中醫(yī)證候模型相關(guān)聯(lián),主要包括:腎虛證、肝郁脾虛證、血虛證等(表1,2)。

    4 討論

    目前國(guó)內(nèi)外建立免疫低下動(dòng)物模型的方法有很多,各有優(yōu)缺點(diǎn)。但無(wú)論采用何種方法建模,都很難保證實(shí)驗(yàn)中能同時(shí)抑制模型動(dòng)物的所有免疫學(xué)指標(biāo),僅能保證選擇合適的方法、藥物、劑量和時(shí)間點(diǎn),來(lái)影響模型動(dòng)物的部分免疫學(xué)指標(biāo)[48]。常用到的動(dòng)物有小鼠、大鼠、新西蘭大耳家兔及雪貂等,但實(shí)驗(yàn)選擇中最常見(jiàn)的還是小鼠,這與小鼠在可操作性和經(jīng)濟(jì)性上表現(xiàn)出的優(yōu)勢(shì)有關(guān)。檢測(cè)指標(biāo)可包括:模型動(dòng)物的宏觀(guān)指標(biāo)(體重、攝食進(jìn)水量、自主活動(dòng)等)、臟器(胸腺、脾)指數(shù)、動(dòng)物存活率、血常規(guī)水平、各細(xì)胞因子含量與所占比例以及T淋巴細(xì)胞亞群值等。這些都是在免疫力低下模型研究中可借鑒和參考的方法。

    表1 免疫低下模型與中醫(yī)證候模型的關(guān)聯(lián)Table 1 Correlation between immunocompromised models and traditional Chinese medicine syndrome models

    表2 免疫低下模型在中醫(yī)證候中的應(yīng)用Table 2 Application of immunocompromised models in traditional Chinese medicine syndrome models

    中醫(yī)藥具有整合調(diào)節(jié)、扶正祛邪的作用,其多成分、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)的綜合治療能夠較好地改善機(jī)體亞健康狀態(tài),中醫(yī)藥在治療免疫力低下這類(lèi)疾病方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)?!懊庖吡Φ拖隆彪m然是西醫(yī)的病名,應(yīng)用到中醫(yī)、中藥的現(xiàn)代研究就必然要涉及到中醫(yī)證候的定位及病證結(jié)合模型的研究。我們認(rèn)為可以在以下兩個(gè)方面找到結(jié)合點(diǎn):一是借鑒中醫(yī)證候的造模方法,再結(jié)合免疫低下造模的手段,綜合評(píng)價(jià)復(fù)合模型的中醫(yī)證候指標(biāo)及微觀(guān)免疫學(xué)指標(biāo);另一方面是以現(xiàn)有的免疫低下造模方法為主體,擴(kuò)展中醫(yī)證候的評(píng)價(jià)指標(biāo),以已有成熟的某種免疫低下造模方法來(lái)模擬某類(lèi)中醫(yī)證候模型的評(píng)價(jià)模式。這種病證結(jié)合模型研究將遵循中醫(yī)理論指導(dǎo)的基本原則,既符合傳統(tǒng)的評(píng)價(jià)體系,又能結(jié)合現(xiàn)代免疫學(xué)進(jìn)展的技術(shù)和方法,深入探討中醫(yī)藥“扶正祛邪”、“正氣存內(nèi),邪不可干”等普適性治則治法的作用機(jī)理及藥物干預(yù)機(jī)制,將能極大地推動(dòng)中醫(yī)藥的現(xiàn)代化研究進(jìn)程。因此,我們認(rèn)為已有免疫低下動(dòng)物模型的再評(píng)價(jià)、免疫力低下復(fù)合證候模型的研究模式將是今后此類(lèi)動(dòng)物模型在中醫(yī)藥領(lǐng)域開(kāi)展研究的一個(gè)重要方向。

    猜你喜歡
    動(dòng)物模型造模證候
    肥胖中醫(yī)證候動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    胃癌前病變動(dòng)物模型復(fù)制實(shí)驗(yàn)進(jìn)展
    腎陽(yáng)虛證動(dòng)物模型建立方法及評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)研究進(jìn)展
    脾腎陽(yáng)虛型骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型造模方法及模型評(píng)價(jià)
    濕熱證動(dòng)物模型造模方法及評(píng)價(jià)研究
    潰瘍性結(jié)腸炎動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    糖尿病性視網(wǎng)膜病變動(dòng)物模型研究進(jìn)展
    昆明地區(qū)兒童OSAHS中醫(yī)證候聚類(lèi)分析
    潤(rùn)腸通便功能試驗(yàn)中造模劑的選擇
    慢性乙型肝炎的中醫(yī)證候與辨證論治
    久久毛片免费看一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产精品 欧美亚洲| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 亚洲五月色婷婷综合| 午夜福利视频在线观看免费| 午夜福利在线免费观看网站| 久久久国产成人免费| svipshipincom国产片| 99九九在线精品视频| 午夜视频精品福利| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲人成电影观看| 国产精品 欧美亚洲| 色老头精品视频在线观看| 国产野战对白在线观看| 久久人妻熟女aⅴ| 色婷婷av一区二区三区视频| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 美女视频免费永久观看网站| 啦啦啦 在线观看视频| 男女边摸边吃奶| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲 | 国产成人精品无人区| av片东京热男人的天堂| 一本久久精品| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产精品av久久久久免费| bbb黄色大片| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| 午夜福利在线免费观看网站| 爱豆传媒免费全集在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 99国产极品粉嫩在线观看| 成年人免费黄色播放视频| a在线观看视频网站| av网站在线播放免费| av电影中文网址| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日韩精品免费视频一区二区三区| 69av精品久久久久久 | 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲成人手机| 丝袜在线中文字幕| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 免费高清在线观看视频在线观看| 中国国产av一级| 亚洲专区字幕在线| 在线观看人妻少妇| 91字幕亚洲| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲精品自拍成人| 日本wwww免费看| 亚洲综合色网址| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 少妇被粗大的猛进出69影院| 无遮挡黄片免费观看| 波多野结衣av一区二区av| 久久天堂一区二区三区四区| 一二三四社区在线视频社区8| 最近最新中文字幕大全免费视频| av超薄肉色丝袜交足视频| 十八禁网站网址无遮挡| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 午夜精品久久久久久毛片777| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 伊人亚洲综合成人网| 亚洲人成77777在线视频| 色94色欧美一区二区| 国产精品九九99| 考比视频在线观看| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 少妇精品久久久久久久| 久久 成人 亚洲| 国产高清国产精品国产三级| 亚洲国产中文字幕在线视频| 久久精品成人免费网站| 啪啪无遮挡十八禁网站| tocl精华| 99精品久久久久人妻精品| 一进一出抽搐动态| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲 欧美一区二区三区| 一级毛片女人18水好多| 久久影院123| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 久久ye,这里只有精品| 黑人猛操日本美女一级片| 各种免费的搞黄视频| 青青草视频在线视频观看| 久久青草综合色| 高清欧美精品videossex| 飞空精品影院首页| 亚洲国产精品成人久久小说| 国产精品一区二区精品视频观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 青春草亚洲视频在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 色视频在线一区二区三区| 超碰成人久久| 色老头精品视频在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| 在线 av 中文字幕| av国产精品久久久久影院| 9热在线视频观看99| 在线 av 中文字幕| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲一区中文字幕在线| 又黄又粗又硬又大视频| 黄色怎么调成土黄色| 美女福利国产在线| 91精品伊人久久大香线蕉| www日本在线高清视频| av在线app专区| 无遮挡黄片免费观看| tube8黄色片| 少妇精品久久久久久久| 十八禁高潮呻吟视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产欧美亚洲国产| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲av日韩在线播放| 国产黄频视频在线观看| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 午夜影院在线不卡| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 亚洲九九香蕉| 成人国语在线视频| 一本久久精品| 久久人人爽人人片av| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲精品一区蜜桃| 捣出白浆h1v1| 日本vs欧美在线观看视频| 午夜91福利影院| 免费黄频网站在线观看国产| 成人手机av| 国产成人精品久久二区二区免费| 考比视频在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 热99久久久久精品小说推荐| 热99re8久久精品国产| 国产亚洲精品一区二区www | 少妇精品久久久久久久| 欧美日韩视频精品一区| a级毛片黄视频| 久久av网站| 三级毛片av免费| 欧美人与性动交α欧美软件| 在线精品无人区一区二区三| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 国产精品1区2区在线观看. | 午夜两性在线视频| 久久国产精品大桥未久av| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 久久国产精品大桥未久av| 欧美另类亚洲清纯唯美| www.自偷自拍.com| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲中文日韩欧美视频| 热99久久久久精品小说推荐| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| www日本在线高清视频| 黄片小视频在线播放| 女警被强在线播放| 亚洲精品第二区| 国产欧美亚洲国产| 欧美少妇被猛烈插入视频| 丝袜在线中文字幕| 男女之事视频高清在线观看| 搡老乐熟女国产| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 日本a在线网址| 91大片在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 黄频高清免费视频| 中文字幕av电影在线播放| 波多野结衣av一区二区av| 黄片大片在线免费观看| 欧美人与性动交α欧美软件| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 操美女的视频在线观看| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲一码二码三码区别大吗| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 自线自在国产av| 美女大奶头黄色视频| av在线播放精品| 久久狼人影院| 亚洲国产av影院在线观看| 欧美精品亚洲一区二区| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 性少妇av在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 黄色视频,在线免费观看| 黑人猛操日本美女一级片| 久久久久久久国产电影| 又大又爽又粗| 精品少妇内射三级| videos熟女内射| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 黄色a级毛片大全视频| 一本大道久久a久久精品| 自线自在国产av| av有码第一页| 精品国产乱码久久久久久小说| 精品国产乱子伦一区二区三区 | 国产精品国产三级国产专区5o| 欧美黑人精品巨大| 欧美精品一区二区大全| 午夜激情久久久久久久| 美女国产高潮福利片在线看| 午夜福利乱码中文字幕| 最近最新免费中文字幕在线| 黑人猛操日本美女一级片| 一二三四在线观看免费中文在| 亚洲国产日韩一区二区| 青春草亚洲视频在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 久久性视频一级片| 丝袜脚勾引网站| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美国产精品一级二级三级| 精品亚洲成国产av| av福利片在线| 久久久久久免费高清国产稀缺| 香蕉丝袜av| 久久热在线av| 考比视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 成年av动漫网址| 亚洲精华国产精华精| 亚洲中文日韩欧美视频| 捣出白浆h1v1| 黑人欧美特级aaaaaa片| 国产主播在线观看一区二区| 国产精品亚洲av一区麻豆| 不卡一级毛片| 国产成人精品久久二区二区91| 国产av国产精品国产| avwww免费| 亚洲国产av新网站| 丝袜在线中文字幕| 亚洲五月婷婷丁香| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 国产免费现黄频在线看| 91大片在线观看| 在线观看一区二区三区激情| 国产麻豆69| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产成人精品无人区| 国产成人精品久久二区二区免费| 啦啦啦 在线观看视频| 欧美国产精品一级二级三级| 欧美97在线视频| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 999精品在线视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 色婷婷久久久亚洲欧美| 俄罗斯特黄特色一大片| 中文字幕高清在线视频| 大香蕉久久网| 一级毛片女人18水好多| 午夜福利,免费看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 丝瓜视频免费看黄片| 91国产中文字幕| a 毛片基地| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 久久毛片免费看一区二区三区| 最新在线观看一区二区三区| av天堂在线播放| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 人成视频在线观看免费观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 亚洲综合色网址| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 黄色片一级片一级黄色片| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 免费观看av网站的网址| 国产成+人综合+亚洲专区| 亚洲精品美女久久av网站| 久久久精品94久久精品| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 99久久精品国产亚洲精品| 久久久久久人人人人人| 亚洲人成电影观看| 欧美成人午夜精品| 男女下面插进去视频免费观看| 咕卡用的链子| 一个人免费在线观看的高清视频 | 久久久欧美国产精品| 色综合欧美亚洲国产小说| av天堂在线播放| 在线观看免费午夜福利视频| 妹子高潮喷水视频| 亚洲激情五月婷婷啪啪| av免费在线观看网站| 性色av乱码一区二区三区2| 国产成人精品久久二区二区免费| videosex国产| 91精品伊人久久大香线蕉| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 精品一区二区三卡| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品视频人人做人人爽| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 欧美+亚洲+日韩+国产| 欧美日韩视频精品一区| 国产一级毛片在线| 欧美日韩视频精品一区| 悠悠久久av| 久久九九热精品免费| 亚洲精品成人av观看孕妇| 99国产精品一区二区蜜桃av | 制服人妻中文乱码| 国产又色又爽无遮挡免| 2018国产大陆天天弄谢| 国产主播在线观看一区二区| 免费av中文字幕在线| tube8黄色片| 99热网站在线观看| 亚洲少妇的诱惑av| 色婷婷av一区二区三区视频| 男女午夜视频在线观看| 各种免费的搞黄视频| videos熟女内射| 国产一区二区在线观看av| 18禁观看日本| 黄色片一级片一级黄色片| 国产高清视频在线播放一区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 久久久久久人人人人人| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美三级亚洲精品| 一本一本综合久久| 亚洲精品中文字幕在线视频| av福利片在线| 久久欧美精品欧美久久欧美| 精品一区二区三区四区五区乱码| 最好的美女福利视频网| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品日韩av在线免费观看| 免费观看精品视频网站| 九色成人免费人妻av| 免费在线观看日本一区| 深夜精品福利| 在线观看日韩欧美| 999久久久国产精品视频| 后天国语完整版免费观看| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 麻豆av在线久日| 成人国产综合亚洲| 精品久久久久久久末码| 欧美成人午夜精品| 国产av又大| 久久精品91蜜桃| 久久性视频一级片| 久久久久久人人人人人| 精品无人区乱码1区二区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产亚洲欧美98| 男女午夜视频在线观看| 欧美一级毛片孕妇| 婷婷六月久久综合丁香| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产高清视频在线观看网站| 成人18禁在线播放| 久久久久久久久久黄片| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲熟妇熟女久久| 可以在线观看毛片的网站| 亚洲精品色激情综合| 欧美国产日韩亚洲一区| 18禁国产床啪视频网站| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲av美国av| 国内精品久久久久精免费| 久久精品影院6| 国产av麻豆久久久久久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 中文字幕高清在线视频| 欧美日韩乱码在线| 亚洲av五月六月丁香网| 久久久久国内视频| 免费在线观看影片大全网站| 国产成人av教育| 嫩草影视91久久| e午夜精品久久久久久久| 色在线成人网| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产成年人精品一区二区| 国产99久久九九免费精品| 亚洲精品美女久久av网站| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 九九热线精品视视频播放| 欧美乱码精品一区二区三区| 久久久久久久精品吃奶| 午夜两性在线视频| 操出白浆在线播放| 婷婷精品国产亚洲av在线| 女人被狂操c到高潮| 99re在线观看精品视频| 中文在线观看免费www的网站 | 黄色毛片三级朝国网站| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲av五月六月丁香网| 青草久久国产| 我的老师免费观看完整版| 一进一出抽搐动态| 亚洲国产精品999在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 1024香蕉在线观看| 久久 成人 亚洲| 亚洲性夜色夜夜综合| 天天一区二区日本电影三级| 中国美女看黄片| 久久精品91蜜桃| 精品熟女少妇八av免费久了| 午夜福利18| 美女扒开内裤让男人捅视频| 18禁国产床啪视频网站| 看片在线看免费视频| 丝袜美腿诱惑在线| av免费在线观看网站| 毛片女人毛片| 亚洲精品在线观看二区| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲精品色激情综合| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 俄罗斯特黄特色一大片| 国产精品99久久99久久久不卡| 男人的好看免费观看在线视频 | 婷婷丁香在线五月| 国产精品av视频在线免费观看| 九色国产91popny在线| 变态另类丝袜制服| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 母亲3免费完整高清在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| av福利片在线| 少妇人妻一区二区三区视频| 中文在线观看免费www的网站 | 亚洲中文日韩欧美视频| 我要搜黄色片| 又紧又爽又黄一区二区| 一进一出抽搐动态| 亚洲国产看品久久| 亚洲av成人精品一区久久| 视频区欧美日本亚洲| 国产免费男女视频| 久久精品成人免费网站| 亚洲全国av大片| 成人国语在线视频| 久久精品国产清高在天天线| 麻豆一二三区av精品| 日本免费a在线| 一二三四在线观看免费中文在| 国产欧美日韩一区二区精品| 午夜影院日韩av| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产精品九九99| 超碰成人久久| 男插女下体视频免费在线播放| 老熟妇仑乱视频hdxx| www国产在线视频色| 丰满的人妻完整版| 一区二区三区国产精品乱码| 欧美zozozo另类| 国产午夜福利久久久久久| 99久久国产精品久久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美一级毛片孕妇| 日韩欧美三级三区| 久久精品国产综合久久久| 99国产精品一区二区蜜桃av| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99久久精品国产亚洲精品| 婷婷六月久久综合丁香| 天堂av国产一区二区熟女人妻 | 亚洲av成人一区二区三| 免费搜索国产男女视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 88av欧美| 一本大道久久a久久精品| 这个男人来自地球电影免费观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99久久国产精品久久久| 国产精品av视频在线免费观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产伦人伦偷精品视频| 在线观看www视频免费| 国产日本99.免费观看| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产激情欧美一区二区| cao死你这个sao货| ponron亚洲| 特大巨黑吊av在线直播| 午夜免费观看网址| 欧美日本视频| 这个男人来自地球电影免费观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 亚洲精品美女久久av网站| 日本熟妇午夜| 制服诱惑二区| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产伦人伦偷精品视频| 色哟哟哟哟哟哟| 精品久久蜜臀av无| 久久精品影院6| 亚洲欧美日韩东京热| 国产av又大| 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲人成网站高清观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 日本熟妇午夜| 久久久国产成人免费| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 窝窝影院91人妻| 免费人成视频x8x8入口观看| 好男人电影高清在线观看| 国产精品久久电影中文字幕| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 精品福利观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 免费av毛片视频| 国产亚洲精品av在线| 高清毛片免费观看视频网站| 国产野战对白在线观看| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲精品中文字幕在线视频| 精品午夜福利视频在线观看一区| 十八禁网站免费在线| 特级一级黄色大片| 最近在线观看免费完整版| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 欧美国产日韩亚洲一区| 亚洲精品色激情综合| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲精华国产精华精| 欧美+亚洲+日韩+国产| 国产精品亚洲av一区麻豆| 一区福利在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 91麻豆av在线| 国产av不卡久久| 曰老女人黄片| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲激情在线av| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久午夜亚洲精品久久| 午夜福利欧美成人| 一级毛片高清免费大全| 国产成人影院久久av| 亚洲国产精品sss在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 母亲3免费完整高清在线观看| 国产三级中文精品| 九色国产91popny在线| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 少妇粗大呻吟视频| 黄色丝袜av网址大全| 丝袜美腿诱惑在线| 悠悠久久av| 日本在线视频免费播放| 99国产综合亚洲精品| 妹子高潮喷水视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 久久久精品欧美日韩精品| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 成人三级做爰电影| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 精品国产亚洲在线| 校园春色视频在线观看| 天天添夜夜摸| 亚洲精品中文字幕在线视频| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲九九香蕉| 久久婷婷成人综合色麻豆| 国产精品 欧美亚洲| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产高清视频在线播放一区| 精品久久久久久久久久久久久| 免费观看人在逋| 欧美一区二区精品小视频在线| 成人18禁在线播放| 黄频高清免费视频| 大型黄色视频在线免费观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 男女之事视频高清在线观看| 大型黄色视频在线免费观看| 久久人妻av系列| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲精品在线观看二区| 中文字幕久久专区|