lncRNA SNHG20表達(dá)與乳腺癌放療敏感性及預(yù)后的關(guān)系

文蘭香， 覃世運(yùn)， 陳麗君

(海南省三亞市中心醫(yī)院/海南省第三人民醫(yī)院腫瘤中心， 海南 三亞 572000)

乳腺癌屬于乳腺上皮組織來源惡性腫瘤，一般為女性發(fā)病。由于生活環(huán)境、飲食習(xí)慣、妊娠、精神狀態(tài)、遺傳等因素影響，乳腺癌在女性中發(fā)病率逐年升高，位居?jì)D科惡性腫瘤之首。乳腺癌中晚期患者生存率低，預(yù)后極差，嚴(yán)重影響患者生存質(zhì)量[1]。腫瘤放射治療簡(jiǎn)稱放療，目前臨床多采用手術(shù)、放療、化療等手段結(jié)合治療乳腺癌，可明顯提高患者生存率[2]。放療療效與腫瘤放療敏感性有關(guān)，放療敏感性差異導(dǎo)致乳腺癌患者接受放療后生存率等預(yù)后狀況明顯不同[3]。有研究表明，宮頸癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)明顯增加，抑制其表達(dá)可降低宮頸癌細(xì)胞增殖和侵襲能力[4]。與癌旁組織相比，lncRNA SNHG20在肝癌組織中表達(dá)顯著上調(diào)，與肝癌患者總生存率較差有關(guān)，是肝癌患者預(yù)后獨(dú)立影響因素[5]。然而lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中表達(dá)及其與乳腺癌放療敏感性、患者預(yù)后關(guān)系研究較少。本研究通過檢測(cè)lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中表達(dá)水平，分析其與乳腺癌放療敏感性及患者預(yù)后關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取2013年11月至2016年10月本院收治的乳腺癌患者119例作為研究對(duì)象，患者年齡29～67歲，平均(43.28±10.31)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)穿刺活檢或病理組織切片檢查確診為乳腺癌；②臨床及隨訪資料完整；③入組前未進(jìn)行任何治療；④患者及其家屬同意并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不能接受放、化療者；②合并患有其它部位腫瘤者；③患有嚴(yán)重精神疾病者。根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟(TNM)分期系統(tǒng)[6]，將乳腺癌患者分為：Ⅰ～Ⅱ期80例，Ⅲ期39例；根據(jù)分化程度分為高、中分化74例，低分化45例；根據(jù)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況分為：無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移77例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例；根據(jù)ER、PR表達(dá)情況分為：ER陽性63例、ER陰性56例，PR陽性72例、PR陰性47例；根據(jù)治療手段分為：有輔助化療60例，未輔助化療59例。取入組乳腺癌患者活檢癌組織，另取本院病理庫正常乳腺組織119例作為對(duì)照。兩組年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)海南省第三人民醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.2主要儀器和試劑:實(shí)時(shí)熒光定量(Quantitative Real-time PCR，qRT-PCR)儀(型號(hào)：ABI 7500 Fast，美國(guó)ABI公司)；總RNA提取試劑盒(貨號(hào)：TR205-10，北京天漠科技開發(fā)有限公司)；反轉(zhuǎn)錄試劑盒(貨號(hào)：ALH266-PTO，北京百奧萊博科技有限公司)；qRT-PCR試劑盒(貨號(hào)：RR820A，大連寶生物工程有限公司)。

1.3qRT-PCR法檢測(cè)lncRNA SNHG20表達(dá)水平:將癌組織及正常組織液氮迅速冷凍研磨后Trizol法提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后，用于qRT-PCR實(shí)驗(yàn)。20μL反應(yīng)體系如下：SYBR Premix Ex Taq II 10μL，ROX Dye 0.4μL，上游引物0.8μL，下游引物0.8μL，cDNA 2μL，無酶水6μL。反應(yīng)步驟如下：95℃ 30s，1循環(huán)；95℃ 5s、60℃ 33s，40循環(huán)。采用2-△△CT法計(jì)算lncRNA SNHG20相對(duì)表達(dá)量。本次實(shí)驗(yàn)所用引物如表1，以β-actin為內(nèi)參基因。引物由大連寶生物工程有限公司合成。

表1 qRT-PCR引物序列

1.4放療及療效評(píng)定:入組患者進(jìn)行根治性放療，分別用6 MV X射線照射胸壁及鎖骨上下區(qū)，5次/周，照射劑量40 Gy，治療4周。療效：放療結(jié)束1個(gè)月后，根據(jù)RECIST療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[7]分為：完全緩解(CR)：腫瘤完全消失，且維持4周；部分緩解(PR)：目標(biāo)病灶最長(zhǎng)徑總和減少≥30%，維持4周；疾病穩(wěn)定(SD)：變化在PR與PD之間；疾病進(jìn)展(PD)：目標(biāo)病灶最長(zhǎng)徑總和增加20%。緩解率=(CR+PR)/總例數(shù)×100%；總有效率=(CR+PR+SD)/總例數(shù)×100%。

2 結(jié) 果

2.1乳腺癌組織及正常乳腺組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)水平:乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)水平顯著高于正常乳腺組織(P<0.05)，見表2。

表2 lncRNA SNHG20表達(dá)水平比較

2.2乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系:以lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中表達(dá)平均值(3.15)為界分為高表達(dá)組和低表達(dá)組。乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)水平與年齡、腫瘤直徑、ER值及PR值無關(guān)(P均>0.05)，與分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及輔助化療有關(guān)(P均<0.05)，見表3。

表3 lncRNA SNHG20表達(dá)水平與乳腺癌患者臨床病理特征關(guān)系n(%)

2.3乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)與患者近期放療療效關(guān)系:lncRNA SNHG20高表達(dá)組患者放療后緩解率顯著低于低表達(dá)組(P<0.05)。lncRNA SNHG20高表達(dá)與低表達(dá)組放療總有效率相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

表4 乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)與患者近期放療療效關(guān)系n(%)

2.4乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)與患者遠(yuǎn)期生存情況關(guān)系:Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示，lncRNA SNHG20高表達(dá)組患者3年累積生存18例，lncRNA SNHG20低表達(dá)組患者3年累積生存48例。lncRNA SNHG20高表達(dá)組患者3年總生存率為34.62%，顯著低于lncRNA SNHG20低表達(dá)組3年總生存率71.64%( 2=13.750，P<0.05)。見圖1。

2.5Cox回歸模型分析乳腺癌患者預(yù)后影響因素:Cox回歸模型單因素分析結(jié)果顯示，分化程度低、TNM分期Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、lncRNA SNHG20高表達(dá)、未輔助化療是影響乳腺癌患者不良預(yù)后危險(xiǎn)因素(P均<0.05)。多因素分析結(jié)果顯示，TNM分期Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、lncRNA SNHG20高表達(dá)是影響乳腺癌患者不良預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P均<0.05)。見表5。

表5 乳腺癌患者預(yù)后影響因素分析

圖1 Kaplan-Meier生存分析

3 討 論

lnc RNA是一類長(zhǎng)度大于200堿基的非編碼RNA，具有調(diào)控細(xì)胞周期、細(xì)胞分化等功能。Wu等[8]研究證實(shí)，lncRNA SNHG20在前列腺癌中表達(dá)顯著上調(diào)，下調(diào)其表達(dá)可抑制前列腺癌發(fā)生發(fā)展。本研究結(jié)果顯示，與正常乳腺組織相比，lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中表達(dá)顯著升高，與Wu等[8]在卵巢癌中研究結(jié)果一致，提示SNHG20可能與乳腺癌發(fā)生有關(guān)。Zhenyao等[9]研究發(fā)現(xiàn)，非小細(xì)胞肺癌組織中l(wèi)ncRNA SNHG20表達(dá)明顯升高，與高TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及總生存率低有關(guān)。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況乳腺癌患者lncRNA SNHG20表達(dá)水平不同，與Zhenyao等[9]在非小細(xì)胞肺癌中研究結(jié)果相似，提示lncRNA SNHG20可能與乳腺癌發(fā)展有關(guān)。

放療是通過α、β、γ等放射線進(jìn)行局部治療，是乳腺癌治療的主要手段之一。有研究表明，lncRNA SBF2-AS1在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)上調(diào)，抑制SBF2-AS1表達(dá)則可增強(qiáng)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞放療敏感性[10]。Lai等[11]研究報(bào)道，放射敏感性乳腺癌組織中l(wèi)ncRNA CCAT1表達(dá)水平顯著低于耐輻射癌組織，lncRNA CCAT1是乳腺癌預(yù)后生物標(biāo)志物。提示lncRNA可能與腫瘤放療敏感性及患者預(yù)后有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，lncRNA SNHG20高表達(dá)組患者放療后緩解率顯著低于lncRNA SNHG20低表達(dá)組患者，提示lncRNA SNHG20表達(dá)水平升高可能與患者放療敏感性降低降低有關(guān)。Hu等[12]在乳腺癌研究中發(fā)現(xiàn)，lncRNA HOTAIR晚期癌細(xì)胞中表達(dá)量較高，能顯著增強(qiáng)癌細(xì)胞抗輻射性、促進(jìn)癌細(xì)胞增殖。提示lncRNA SNHG20高表達(dá)可能通過抑制乳腺癌細(xì)胞放療敏感性促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展。

Gao等[13]研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA SNHG20在口腔鱗癌組織中表達(dá)水平明顯升高，與患者生存期較短有關(guān)，是影響患者不良預(yù)后危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，lncRNA SNHG20高表達(dá)組患者3年總生存率明顯降低，提示lncRNA SNHG20高表達(dá)可能與乳腺癌患者預(yù)后不良有關(guān)。放療敏感性是影響腫瘤放療療效及患者預(yù)后重要因素。提示本研究中l(wèi)ncRNA SNHG20高表達(dá)可能通過抑制乳腺癌放療敏感性，影響患者3年總生存率低等不良預(yù)后。本研究還發(fā)現(xiàn)，TNM分期Ⅲ期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、lncRNA SNHG20高表達(dá)是影響乳腺癌患者不良預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素，提示lncRNA SNHG20表達(dá)水平可能成為判斷乳腺癌惡性程度、評(píng)估患者預(yù)后標(biāo)志物。

綜上所述，lncRNA SNHG20在乳腺癌組織中高表達(dá)，與乳腺癌放療敏感性低、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及患者總生存率有關(guān)。lncRNA SNHG20可能通過抑制乳腺癌放療敏感性，促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展，進(jìn)而影響患者總生存率低等不良預(yù)后。但由于本研究樣本量較少，研究較為基礎(chǔ)且隨訪時(shí)間較短，lncRNA SNHG20在乳腺癌中具體作用尚需進(jìn)一步深入研究。