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    吉林市左家鎮(zhèn)羊泰勒蟲感染情況調(diào)查

    2020-10-29 13:33:10徐雪雪王春玲馬明陽陳思錦田萬年
    貴州畜牧獸醫(yī) 2020年5期
    關(guān)鍵詞:呂氏吉林市泰勒

    徐雪雪, 王春玲, 馬明陽, 陳思錦, 田萬年*

    (1. 吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院動(dòng)物科技學(xué)院,吉林 吉林 132101; 2. 吉林省永吉縣黃榆鄉(xiāng)畜牧獸醫(yī)站,吉林 永吉 132223)

    羊泰勒蟲病是由泰勒屬(Theileria)的多種原蟲引起羊的血液原蟲病[1]。該病可通過蜱傳播,羊被攜帶蟲體的蜱叮咬后,蟲體由血液侵入羊體內(nèi)并寄生在巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、紅細(xì)胞中進(jìn)而引發(fā)病理現(xiàn)象。我國(guó)已報(bào)道能夠感染羊的泰勒蟲分別為呂氏泰勒蟲、尤氏泰勒蟲、綿羊泰勒蟲,其中呂氏泰勒蟲作為國(guó)內(nèi)的優(yōu)勢(shì)蟲種分布范圍廣且危害最大[2]。本病危害嚴(yán)重,外地引進(jìn)羊發(fā)病率較高,慢性發(fā)病羊生長(zhǎng)發(fā)育變緩,產(chǎn)肉量和產(chǎn)毛量顯著下降,給養(yǎng)羊業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失[3]。為了解吉林市左家鎮(zhèn)羊泰勒蟲優(yōu)勢(shì)蟲種及感染情況,本試驗(yàn)應(yīng)用血液涂片鏡檢結(jié)合PCR方法對(duì)采自吉林市左家鎮(zhèn)4個(gè)村的綿羊血液樣品進(jìn)行羊泰勒蟲檢測(cè),為相關(guān)防治提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 血液樣品無菌采集左家鎮(zhèn)馬虎頭村、大官地村、黃花村、河灣子村飼養(yǎng)的綿羊抗凝血樣品278份,用于相關(guān)項(xiàng)目檢測(cè)。

    1.2 主要試劑及儀器血液DNA提取試劑盒(上海生工生物工程有限公司)、DNA 2 000 Marker[寶生物工程(大連)有限公司]、瓊脂糖(上海生工生物工程有限公司)、PCR儀(百泰克生物技術(shù)有限公司)。

    1.3 血液涂片染色鏡檢制作血涂片,滴加甲醇固定,放入裝有吉姆薩染液的染缸中,室溫染色6 h,然后取出血涂片用蒸餾水沖洗,自然晾干后顯微鏡檢查羊泰勒蟲體。

    1.4 分子生物學(xué)檢測(cè)

    1.4.1 基因組DNA提取將采集的綿羊抗凝血按照血液基因組DNA提取試劑盒說明書程序提取全血基因組DNA,-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.4.2 羊泰勒蟲PCR檢測(cè)及測(cè)序根據(jù)GenBank 收錄的羊泰勒蟲18S rRNA基因序列,分別設(shè)計(jì)3種羊泰勒蟲PCR擴(kuò)增引物(見表1)。PCR反應(yīng)體系25 μL :TaqPreMix 12.5 μL,上、下游引物各0.5 μL,DNA 2 μL,dd H2O 9.5 μL。PCR反應(yīng)條件:95 ℃預(yù)變性3 min,94 ℃變性45 s,55~62 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,共35個(gè)循環(huán),最后72 ℃延伸5 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至上海生工生物技術(shù)有限公司進(jìn)行核苷酸序列測(cè)定。

    表1 羊泰勒蟲PCR擴(kuò)增引物

    2 結(jié)果

    2.1 血涂片染色鏡檢羊血涂片經(jīng)吉姆薩染色后在顯微鏡下觀察,發(fā)現(xiàn)梨形蟲體(見圖1)。

    圖1 羊血涂片染色鏡檢結(jié)果(1 000×)

    2.2 羊泰勒蟲PCR檢測(cè)及測(cè)序通過對(duì)278份綿羊血液樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增,檢測(cè)到呂氏泰勒蟲特異性條帶(見圖2)。回收10份PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)核苷酸序列測(cè)定,結(jié)果與GenBank 登錄的呂氏泰勒蟲(登錄號(hào):AY262119)同源性為99.9%,與尤氏泰勒蟲(登錄號(hào):AY262116)同源性為96.4%,與綿羊泰勒蟲(登錄號(hào):FJ603460)同源性為96.0%,鑒定左家鎮(zhèn)流行的羊泰勒蟲均為呂氏泰勒蟲(T.luwenshuni)。

    M:DL 2 000 DNA Marker; 1~5:檢測(cè)樣品; 6:陰性對(duì)照?qǐng)D2 羊泰勒蟲PCR擴(kuò)增結(jié)果

    2.3 不同村羊泰勒蟲感染率對(duì)4個(gè)村羊泰勒蟲PCR檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì),結(jié)果見表2。各村羊泰勒蟲平均感染率為19.06%。其中馬虎頭村羊泰勒蟲感染率最高,為32.89%;大官地村感染率最低,為8.33%。

    表2 左家鎮(zhèn)4個(gè)村羊泰勒蟲感染情況

    3 結(jié)論

    經(jīng)檢測(cè)鑒定,吉林市左家鎮(zhèn)羊泰勒蟲感染蟲種為呂氏泰勒蟲,平均感染率為19.06%,應(yīng)加強(qiáng)羊泰勒蟲病的防治工作。

    4 討論

    近年來我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)發(fā)展迅速,羊泰勒蟲病在大部分省(區(qū)、市)均有流行,造成很大的經(jīng)濟(jì)損失[4]。通常情況下羊感染一定數(shù)量的泰勒蟲才會(huì)表現(xiàn)出臨床癥狀,多為隱性感染。該病主要造成免疫器官受損,引發(fā)免疫抑制,免疫功能下降,嚴(yán)重影響生產(chǎn)性能。對(duì)羊泰勒蟲蟲種的收集與鑒定是防治該病的基礎(chǔ)。本試驗(yàn)應(yīng)用血液涂片檢查和PCR方法對(duì)左家鎮(zhèn)羊泰勒蟲進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示4個(gè)村均有呂氏泰勒蟲感染。分析原因可能與當(dāng)?shù)厣鷳B(tài)環(huán)境有關(guān),左家鎮(zhèn)為低山丘陵地區(qū),森林茂密,利于傳播媒介蜱的生長(zhǎng)繁殖,放牧?xí)r羊易受到蜱叮咬,從而感染羊泰勒蟲。本次調(diào)查發(fā)現(xiàn)所感染蟲種僅為呂氏泰勒蟲,尚未檢測(cè)到尤氏泰勒蟲和綿羊泰勒蟲,可為吉林市左家鎮(zhèn)羊泰勒蟲病的防控提供參考依據(jù),同時(shí)也豐富了我國(guó)羊泰勒蟲流行病學(xué)資料[5~7]。

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