蘿卜籽油中萊菔素的檢測及加工工藝對萊菔素含量的影響

李楠楠，韓立娟,2,，張維農(nóng),2，齊玉堂,2，賀軍波,2，王青松，劉 琛

（1.武漢輕工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，湖北 武漢 430023；2.農(nóng)產(chǎn)品加工與轉(zhuǎn)化湖北省重點實驗室，湖北 武漢 430000）

近年來，全球癌癥死亡率呈上升趨勢，與常規(guī)放療和化療相比，天然抗腫瘤藥物具有較低的副作用效果[1]，研究表明，食用十字花科蔬菜（如花椰菜、卷心菜、蘿卜）可以降低患某些癌癥的風(fēng)險，這種功效與十字花科蔬菜中含有的芥子油苷的某些水解產(chǎn)物有關(guān)[2-3]。芥子油苷是十字花科蔬菜中富含硫的次生代謝產(chǎn)物[4]，不具有生物活性[5]，但在組織被破壞后，與內(nèi)源性黑芥子酶接觸時，就會發(fā)生酶水解生成相應(yīng)的水解產(chǎn)物異硫氰酸鹽[6-7]，反應(yīng)過程如圖1所示[8]。研究表明，蘿卜籽中含有大量的異硫氰酸鹽，其中萊菔素（sulforaphene，SFE）占比最高，占總異硫氰酸鹽的60%以上[9]，具有抗癌、抗菌、抗氧化等特性[10]。SFE是一種小分子化合物，與花椰菜中富含的萊菔硫烷（sulforaphane，SFA）相比，SFE在烴基鏈上比SFA多了一個不飽和雙鍵，造成SFE的生物活性比SFA高了1.3～1.5 倍[11]，但SFE非常不穩(wěn)定，在水、堿性條件和高溫下都容易發(fā)生降解，但對光照較為穩(wěn)定[12]?！狾H和OH－可以進(jìn)攻SFE—N＝C＝S中的活潑碳原子，生成一種二聚物從而降解[13]，另外，OH－也可能與SFE分子中的亞砜基團(tuán)反應(yīng)生成—CH3SOOH而引起降解[14]。由于SFE的不穩(wěn)定性使它的提取和應(yīng)用受到很大限制。

圖1 芥子油苷酶解反應(yīng)方程式Fig.1 The reaction equation of glucosinolates

油用蘿卜籽一般含油量為30%～50%[15]，油中不飽和脂肪酸占80%以上，以油酸、芥酸、亞油酸為主[16]，有利于改善便秘，促進(jìn)小腸蠕動[17]，具有很強(qiáng)的保健功能[18]，使其享有“東方橄欖油”的美譽(yù)。目前制取蘿卜籽毛油一般采用冷榨法、超臨界CO2萃取法和溶劑浸出法等[19]。冷榨蘿卜籽油毛油常采用低溫水化、低溫干燥進(jìn)行精制，能夠最大程度地保留冷榨油的風(fēng)味[8]。但壓榨法的出油率比較低，且油中SFE含量不高[20]。阮麗紅[21]和張杰[22]等采用超臨界CO2萃取蘿卜籽毛油，發(fā)現(xiàn)萃取時間短、油脂得率高，但并未測定毛油中SFE含量，且該方法成本相對較高。高文庚等[23]對比了無水乙醚、石油醚、二氯甲烷、正己烷、乙酸乙酯分別作為浸出溶劑時蘿卜籽毛油的提取率，發(fā)現(xiàn)用二氯甲烷浸出時，提取率為34.47%，SFE含量（占毛油質(zhì)量）為89.5 mg/kg。趙功玲等[11]采用水泡、酶解、二氯甲烷提取的方法，比較了整粒浸泡酶解、種子粉碎酶解、種子粉碎3 種預(yù)處理方法對提取的蘿卜籽油中多種指標(biāo)的影響，發(fā)現(xiàn)整粒浸泡酶解法提取蘿卜籽毛油的中SFE含量為85.34 mg/kg[24]，8 種蘿卜籽毛油中SFE含量范圍為28.39～114.73 mg/kg。

現(xiàn)有報道檢測油中SFE含量均參考檢測蘿卜新鮮組織中SFE含量的方法[25-27]，鮮有文獻(xiàn)報道蘿卜籽毛油中SFE含量檢測的具體前處理方法[11,23-24]，所以首先應(yīng)建立合適的蘿卜籽毛油中SFE的檢測前處理方法。在現(xiàn)有的蘿卜籽加工工藝中，采用水泡和長時間酶解等預(yù)處理方式會造成SFE的降解，而且重點考察的是油脂的提取率和脂肪酸含量，鮮少考慮對預(yù)處理方式的改進(jìn)以提高毛油中的SFE含量，以及制取毛油后的精制或精煉過程對SFE的影響。且由于SFE的不穩(wěn)定性，即使得到了富含SFE的毛油，如何做到精煉過程中SFE的高保留更為重要。因此，本研究首先通過對蘿卜籽毛油的樣品前處理萃取方式的優(yōu)化和加標(biāo)回收實驗，確定蘿卜籽油中SFE含量的檢測方法，然后對比不同預(yù)處理對SFE生成量的影響，以蘿卜籽毛油中SFE含量為評價指標(biāo)對浸出溶劑進(jìn)行篩選，最后分析精煉工藝對SFE含量的影響規(guī)律，旨在為蘿卜籽油的加工和開發(fā)利用提供更多的指導(dǎo)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘿卜籽 武漢市蔬菜科學(xué)研究所；SFE標(biāo)準(zhǔn)品加拿大Toronto Research Chemicals公司；脫磷劑（主要成分為膨潤土、檸檬酸、助濾劑）、脫酸劑 武漢金鴻鑫生物科技有限公司；正己烷、乙醚、丙酮、二氯甲烷、甲醇（均為分析純），乙腈（色譜純） 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

AR2140電子分析天平 奧斯豪儀器（上海）有限公司；HD-809多功能電蒸籠 中山市東鳳鎮(zhèn)漢瑞電器廠；RE52C5旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、SHZ-D循環(huán)水真空泵 上海市亞榮生化儀器廠；7890A氣相色譜儀 安捷倫科技有限公司；GZX-9130ME數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱 上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠；KW-1000DC水浴恒溫振蕩器江蘇金壇億通電子有限公司。

1.3 方法

1.3.1 蘿卜籽毛油中SFE的氣相色譜檢測[28]

色譜柱：HP-5彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25 μm）；氣化室溫度和檢測器溫度均為280 ℃；采用氫火焰離子檢測器；恒流流速1.0 mL/min；分流比10∶1。升溫程序：80 ℃保持1 min，以20 ℃/min升到150 ℃，再以40 ℃/min升到280 ℃，保持3 min。

1.3.2 SFE標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將適量SFE標(biāo)準(zhǔn)品溶于乙腈，配制質(zhì)量濃度為10.0 mg/mL的SFE標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別將其稀釋至1.0、0.5、0.2、0.1、0.05 mg/mL。將配制好的SFE標(biāo)準(zhǔn)溶液按1.3.1節(jié)氣相色譜法進(jìn)行檢測，并記錄相應(yīng)的峰面積，以SFE進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，相應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。線性回歸方程為y=707.93x－38.494（R2=0.998 1），本方法的檢出限和定量限分別為0.25 μg/mL及1.00 μg/mL，即在質(zhì)量濃度為0.05～1.0 mg/mL區(qū)間內(nèi)，線性關(guān)系良好。

1.3.3 蘿卜籽毛油的樣品前處理萃取方式優(yōu)化

分別用有機(jī)溶劑甲醇、乙腈進(jìn)行直接萃取和依次用水、二氯甲烷進(jìn)行兩步萃取的方式萃取蘿卜籽毛油中的SFE，按照1.3.1節(jié)進(jìn)行氣相色譜分析。

甲醇、乙腈直接萃取法：取5 g蘿卜籽毛油，按體積比1∶1加入甲醇或乙腈，25 ℃恒溫振蕩萃取30 min，3 000 r/min離心3 min，分層取有機(jī)相，35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除甲醇或者乙腈，用乙腈定容。

兩步萃取法：取5 g蘿卜籽毛油，按體積比1∶1加入蒸餾水，25 ℃恒溫振蕩10 min后，3 000 r/min離心3 min，取水層，待用。按體積比1∶1加入二氯甲烷，25 ℃恒溫振蕩萃取30 min，3 000 r/min離心3 min，分層取有機(jī)相，35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除二氯甲烷，用乙腈定容。

1.3.4 加標(biāo)回收實驗

取5 g蘿卜籽毛油，分別添加質(zhì)量濃度依次為0、0.5 mg/mL和1.0 mg/mL的SFE標(biāo)準(zhǔn)溶液并使其充分混合，然后按照1.3.4節(jié)中兩步萃取的方法進(jìn)行處理并測定，根據(jù)目標(biāo)峰的峰面積和標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出樣品實際質(zhì)量濃度和樣品的加標(biāo)回收率。

1.3.5 蘿卜籽水分調(diào)節(jié)方式的選擇

將初始水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的蘿卜籽進(jìn)行粉碎，噴水調(diào)節(jié)水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到8%，取3 等份分別進(jìn)行以下處理：其中一份經(jīng)酶解后直接提取毛油；另一份在4 ℃平衡水分10 h后，再經(jīng)酶解；第3份放置于多功能蒸籠上蒸制3 min后取下，再經(jīng)酶解。酶解條件為50 ℃、3 h。索氏抽提法用乙醚抽提8 h提取蘿卜籽毛油，分別測定毛油中SFE含量。按照1.3.3節(jié)進(jìn)行兩步萃取法處理和1.3.1節(jié)氣相色譜分析。

1.3.6 預(yù)處理粉碎對SFE生成量的影響

取3 等份初始水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的蘿卜籽，一份整粒噴水調(diào)節(jié)水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到8%；另一份先粉碎后再噴水調(diào)節(jié)水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到8%；第3份作為對照樣，只粉碎，不調(diào)節(jié)水分。將3 份蘿卜籽分別密封，50 ℃酶解3 h。索氏抽提法用乙醚抽提8 h提取蘿卜籽毛油，測定毛油中SFE含量。按照1.3.3節(jié)進(jìn)行兩步萃取法處理和1.3.1節(jié)氣相色譜分析。

1.3.7 浸出溶劑的選擇

將蘿卜籽粉碎后噴水，調(diào)節(jié)水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)達(dá)到8%，25 ℃密封酶解10 min，以料液比1∶3（g/mL）分別加入正己烷、乙醚、二氯甲烷和丙酮[23-24]，45 ℃攪拌1 h，然后抽濾，重復(fù)2 次，將濾液合并，35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，即得到4 份浸出毛油，以提取率和毛油中SFE含量為評價指標(biāo)，篩選出最佳的浸出溶劑。按照1.3.3節(jié)進(jìn)行兩步萃取法處理和1.3.1節(jié)氣相色譜分析。按下式計算提取率：

1.3.8 蘿卜籽毛油精煉工藝

按照1.3.7節(jié)方法，用丙酮浸出得到蘿卜籽毛油。

常規(guī)精煉：按照已有報道[29]的方法對毛油分別進(jìn)行水化脫膠、堿煉脫酸、吸附脫色、真空脫臭，得到對應(yīng)的脫膠油、脫酸油、脫色油、脫臭油，分別測定對應(yīng)油中的SFE含量和其他理化指標(biāo)。

無水常溫精煉：稱取一定質(zhì)量的毛油，85 ℃真空干燥10 min，然后分次緩慢加入油質(zhì)量2%的脫磷劑，攪拌15 min后過濾，向清油中加入油質(zhì)量3%的脫酸劑，200 r/min攪拌2.5 h后離心，取上層清油，再加入油質(zhì)量2%的脫色劑（活性白土與白炭黑質(zhì)量比為1∶0.5），100 ℃真空攪拌30 min后過濾[30]，然后加入油質(zhì)量5%的無水硫酸鈉靜置，真空抽濾，即為經(jīng)過無水常溫精煉處理的蘿卜籽油，最后對無水常溫精煉油中SFE含量和其他理化指標(biāo)進(jìn)行測定。

1.3.9 蘿卜籽油的理化指標(biāo)測定

水分及揮發(fā)物含量：按照GB 5009.236—2016《動植物油脂水分及揮發(fā)物測定電熱干燥箱法》測定；色澤：按照GB/T 22460—2008《動植物油脂羅維朋色澤的測定》測定；磷脂含量：按照GB/T 5537—2008《糧油檢驗 磷脂含量的測定》重量法測定；酸價：按照GB 5009.229—2016《食品中酸價的測定》冷溶劑指示劑滴定法測定，以KOH計；過氧化值：按照GB 5009.227—2016《食品中過氧化值的測定》滴定法測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用Excel對平均值、標(biāo)準(zhǔn)差等數(shù)值進(jìn)行計算以及繪制圖表，使用Origin 8.5軟件進(jìn)行處理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘿卜籽毛油樣品前處理萃取方式優(yōu)化

圖2 有機(jī)溶劑直接萃取和經(jīng)過兩步萃取油中SFE氣相色譜檢測結(jié)果Fig.2 GC profiles of SFE in oils obtained by direct extraction with organic solvents and two-step extraction

采用氣相色譜儀檢測蘿卜籽油中的SFE，若直接進(jìn)樣，因脂肪酸的沸點太高，而使得分離困難，且干擾峰太多。此外，SFE的熱穩(wěn)定性差，所以甲酯化并不適合樣品的前處理?？紤]到SFE易溶于極性較大的有機(jī)溶劑，本實驗分別選取了甲醇和乙腈2 種與油脂互溶性差，而與SFE有很好互溶性的有機(jī)溶劑從油中一步萃取SFE。如圖2所示，箭頭所示即為目標(biāo)峰，顯然2 種有機(jī)溶劑除SFE以外，還同時從油脂中萃取了其他物質(zhì)，導(dǎo)致色譜圖中雜峰較多，目標(biāo)峰響應(yīng)值低，且峰形很差。

考慮到SFE有一定的極性，在油水兩相共存時，更易溶于水，且油中能溶于水的物質(zhì)較少，所以第1步先用水萃取油中的SFE，第2步再用二氯甲烷進(jìn)行萃取，最后經(jīng)氣相色譜進(jìn)行檢測，結(jié)果如圖2c所示。經(jīng)過上述兩步萃取后，目標(biāo)峰（圖中箭頭所指）清晰，且附近沒有雜峰干擾，峰形好，響應(yīng)值高，檢測效果較好。

2.2 加標(biāo)回收實驗結(jié)果

表1 加標(biāo)回收實驗結(jié)果Table 1 Results of spiked recovery experiments

為考察兩步萃取的效果，在萃取前添加2 種質(zhì)量濃度不同的SFE標(biāo)準(zhǔn)溶液，并做空白對照，按照前述方法處理后，進(jìn)行氣相色譜檢測，通過峰面積和擬合的標(biāo)準(zhǔn)方程計算實際濃度，然后計算出樣品的加標(biāo)回收率，結(jié)果如表1所示。加標(biāo)回收率在78.84%～99.70%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviations，RSD）均低于1.52%，且最低RSD僅為0.21%。表明該方法具有令人滿意的回收率和重復(fù)性，滿足分析的要求。

采用氣相色譜對蘿卜籽毛油中SFE進(jìn)行定量檢測。采用兩步萃取方式檢測蘿卜籽毛油中SFE，最終確定的前處理方式為5 g蘿卜籽毛油加入5 mL蒸餾水，25 ℃振蕩10 min，取水層，然后按體積比1∶1加入二氯甲烷，25 ℃恒溫萃取30 min，然后利用氣相色譜外標(biāo)法定量。回收率和重復(fù)性較好，表明本樣品前處理方式可以用于定量檢測蘿卜籽毛油中的SFE。

2.3 預(yù)處理對SFE生成量的影響

2.3.1 水分調(diào)節(jié)方式的選擇

表2 不同水分調(diào)節(jié)方式得到毛油中SFE含量Tabel 2 Effects of different water adjustment methods on sulforaphene content in crude oil

從表2可以看出，噴灑后平衡10 h和直接噴灑2 種水分調(diào)節(jié)方式對蘿卜籽毛油中SFE含量影響差別不大，表明無需等待水分平衡，即可完全滲透，完成酶解反應(yīng)。而經(jīng)過高溫蒸汽處理后得到的毛油中SFE含量為0，這極有可能是因為黑芥子酶是十字花科植物中的內(nèi)源酶，其活性跟植物種類、品種和不同的部位有關(guān)，可能是高溫蒸汽破壞了蘿卜籽中的黑芥子酶，使其失活[31]，導(dǎo)致無法產(chǎn)生SFE，也可能是由于SFE在高溫下?lián)]發(fā)，從而無法從油中檢測到SFE。從時效性考慮，最佳的水分調(diào)節(jié)方式為直接噴灑。

2.3.2 粉碎對SFE含量的影響

表3 粉碎對毛油中SFE含量的影響Table 3 Effects of crushing on sulforaphene content in crude oil

從表3可以看出，蘿卜籽經(jīng)過粉碎再調(diào)節(jié)水分所得到的毛油中SFE含量最高，而整粒調(diào)節(jié)水分的毛油中SFE含量低了一半，不做處理的對照樣中未能檢測到。這是因為粉碎嚴(yán)重破壞了蘿卜籽細(xì)胞的細(xì)胞壁，經(jīng)水分調(diào)節(jié)后，酶能與底物充分接觸，從而提高SFE含量。整個酶促反應(yīng)中需要水的參與，故而只經(jīng)過粉碎未調(diào)節(jié)水分的對照樣中未能檢測到SFE。而趙功玲等[24]在研究中發(fā)現(xiàn)蘿卜籽整粒調(diào)質(zhì)（相當(dāng)于固液比1∶2）酶解法得到的蘿卜籽毛油中SFE含量最高，與本實驗結(jié)果不相符，可能原因是其預(yù)處理工藝中浸泡時間過長，SFE發(fā)生降解或揮發(fā)，導(dǎo)致粉碎加水酶解法處理過的蘿卜籽毛油中SFE含量較整粒酶解法的低。

2.3.3 酶解時間對SFE生成量的影響

圖3 酶解時間對蘿卜籽中SFE生成量的影響Fig.3 Effect of enzymatic hydrolysis time on sulforaphene production in radish seeds

從表2、3可知，在蘿卜籽的前處理過程中，先將蘿卜籽粉碎，后噴水調(diào)質(zhì)得到的蘿卜籽毛油中SFE含量最高。SFE的生成過程為內(nèi)源酶黑芥子酶的酶解過程[6]，酶與底物接觸時間短，蘿卜籽中的芥子油苷未水解完全，使得產(chǎn)生的SFE量少，接觸的時間過長，反應(yīng)提前結(jié)束，同時由于SFE的不穩(wěn)定性[12]，導(dǎo)致生成的SFE不能很好保留，最終造成SFE的凈含量降低，所以酶解時間至關(guān)重要。本實驗首先固定酶解溫度為25 ℃，增濕比例（添加水分質(zhì)量/蘿卜籽質(zhì)量）為20%，改變酶解時間0～40 min（以10 min為間隔），結(jié)果如圖3所示。隨著酶解時間的延長，蘿卜籽中SFE生成量逐漸增加，在10 min左右達(dá)到最大值，隨后急劇下降。這是因為在酶解的過程中，SFE既在產(chǎn)生，又同時在分解，其含量處于一個動態(tài)過程，當(dāng)生成量大于分解量時，宏觀上就表現(xiàn)為增加，當(dāng)生成量小于分解量時，宏觀上表現(xiàn)為減少。在酶解時間為0 min時，蘿卜籽SFE生成量也達(dá)到了較高值，這是因為在進(jìn)行酶解前的噴水調(diào)節(jié)水分，再用乙腈萃取的過程中，也產(chǎn)生了SFE。故確定最佳酶解時間為10 min。

2.3.4 酶解溫度對SFE生成量的影響

SFE得率與黑芥子酶的活性有關(guān)，溫度是影響酶活力的重要因素[32]，同時溫度還會影響SFE的熱穩(wěn)定性。在最佳酶解時間10 min條件下，確定增濕比例為20%，改變酶解溫度為5～45 ℃（以10 ℃為間隔），結(jié)果如圖4所示。在25 ℃時，蘿卜籽中SFE含量達(dá)到最大值，這與黑芥子酶的最適溫度有關(guān)。Shen Lianqing等[33]在研究中發(fā)現(xiàn)，黑芥子酶在25 ℃時，酶活力達(dá)到最大，這與本實驗結(jié)果相符。同時SFE的熱穩(wěn)定極差，高溫時容易分解，因此，酶解溫度為25 ℃時，SFE生成量達(dá)到最高，是酶解的最適溫度。

圖4 酶解溫度對蘿卜籽中SFE生成量的影響Fig.4 Effect of enzymatic hydrolysis temperature on sulforaphene production in radish seeds

2.3.5 增濕比例對SFE生成量的影響

圖5 增濕比例對蘿卜籽中SFE生成量的影響Fig.5 Effect of humidification ratio on sulforaphene production in radish seeds

在蘿卜苷酶解反應(yīng)過程中，水充當(dāng)著重要的角色，既作為反應(yīng)的參與者，又作為SFE的良好溶劑，蘿卜籽水分含量直接影響SFE生成量[7]。以增濕比例為影響因素，在酶解溫度25 ℃、酶解時間10 min條件下，改變增濕比例為0%～40%（以10%為間隔），結(jié)果如圖5所示。隨著增濕比例的增加，蘿卜籽中SFE生成量呈現(xiàn)出急劇上升的趨勢。實際生產(chǎn)過程中可以根據(jù)不同的目的選擇合適的增濕比例，當(dāng)僅以大量生產(chǎn)SFE為目標(biāo)時，可以選擇較大的增濕比例；水分含量高時不能作為油料進(jìn)行浸出提油，則應(yīng)選用較小的增濕比例，將蘿卜籽水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)調(diào)質(zhì)到8%，即增濕比例為3.6%。

綜上所述，當(dāng)蘿卜籽作為油料開發(fā)利用，用溶劑浸出法制取蘿卜籽油時，最佳的預(yù)處理工藝為酶解溫度25 ℃、酶解時間10 min、增濕比例3.6%。

2.4 浸出溶劑對毛油中SFE含量的影響

表4 不同溶劑得到浸出毛油中SFE含量Table 4 Sulforaphene contents in crude oils extracted with different organic solvents

從表4可以看出，用丙酮、二氯甲烷、乙醚和正己烷4 種不同極性的溶劑進(jìn)行浸出取油時，油脂提取率的差別在4%以內(nèi)，但是SFE含量差超過70 mg/kg。其中極性最強(qiáng)的是丙酮，其相應(yīng)的浸出毛油中SFE含量也最高，達(dá)到了832.36 mg/kg；而極性最弱的正己烷，其相應(yīng)的浸出毛油中幾乎不含SFE。這可能是因為SFE屬于弱極性物質(zhì)[21]，在選取的4 種溶劑中，相比于其他3 種溶劑，丙酮與SFE的極性更接近一些，所以SFE在丙酮浸出過程中會隨著油脂大量溶出，脫溶后留在毛油中。這一結(jié)果在蘿卜籽的浸出溶劑選擇上具有一定的指導(dǎo)作用，選擇與油脂互溶性好的非質(zhì)子溶劑更適合生產(chǎn)富含SFE的蘿卜籽油。但應(yīng)注意不能選擇強(qiáng)極性的乙醇等作為浸出溶劑，因為醇羥基中的氧原子會進(jìn)攻SFE的活潑碳原子，造成SFE的降解[34]。

2.5 常規(guī)精煉與無水常溫精煉得到的蘿卜籽油對比分析

表5 常規(guī)精煉與無水常溫精煉工藝不同階段蘿卜籽油中SFE含量和基本理化指標(biāo)Table 5 Sulforaphene contents and physicochemical indexes of radish seed oil at different stages of conventional refining and anhydrous room temperature refining

植物油毛油中一般都含有磷脂、蛋白質(zhì)和糖類等膠溶性雜質(zhì)，其中以磷脂含量居多[35]。由于磷脂具有吸濕和吸水膨脹性，吸水膨脹后形成乳濁的膠體溶液，進(jìn)而可以采用離心的方法將其從毛油中分離出來。常規(guī)精煉一般均采用這種水化方式脫除磷脂等雜質(zhì)。由表5可以看出，通過常規(guī)的水化脫膠、堿煉脫酸、吸附脫色、真空脫臭工序后得到的蘿卜籽油均未檢測到SFE，這與SFE的穩(wěn)定性和精煉條件有關(guān)。SFE的熱穩(wěn)定性差，在水、高pH值的環(huán)境中易分解，而精煉過程一般都伴隨高溫、水、強(qiáng)堿等過程[36]。故常規(guī)精煉方法不適合保留蘿卜籽油中的SFE，需要尋找一種更適宜蘿卜籽毛油的精煉方法，使其滿足食用油質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的同時，又能保證SFE的高保留率[37]。

要保證SFE的高保留，就要在精煉過程中避免高溫、水、強(qiáng)堿等。本實驗室提出了一種無水常溫精煉法，即不加水不加熱的一種溫和精煉方法，最終得到的成品油中SFE含量為760.35 mg/kg，保留率高達(dá)91.3%。無水常溫精煉成品油中磷脂含量比毛油略有降低，這是由于使用的脫磷劑雖然對油中的磷脂、蛋白質(zhì)等物質(zhì)存在一定的吸附作用，但脫除效果不如常規(guī)的水化脫膠。從水分及揮發(fā)物上來看，常規(guī)精煉脫膠階段由于水分的加入引起水分及揮發(fā)物含量略有升高，其余階段水分及揮發(fā)物含量不斷降低，將有利于油脂的保存以及SFE的保留，無水常溫精煉工藝中真空干燥以及無水硫酸鈉也都起到了良好的脫水效果。

從表5可以看出，采用無水常溫精煉工藝，經(jīng)過脫酸劑處理后油的酸價顯著降低，為0.58 mg/g，略高于常規(guī)堿煉脫酸工藝。但由于目前尚無蘿卜籽油國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因此，參照同屬于十字花科的菜籽油的國家標(biāo)準(zhǔn)，發(fā)現(xiàn)可達(dá)到三級菜籽油的酸價要求（≤1.0 mg/g）。無水常溫精煉油的色澤較毛油有明顯降低，與脫膠油相近，但比常規(guī)脫色油R值高。這是由于脫色在常溫下進(jìn)行，使其脫色效果不如常規(guī)精煉脫色時的高溫脫色。過氧化值是植物油脂的衛(wèi)生監(jiān)測指標(biāo)，用于判斷油脂是否酸敗以及酸敗程度[38]。由表5可知，采用丙酮浸出制備的蘿卜籽毛油經(jīng)過無水常溫精煉工藝或者常規(guī)精煉的過氧化值均遠(yuǎn)低于國家食用油標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié) 論

分別用甲醇、乙腈進(jìn)行直接萃取和用水、二氯甲烷進(jìn)行兩步萃取的方法萃取蘿卜籽毛油中的SFE，最終確定兩步萃取方式更適合作為蘿卜籽油中SFE含量的最佳檢測前處理方法。通過不同的預(yù)處理，得到的蘿卜籽毛油中SFE含量不同，從時效性考慮，最佳的預(yù)處理工藝為先將蘿卜籽進(jìn)行粉碎，直接噴灑調(diào)節(jié)水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)到8%，25 ℃酶解10 min。對比丙酮、二氯甲烷、乙醚和正己烷4 種浸出溶劑制取蘿卜籽毛油，油脂提取率差值在4%以內(nèi)，但是SFE含量差值超過70 mg/kg，用丙酮浸出制取的毛油中SFE含量最高，達(dá)到了832.36 mg/kg。對毛油采用常規(guī)精煉時，第1步水化脫膠后油中的SFE就已完全損失。而采用無水常溫精煉工藝得到的蘿卜籽油，其基本指標(biāo)均可達(dá)到國家三級食用油標(biāo)準(zhǔn)。同時，無水常溫精煉蘿卜籽油中SFE含量為760.35 mg/kg，保留率高達(dá)91.3%。對比2 種精煉工藝，后者的工序得到簡化，SFE保留率高，品質(zhì)達(dá)到了國標(biāo)三級食用油標(biāo)準(zhǔn)，因此更適合作為蘿卜籽油的精煉工藝。在蘿卜籽油的加工過程中，應(yīng)盡量避免油中SFE的損失，從而獲得高營養(yǎng)價值的蘿卜籽油。