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    脂肪含量對(duì)牦牛乳硬質(zhì)干酪質(zhì)構(gòu)、流變和微觀結(jié)構(gòu)的影響

    2020-10-28 07:13:36石永祺宋雪梅
    食品科學(xué) 2020年20期
    關(guān)鍵詞:低脂全脂脫脂

    石永祺,梁 琪,宋雪梅,張 炎

    (甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅省功能乳品工程實(shí)驗(yàn)室,甘肅 蘭州 730070)

    牦牛(Bos grunniensL.)屬于一種特殊的牛亞科,主要生活在低溫、低氧的青藏高原地區(qū)[1],牦牛乳是藏區(qū)牧民的主要收入來源[2]。與牛乳相比,牦牛乳的脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)在5.5%~7.2%之間[3],是牛乳的2 倍以上,被認(rèn)為是一種天然的濃縮乳。奶酪又叫干酪,是一種發(fā)酵乳產(chǎn)品,在西方國(guó)家是一種非常普遍的食品。在我國(guó)主要以民族傳統(tǒng)奶酪的形式存在,主要有蒙古族的酪蛋子、西藏的曲拉、哈薩克族的奶疙瘩、白族的乳餅以及乳扇[4-5],其中絕大多數(shù)我國(guó)的傳統(tǒng)奶酪屬于硬質(zhì)干酪。牦牛乳硬質(zhì)干酪以我國(guó)青藏高原的特色乳資源為原料制作,其脂肪質(zhì)量分?jǐn)?shù)一般在40%~50%之間,質(zhì)地軟硬適中,水分含量低,發(fā)酵時(shí)間較長(zhǎng),易于貯藏[6]。干酪中的脂肪不僅具有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,而且對(duì)干酪的質(zhì)地、口感發(fā)揮作用,對(duì)其感官和功能特征有著重要影響[7]。有研究表明,脂肪含量對(duì)干酪的理化指標(biāo)、質(zhì)構(gòu)、微觀結(jié)構(gòu)和流變學(xué)特性都有影響。Cernikova等[8]研究表明,隨著再制干酪中脂肪與干物質(zhì)比例的增加,脂肪球的尺寸增大,干酪質(zhì)構(gòu)中硬度降低。Khanal等[9]利用共聚焦激光掃描顯微鏡發(fā)現(xiàn)全脂和低脂荷斯坦乳切達(dá)干酪中脂肪粒徑和脂肪面積的區(qū)別。Ningtyas等[10]研究了脂肪含量對(duì)荷斯坦奶油干酪在剪切力變化下的流變學(xué)特性和微觀結(jié)構(gòu)等的影響。莫蓓紅等[11]對(duì)低脂、全脂和高脂夸克干酪的質(zhì)構(gòu)、流變、持水性和感官進(jìn)行測(cè)定分析,得出全脂夸克干酪最佳。綜上,脂肪含量對(duì)干酪的質(zhì)地組織及微觀結(jié)構(gòu)產(chǎn)生影響。由于牦牛乳本身的高脂肪含量及其乳源的特殊性,脂肪對(duì)牦牛乳硬質(zhì)干酪的影響大于荷斯乳干酪,且脂肪含量對(duì)牦牛乳硬質(zhì)干酪的影響至今鮮見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)不同脂肪含量牦牛乳硬質(zhì)干酪的理化指標(biāo)、質(zhì)構(gòu)和流變學(xué)特性進(jìn)行研究,旨在揭示脂肪含量對(duì)牦牛乳硬質(zhì)干酪的影響并解釋其影響機(jī)制,為干酪產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    新鮮牦牛乳采自甘肅甘南藏族自治州;發(fā)酵劑(乳酸乳球菌乳脂亞種、乳酸乳球菌乳酸亞種);凝乳酶(皺胃酶、牛胃蛋白酶)。

    氯化鈉、氯化鈣、尼羅紅、固綠、無水乙醚、石油醚、沸石、鹽酸、無水碳酸鈉、甲基紅、溴甲酚綠均為分析純,尼羅紅為超級(jí)純。

    1.2 儀器與設(shè)備

    干酪槽(38 cm×38 cm×6.2 cm)由本實(shí)驗(yàn)室自制;牛奶分離器 青??灯教柲茈妱?dòng)牛奶分離器廠;TA.XTPlus物性分析儀 英國(guó)Stevens公司;MCR301流變儀 奧地利Anton Paar公司;LSM 800激光掃描共聚焦顯微鏡 德國(guó)Zeiss公司。

    1.3 方法

    1.3.1 牦牛乳硬質(zhì)干酪加工工藝流程

    原料乳→檢驗(yàn)→巴氏殺菌→冷卻→添加發(fā)酵劑→添加CaCl2(0.3 g/L)→添加凝乳酶→凝乳→切割、排乳清→加鹽、攪拌→二次加熱→排乳清→堆釀→壓榨成型→真空包裝→成熟

    1.3.2 牦牛乳硬質(zhì)干酪理化指標(biāo)的測(cè)定

    牦牛乳硬質(zhì)干酪出品率測(cè)定[12]:將牦牛乳硬質(zhì)干酪壓榨完后稱其質(zhì)量,根據(jù)干酪水分含量與質(zhì)量計(jì)算干酪出品率,如式(1)所示:

    為更準(zhǔn)確地比較3 種脂肪含量牦牛乳硬質(zhì)干酪的出品率,將干酪的實(shí)測(cè)出品率校正到水分質(zhì)量分?jǐn)?shù)為45%時(shí)再進(jìn)行計(jì)算,如式(2)所示:

    1.3.3 干酪脂肪含量的測(cè)定

    參考GB 5009.6—2016《食品中脂肪的測(cè)定》中的堿水解法進(jìn)行。

    1.3.4 水分含量的測(cè)定

    參考GB 5009.3—2016《食品中水分的測(cè)定》中的直接干燥法進(jìn)行。

    1.3.5 干酪質(zhì)構(gòu)的測(cè)定

    采用Chavhan等[13]的方法作適當(dāng)修改,測(cè)定牦牛乳硬質(zhì)干酪硬度、彈性等指標(biāo)。取邊長(zhǎng)(1.00±0.06)cm的正方體樣品,測(cè)前樣品室溫下放置1 h,進(jìn)行3 次實(shí)驗(yàn),取其平均值。參數(shù)設(shè)置:探頭型號(hào)P25,滿負(fù)荷壓力25 kg,測(cè)試前探頭下降速率5.0 mm/s,測(cè)試速率1.0 mm/s,測(cè)試后探頭回程速率5.0 mm/s,壓縮比50%,進(jìn)行2 次壓縮。

    1.3.6 干酪微觀結(jié)構(gòu)的測(cè)定

    采用激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行牦牛乳硬質(zhì)干酪微觀結(jié)構(gòu)的觀測(cè)[14]。從干酪樣品切下5 mm×5 mm×2 mm薄片,將薄片置于帶凹槽的載玻片。吸取1.0 g/L的固綠溶液滴至樣品薄片,在暗盒中染色5 min后,吸取0.1 g/L的尼羅紅-乙醇溶液滴至樣品薄片,繼續(xù)在暗盒染色5 min。染色完成后用蒸餾水從樣品一角緩緩沖洗3 次以洗凈染料,清洗后覆蓋0.17 mm蓋玻片,倒置于63 倍油鏡下觀察。尼羅紅與固綠激發(fā)波長(zhǎng)分別為488 nm與633 nm。調(diào)整至視野清晰后采集圖片。

    1.3.7 干酪流變的測(cè)定

    參考Mizuno等[15]方法并進(jìn)行修改。干酪樣品取出后在室溫平衡30 min,從干酪中心采樣,樣品直徑40 mm,厚度1 mm。樣品置于流變儀托盤中心。流變儀程序設(shè)置:剪切應(yīng)變0.002、角頻率1 Hz、升溫速率5 ℃/min、溫度變化范圍25~80 ℃。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

    每個(gè)處理重復(fù)3 次,采用SPSS 22.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異顯著性分析和Pearson相關(guān)性分析,用Origin 8.0軟件作圖。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 牦牛乳硬質(zhì)干酪的理化指標(biāo)

    以脫脂牦牛乳和全脂牦牛乳為原料,按0∶1、1∶1、2∶1的體積比,制得全脂、半脫脂、低脂3 種脂肪含量的牦牛乳,將其制成牦牛乳硬質(zhì)干酪,對(duì)其脂肪含量、水分含量和出品率進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果如表1所示。

    表1 不同脂肪含量牦牛乳硬質(zhì)干酪的理化指標(biāo)Table 1 Physicochemical indicators of yak milk hard cheeses with different fat contents

    由表1可知,全脂牦牛乳硬質(zhì)干酪的脂肪含量分別是半脫脂和低脂干酪的2.06 倍和2.94 倍,有極顯著差異(P<0.01)。全脂牦牛乳干酪的出品率最高,全脂和半脫脂干酪的校正出品率分別比低脂干酪高44.04%和20.31%。決定干酪出品率的主要成分是牦牛乳中酪蛋白和脂肪的總和,低脂干酪中脂肪的移除不等于水分添加量[16],低脂干酪的出品率較低。

    2.3 牦牛乳硬質(zhì)干酪的質(zhì)構(gòu)特性

    脂肪作為蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的填料,賦予干酪潤(rùn)滑性和柔軟性,而蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)給干酪提供有彈性的質(zhì)地[17]。干酪質(zhì)構(gòu)取決于蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)和脂肪填充顆粒的性質(zhì)。由表2可得,低脂干酪硬度高于半脫脂和全脂干酪硬度,分別比全脂和半脫脂干酪高50.31 g和35.70 g。較高的脂肪含量使得干酪質(zhì)地更加柔軟,而半脫脂和低脂干酪脂肪含量較少,脂肪含量降低,蛋白質(zhì)網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)變得更致密,導(dǎo)致干酪的硬度更大[18]。干酪彈性和咀嚼性隨脂肪含量降低而增加,呈負(fù)相關(guān)。3 種脂肪含量干酪硬度、彈性和咀嚼性均表現(xiàn)出極顯著差異。干酪黏聚性隨脂肪含量減少而降低,呈正相關(guān)。在牦牛乳硬質(zhì)干酪中,脂肪含量越多,脂肪滴破壞蛋白質(zhì)基質(zhì),軟化全脂干酪質(zhì)地,降低了硬度和黏性。結(jié)果表明,對(duì)比其他兩種脂肪含量的干酪,全脂干酪的黏聚性最大。低脂干酪中蛋白質(zhì)含量高,酪蛋白分子間的交聯(lián)增加,形成更高的彈性和內(nèi)聚性[19]。

    表2 不同脂肪含量牦牛乳硬質(zhì)干酪的質(zhì)構(gòu)Table 2 Texture properties of yak milk hard cheeses with different fat contents

    表3 參數(shù)間的相關(guān)性分析Table 3 Correlation analysis between tested parameters

    表3為理化指標(biāo)和質(zhì)構(gòu)指標(biāo)之間的相關(guān)系數(shù),8 個(gè)指標(biāo)間均存在顯著正相關(guān)或負(fù)相關(guān)關(guān)系。其中脂肪含量與水分含量、硬度、彈性和咀嚼性顯著負(fù)相關(guān),相關(guān)系數(shù)分別為-0.909、-0.851、-0.795和-0.768;脂肪含量與實(shí)測(cè)出品率、校正出品率和黏聚性極顯著正相關(guān)。說明脂肪含量對(duì)干酪的理化指標(biāo)和質(zhì)構(gòu)有著重要影響。

    2.3 牦牛乳硬質(zhì)干酪的微觀結(jié)構(gòu)

    共聚焦激光掃描顯微鏡是研究食品微觀結(jié)構(gòu)的良好技術(shù)[20]。該技術(shù)源自生物和醫(yī)學(xué),現(xiàn)已經(jīng)成功應(yīng)用于食品[21]。如圖1所示,激光共聚焦顯微鏡圖像清楚地表明干酪結(jié)構(gòu)隨脂肪含量的變化。干酪基質(zhì)表現(xiàn)為蛋白質(zhì)-水基質(zhì)的聚集體[22],圖中不均勻分布的脂肪球像填充物一樣,填充在蛋白質(zhì)基質(zhì)中。蛋白質(zhì)基質(zhì)(紅色)中散布有各種尺寸和形狀的脂肪球(綠色)。41.85%脂肪含量的牦牛乳硬質(zhì)干酪微觀結(jié)構(gòu)與20.31%和14.25%脂肪含量的牦牛乳硬質(zhì)干酪微觀結(jié)構(gòu)明顯不同。全脂干酪中脂肪球數(shù)量大于半脫脂和低脂干酪中脂肪球數(shù)量,脂肪含量減少導(dǎo)致脂肪球數(shù)量較少,Kumar[23]也觀察到相似的結(jié)果。圖2為經(jīng)軟件統(tǒng)計(jì)圖1中脂肪球的面積,3 種硬質(zhì)干酪中,全脂干酪脂肪球面積較大,脂肪球密集。全脂、半脫脂和低脂干酪中脂肪顆粒面積分別為1 800.20、1 317.59、792.02 μm2,且脂肪面積分別占總面積的10.0%、7.3%和4.4%。低脂和半脫脂干酪(圖1B、C)中脂肪以較為分散的形式出現(xiàn),結(jié)塊現(xiàn)象較少,而全脂干酪(圖1A),脂肪球結(jié)塊較多。低脂干酪具有更少的開放空間被乳脂肪球占據(jù),蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)更致密。

    全脂干酪中脂肪顆粒分布的較密集,低脂干酪中脂肪顆粒分布較分散。牦牛乳硬質(zhì)干酪會(huì)隨著成熟時(shí)間的增加,脂肪顆粒有聚集趨勢(shì)。全脂干酪的脂肪顆粒之間間距小,成熟過程中脂肪顆粒更易聚集到一起,形成條狀的脂肪“干酪槽”。Ningtyas等[10]研究發(fā)現(xiàn)低脂干酪中,脂肪呈分散狀態(tài),幾乎沒有結(jié)塊現(xiàn)象,而高脂奶油芝士干酪的乳脂球總是聚集在一起。這是由于脂肪顆粒分布的變化,引起質(zhì)構(gòu)特性的差異。

    圖1 不同脂肪含量牦牛乳硬質(zhì)干酪的微觀結(jié)構(gòu)Fig.1 Microstructures of yak milk cheeses with different fat contents

    圖2 脂肪顆粒覆蓋的面積Fig.2 Areas covered with fat particles

    2.4 牦牛乳硬質(zhì)干酪的流變學(xué)特性

    流變學(xué)決定了半固態(tài)干酪制品的結(jié)構(gòu)性質(zhì),如黏彈性、屈服應(yīng)力和流動(dòng)行為。干酪本質(zhì)上也屬于黏彈性材料,具有黏彈性材料特性,即干酪同時(shí)具有黏性材料和彈性材料的雙重特性[24]。研究者根據(jù)流變學(xué)測(cè)量結(jié)果表征干酪功能特性并改變其結(jié)構(gòu)[25]。動(dòng)態(tài)流變實(shí)驗(yàn)包括頻率掃描、應(yīng)變掃描、溫度掃描和時(shí)間掃描這幾種基本掃描模式。干酪的流變性對(duì)評(píng)價(jià)干酪品質(zhì)有重要意義,溫度掃描可了解材料熔化特性,反映加熱過程中溫度變化對(duì)干酪脂肪和蛋白結(jié)構(gòu)的影響,衡量干酪顆粒在加熱時(shí)流動(dòng)或擴(kuò)散的能力[17]。對(duì)于不同脂肪含量的牦牛乳硬質(zhì)干酪,測(cè)定其在溫度條件下的形變,對(duì)比溫度對(duì)不同脂肪含量干酪熔化性和流動(dòng)性的影響在生產(chǎn)和應(yīng)用中都更有意義。

    圖3 不同脂肪含量牦牛乳硬質(zhì)干酪的G’的影響Fig.3 Effect of fat content on elastic modulus of yak milk hard cheeses

    在高溫狀態(tài)下,脂肪受熱融化,隨溫度升高流動(dòng)性越大。在干酪質(zhì)地中,影響其相變溫度的重要因素包括酪蛋白膠束之間作用力及其網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)與脂肪球之間的作用力[26]。干酪在融化過程中彈性模量(G’)的變化如圖3所示,3 種脂肪含量干酪G’與溫度呈負(fù)相關(guān),隨溫度升高G’下降。在初始溫度25 ℃條件下,全脂、半脫脂和低脂干酪G’分別為19 930、29 250、34 360 Pa。升溫過程中,干酪逐漸開始呈現(xiàn)坍塌狀態(tài),3 種脂肪含量干酪均從類固相轉(zhuǎn)化為類液相,到結(jié)束溫度80 ℃時(shí),3 種脂肪含量干酪G’差異逐漸縮小。開始升溫時(shí)全脂、半脫脂和低脂干酪G’是結(jié)束時(shí)的12.69、10.17 倍和8.93 倍,全脂干酪G’隨溫度的升高下降速率更快。對(duì)G’的3 條曲線進(jìn)行擬合后,全脂擬合曲線為:y=-0.070 8x3+17.503x2-1 538.7x+48 686,R2=0.999 0;半脫脂擬合曲線為:y=-0.322 1x3+61.248x2-4 011.6x+96 200,R2=0.998 2;低脂擬合曲線為:y=-0.41x3+76.834x2-4 950.2x+117 311,R2=0.997 1。在升溫過程中,3 種樣品G’下降,是由于熔化過程中酪蛋白膠束收縮和酪蛋白間的相互作用減弱[27]。低脂和半脫脂干酪G’均高于全脂干酪,較低的脂肪含量增加了G’,脂肪含量對(duì)干酪結(jié)構(gòu)影響非常顯著。可能由于干酪脂肪含量越少,酪蛋白網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)中無脂肪填充,結(jié)構(gòu)更加緊密。此結(jié)果與質(zhì)構(gòu)(表2)的結(jié)果對(duì)應(yīng)。

    圖4 脂肪含量對(duì)牦牛乳硬質(zhì)干酪tanδ值的影響Fig.4 Effect of fat content on tanδ value of yak milk hard cheeses

    tanδ值是黏性模量(G”)和G’比值,測(cè)定干酪黏彈特性(tanδ)可反映干酪熔化性[28]。tanδ值越大,表明黏彈性材料流動(dòng)性越大,越趨近液體特性[29]。3 種脂肪含量干酪在20~85 ℃升溫過程中tanδ值的變化如圖4所示。3 種脂肪含量干酪樣品tanδ值隨溫度升高而變化,其數(shù)值先增加,當(dāng)全脂、半脫脂和低脂干酪的溫度分別達(dá)70.98、76.49 ℃和76.49 ℃時(shí),tanδ值達(dá)最大,分別為0.910 7、0.788 7和0.734 5,隨后數(shù)值隨溫度持續(xù)上升而逐漸減小。對(duì)tanδ值的3 條G”曲線進(jìn)行擬合后,全脂干酪擬合曲線為:y=-1×10-5x3+0.002 3x2-0.104 1x+1.788 5,R2=0.986 3;半脫脂干酪擬合曲線為:y=-6×10-6x3+0.001 1x2-0.048 5x+0.994 9,R2=0.982 3;低脂干酪擬合曲線為:y=-1×10-6x3+0.000 4x2-0.018 5x+0.574 1,R2=0.982 5。3 種樣品的tanδ值均小于1,說明干酪樣品的G”始終小于G’,即干酪樣品的流變學(xué)特征中彈性占主導(dǎo)地位。全脂干酪tanδ值大于半脫脂和低脂干酪,由于酪蛋白之間相互作用決定干酪熔化性,被蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)束縛的脂肪容易流動(dòng)[30]。所以,脂肪含量較高的全脂干酪中,填充在其蛋白質(zhì)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的脂肪減弱了酪蛋白膠束之間的相互作用力,使得全脂干酪流動(dòng)性更好。干酪的G’和tanδ值與其脂肪含量相關(guān)[31],這兩個(gè)值越小,說明干酪越富有彈性。綜合可得出,脂肪含量對(duì)干酪的熔化性和流動(dòng)性有很明顯的影響,含量越少?gòu)椥栽酱蟆?/p>

    3 結(jié) 論

    本研究將干酪的3 種脂肪含量與質(zhì)構(gòu)各參數(shù)間進(jìn)行了相關(guān)性分析,使用共聚焦激光掃描顯微鏡對(duì)牦牛乳硬質(zhì)干酪的微觀結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察。結(jié)果表明:脂肪含量影響牦牛乳硬質(zhì)干酪的出品率,全脂干酪>半脫脂干酪>低脂干酪。脂肪含量對(duì)水分含量、硬度、彈性和咀嚼性顯著負(fù)相關(guān),對(duì)黏聚性顯著正相關(guān)。分析微觀結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn),干酪中脂肪含量越少,脂肪顆粒覆蓋面積越小。對(duì)干酪進(jìn)行流變學(xué)溫度掃描,表明3 種脂肪含量干酪G’與溫度呈負(fù)相關(guān),隨溫度升高G’下降。脂肪含量越高,其tanδ值越大,干酪流動(dòng)性越好。綜上,脂肪含量對(duì)牦牛乳硬質(zhì)干酪的理化指標(biāo)、質(zhì)構(gòu)特性、流變特性和微觀結(jié)構(gòu)均有影響,本研究對(duì)牦牛乳硬質(zhì)干酪的機(jī)制研究以及干酪產(chǎn)業(yè)化發(fā)展提供重要依據(jù)。

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