乳腺癌組織PD1、PDL1表達(dá)變化及其與患者臨床病理參數(shù)、預(yù)后的關(guān)系探究

李麗煌

[摘要] 目的 分析乳腺癌組織PD1、PDL1表達(dá)與病理、預(yù)后的關(guān)聯(lián)。 方法 方便選擇該院于2018年6月—2019年12月收治的116例乳腺癌患者為研究對(duì)象，所有患者均接受術(shù)后病理檢查及免疫組化檢查。 結(jié)果 116例乳腺癌患者的腫瘤組織PD1陽性表達(dá)率78.45%、PDL1陽性表達(dá)率77.59%。乳腺癌組織PD1陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（χ2=7.940）、組織學(xué)分級(jí)（χ2=8.350）有關(guān)（P<0.05）;而PDL1陽性表達(dá)則與臨床分期（χ2=5.920）、組織學(xué)分級(jí)（χ2=8.190）有關(guān)（P<0.05）。乳腺癌PD1陽性表達(dá)組3年生存率低于PD1陰性表達(dá)組（χ2=8.590，P<0.05）;乳腺癌PDL1陽性表達(dá)組3年生存率低于PDL1陰性表達(dá)組（χ2=8.140，P<0.05）。 結(jié)論 乳腺癌組織的PD1及PDL1表達(dá)與病理、預(yù)后存在密切關(guān)聯(lián)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)PD1陽性表達(dá)、PDL1陽性表達(dá)患者的管理，以改善其預(yù)后狀況。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌;PD1;PDL1;3年生存率

[中圖分類號(hào)] R737? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2020）08（b）-0039-03

Expression Changes and Its Relationship with Clinical Pathological Parameters and Prognosis of Patients

LI Li-huang

Department of Pathology， Affiliated Hospital of Putian University， Putian， Fujian Province，? 351100 China

[Abstract] Objective To analyze the correlation between PD1， PDL1 expression and pathology and prognosis in breast cancer. Methods A total of 116 breast cancer patients admitted to the hospital from June 2018 to December 2019 were convenienty selected as the research subjects. All patients underwent postoperative pathological examination and immunohistochemical examination. Results The positive expression rate of PD1 in 116 breast cancer patients was 78.45%， and the positive expression rate of PDL1 was 77.59%. Breast cancer tissue PD1 positive expression was associated with lymph node metastasis （χ2=7.940）， histological grade （χ2=8.350） （P<0.05）; while PDL1 positive expression was related to clinical stage （χ2=5.920）， histological grade （χ2=8.190） （P<0.05）. The 3-year survival rate of breast cancer PD1 positive expression group was lower than that of PD1 negative expression group （χ2=8.590， P<0.05）; the 3-year survival rate of breast cancer PDL1 positive expression group was lower than that of PDL1 negative expression group （χ2=8.140， P<0.05）. Conclusion The expression of PD1 and PDL1 in breast cancer tissue is closely related to pathology and prognosis. The management of patients with positive PD1 and PDL1 expression should be strengthened to improve their prognosis.

[Key words] Breast cancer; PD1; PDL1; 3-year survival rate

乳腺癌是導(dǎo)致女性死亡的主要原因[1]。目前，我國乳腺癌發(fā)病率正處于不斷升高狀態(tài)[2]。雖然乳腺癌治療體系已經(jīng)得到了良好的發(fā)展，但仍有部分乳腺癌患者容易形成不良預(yù)后[3]。乳腺癌患者的預(yù)后預(yù)測是臨床管理的主要內(nèi)容，也是調(diào)整乳腺癌治療方案、降低乳腺癌病死率的關(guān)鍵所在。近年來，隨著臨床關(guān)于乳腺癌研究的不斷深入，乳腺癌的免疫機(jī)制逐漸成為其病理機(jī)制分析及預(yù)后預(yù)測的重點(diǎn)。PD1、PDL1均屬于免疫細(xì)胞活化的標(biāo)志，這兩種標(biāo)志物密切參與機(jī)體的免疫功能及免疫調(diào)節(jié)機(jī)制[4]。為確定乳腺癌患者的PD1、PDL1表達(dá)狀況及其對(duì)預(yù)后狀況的預(yù)測作用，該研究主要針對(duì)該院于2018年6月—2019年12月收治的116例乳腺癌患者進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選擇該院收治的116例乳腺癌患者為研究對(duì)象。所有患者均經(jīng)術(shù)后病理檢查確診。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn);②對(duì)該研究知情同意，且簽署知情同意書。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①術(shù)前2周內(nèi)接受抗腫瘤治療者;②伴其他惡性腫瘤或嚴(yán)重疾病者。

患者年齡26～74歲，平均（49.6±16.4）歲;瘤體直徑>3 cm者64例，≤3 cm者52例，平均（3.2±0.6）cm。

1.2? 方法

所有乳腺癌患者均接受術(shù)后病理診斷、免疫組化檢查。①病理檢查：取手術(shù)切除的乳腺癌組織標(biāo)本，于術(shù)后2 h內(nèi)送檢。②免疫組化檢查：以PBS緩沖液沖洗乳腺癌患者的乳腺癌組織，以4%濃度多聚甲醛進(jìn)行固定處理。石蠟包埋后，按照5 μm厚度標(biāo)準(zhǔn)對(duì)組織進(jìn)行切片處理。將切片組織以二甲苯脫蠟，經(jīng)乙醇水化處理后，置于3%濃度的過氧化氫室持續(xù)孵育10 min。以PBS緩沖液洗滌標(biāo)本，持續(xù)洗滌3次。置于95℃溫度下的枸緣酸鈉緩沖液（0.01 mol/L酸性溶液）內(nèi)浸泡15 min，再次以PBS緩沖液洗滌3次。利用山羊血清封閉10 min（封閉溫度條件為37℃）。棄血清，依次向標(biāo)本中滴加適量稀釋至1：100濃度的PD1一抗及PDL1一抗，置于4℃條件下孵育過夜。選用PBS緩沖液洗滌標(biāo)本5 min，重復(fù)3次。向標(biāo)本滴加稀釋至1：200比例的生物素化二抗，置于37℃條件下持續(xù)孵育0.5 h。以PBS緩沖液洗滌（3次）。滴加鏈霉素卵白素工作液（PBS標(biāo)記），并經(jīng)孵育、洗滌處理后，以DAB顯色，經(jīng)蘇木素復(fù)染，常規(guī)乙醇脫水，經(jīng)二甲苯處理后，以適量樹膠（中性）對(duì)乳腺癌組織標(biāo)本進(jìn)行封片處理。

乳腺癌患者經(jīng)術(shù)后病理確診后，常規(guī)實(shí)施抗腫瘤治療，隨訪跟蹤患者的預(yù)后狀況，統(tǒng)計(jì)其3年生存率。

1.3? 觀察指標(biāo)

觀察患者腫瘤組織的PD1、PDL1表達(dá)狀況;評(píng)估乳腺癌組織PD1表達(dá)與病理及預(yù)后狀況的關(guān)聯(lián);分析乳腺癌組織PDL1表達(dá)與病理及預(yù)后狀況的關(guān)系。

1.4? 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

①PD1表達(dá)陽性：乳腺癌組織細(xì)胞膜可見棕褐色顆粒狀或淺黃色顆粒狀即為PD1陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞在乳腺癌組織中占比高于80%計(jì)4分，處于51%～80%水平計(jì)3分，處于11%～50%水平計(jì)2分，10%以下則計(jì)1分;細(xì)胞膜未見著色計(jì)為0分，細(xì)胞膜呈淺黃色計(jì)1分，呈深黃色則計(jì)2分，呈棕褐色則計(jì)3分。如染色狀況及陽性細(xì)胞占比的得分乘積≤4分，提示PD1陰性表達(dá);如高于4分，則提示PD1陽性表達(dá)。②PDL1表達(dá)陽性：細(xì)胞質(zhì)可見棕褐色顆粒狀或淺黃色顆粒狀。細(xì)胞質(zhì)染色強(qiáng)度及陽性細(xì)胞占比的計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)與PD1一致，二者乘積高于4分者，提示PDL1陽性表達(dá)，≤4分者提示陰性表達(dá)。

1.5? 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和百分比（%）表示，組間比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? PD1及PDL1表達(dá)狀況

免疫組化檢驗(yàn)結(jié)果顯示：116例乳腺癌患者中，91例PD1陽性，陽性表達(dá)率為78.45%;90例PDL1陽性，陽性表達(dá)率77.59%。

2.2? PD1表達(dá)與乳腺癌病理的關(guān)系

單因素分析結(jié)果顯示：乳腺癌組織PD1陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)狀況存在關(guān)聯(lián)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.3? PDL1表達(dá)與乳腺癌患者病理的關(guān)系

單因素分析結(jié)果提示：PDL1陽性表達(dá)與組織學(xué)狀況、病理分析有關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.4? PD1表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)系

依據(jù)乳腺癌患者的PD1表達(dá)狀況分組，分為PD1陽性表達(dá)組（91例）、PD1陰性表達(dá)組（25例）。見表3。

2.5? PDL1表達(dá)與乳腺癌預(yù)后的關(guān)聯(lián)

PDL1陰性表達(dá)組3年生存率92.31%，高于PDL1陽性表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

3? 討論

近年來，隨著我國乳腺癌規(guī)模的不斷擴(kuò)大，這種惡性腫瘤的臨床管理及預(yù)后評(píng)估工作，逐漸引起了人們的關(guān)注[5-6]。從乳腺癌的病理生理機(jī)制來看，乳腺癌患者的腫瘤細(xì)胞處于高度免疫抑制微環(huán)境中，大量的腫瘤細(xì)胞主要借助介導(dǎo)負(fù)性共刺激信號(hào)、向外釋放免疫抑制性細(xì)胞因子等形式，逃避自身免疫反應(yīng)，避免被自身免疫細(xì)胞消滅，并于患者體內(nèi)大量繁殖[7-9]。

PD1、PDL1均與機(jī)體免疫反應(yīng)存在密切關(guān)聯(lián)。其中，PD1的功能以參與誘導(dǎo)免疫耐受、抑制T淋巴細(xì)胞等為主。從表達(dá)特征來看，這種跨膜蛋白多見于參與抗原1識(shí)別的免疫細(xì)胞。而PDL1則是PD1的一種配體分子，這一跨膜分子主要分布于腫瘤細(xì)胞、造血細(xì)胞等位置，其具有良好的免疫調(diào)控作用。

為了評(píng)估乳腺癌患者腫瘤組織的PD1及PDL1表達(dá)狀況，該研究將116例接受術(shù)后病理診斷的患者作為研究對(duì)象，采用免疫組化檢驗(yàn)方法針對(duì)乳腺癌患者的腫瘤組織標(biāo)本進(jìn)行檢查，結(jié)果提示：患者的PD1陽性表達(dá)率為78.45%，而PDL1陽性表達(dá)率則為77.59%。上述結(jié)果與呂淑貞等[10]的研究基本一致：93例乳腺癌患者的PD1陽性表達(dá)率及PDL1陽性表達(dá)率均為79.57%。乳腺癌患者腫瘤組織PD1、PDL1呈高表達(dá)的原因可能為乳腺癌患者病灶所處的免疫抑制微環(huán)境，可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的PDL1表達(dá)，而隨著PDL1表達(dá)水平的升高，微環(huán)境對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖、生長的促進(jìn)作用也變得越來越明顯，這一微環(huán)境可持續(xù)誘導(dǎo)抗腫瘤T細(xì)胞的凋亡[11]。此外，PDL1還可與位于淋巴細(xì)胞表面的PD1形成相互作用，持續(xù)干擾乳腺癌患者機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答，加劇腫瘤的免疫逃逸，形成惡性循環(huán)[12]。

該研究通過乳腺癌組織PD1、PDL1表達(dá)與病理之間的關(guān)系分析表明：乳腺癌組織PD1陽性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織學(xué)分級(jí)存在關(guān)聯(lián)，即PD1陽性表達(dá)者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率更高，且組織學(xué)分級(jí)較高;而PDL1陽性表達(dá)則與臨床分期、組織學(xué)分級(jí)存在關(guān)聯(lián)。上述結(jié)果提示：乳腺癌組織PD1、PDL1陽性表達(dá)容易造成腫瘤進(jìn)展。由此可認(rèn)為，可采用PD1、PDL1表達(dá)狀況評(píng)估，判斷患者的病情嚴(yán)重程度。如免疫組化檢驗(yàn)結(jié)果提示PD1、PDL1呈陽性表達(dá)，提示腫瘤進(jìn)展，患者病情嚴(yán)重的風(fēng)險(xiǎn)較高。

而從PD1、PDL1表達(dá)狀況與患者預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)來看，相對(duì)于PD1、PDL1陰性表達(dá)患者而言，PD1、PDL1高表達(dá)者的3年生存率偏低。根據(jù)上述結(jié)果，當(dāng)通過免疫組化檢驗(yàn)確定乳腺癌患者的病理組織呈PD1、PDL1高表達(dá)時(shí)，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)這類患者的重視，以改善其預(yù)后狀況。

綜上所述，乳腺癌組織PD1、PDL1表達(dá)與患者病理、預(yù)后狀況密切相關(guān)，為改善患者的預(yù)后狀況，宜早期實(shí)施病理組織免疫組化檢驗(yàn)，識(shí)別PD1、DPL1陽性表達(dá)者，并加強(qiáng)對(duì)這類患者的管理，以延長患者的生存時(shí)間。

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（收稿日期：2020-05-17）