Raf激酶抑制蛋白的研究進(jìn)展

陳禮升 錢 康 田 波

（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院神經(jīng)生物學(xué)系，武漢430030）

Raf激酶抑制蛋白（Raf kinase inhibitory protein，RKIP）是磷脂酰乙醇胺結(jié)合蛋白（Phosphatidylethanolamine－binding protein，PEBP）超家族的一個(gè)成員。1984年Bernier等［1］首先在牛腦里發(fā)現(xiàn)了PEBP－1蛋白，后來 Banfield等［2］又從老鼠的精子中分離出該種蛋白。PEBP是一類高度保守的小分子蛋白，和目前已知的其他蛋白沒有同源性。2002年，Hickox等［3］將哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的PEBPs成員分成三個(gè)亞類：PEBP－1、PEBP－2和PEBP－3，而RKIP屬于 PEBP－1 ENREF 1。Wang等［4］最近又在人骨髓間質(zhì)細(xì)胞里發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的PEBP成員，并將其命名為h PEBP4。1999年Yeung等［5］用酵母雙雜交篩選法純化出PEBP－1，同時(shí)證明其能通過結(jié)合Raf－1阻止 MEK磷酸化，進(jìn)而抑制Raf－1／MEK／ERK信號(hào)通路，因此把PEBP－1重新命名為RKIP ENREF 3。這次研究對RKIP來說是里程碑式的，它首次闡述了RKIP在信號(hào)通路上的作用。此后人們對RKIP的研究越來越多，發(fā)現(xiàn)其還參與G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)通路［6］和NF－κB信號(hào)通路的調(diào)控［7］。

RKIP的物種分布非常廣泛，從酵母、植物和動(dòng)物等真核生物到細(xì)菌這樣的原核生物都能發(fā)現(xiàn)同源蛋白［8］。RKIP的組織分布同樣廣泛，人、猴、牛、老鼠等哺乳動(dòng)物和雞的大部分組織都有表達(dá)［9］，且在睪丸、大腦膠質(zhì)細(xì)胞和海馬中的含量最高［10，11］。雖然很多內(nèi)分泌器官表達(dá)RKIP，但在前列腺、精囊和子宮的分泌液以及乳汁、血液、唾液中沒有發(fā)現(xiàn)其存在［12］。最 近，Zhang 等［13］研 究 人 和 小 鼠 胰 腺 的RKIP，發(fā)現(xiàn)其僅在胰島表達(dá)，在腺泡和導(dǎo)管細(xì)胞不表達(dá)。免疫組織化學(xué)分析顯示，RKIP主要分布在組織的細(xì)胞質(zhì)及質(zhì)膜上［14］。Vallee等［15］研究發(fā)現(xiàn)，RKIP是通過靜電作用的方式與帶負(fù)電荷的膜結(jié)合從而定位到質(zhì)膜上的，而不是通過與膜上的磷脂酰乙醇胺直接作用。

近年來，由于能影響細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、調(diào)控細(xì)胞周期、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移以及在神經(jīng)退行性疾病、生殖系統(tǒng)、情緒調(diào)整中的作用，人們越來越認(rèn)識(shí)到RKIP的重要性，對其研究也越來越多。本文主要介紹RKIP的生物學(xué)功能，著重于其在神經(jīng)系統(tǒng)、腫瘤和生殖系統(tǒng)中的研究進(jìn)展。

1.RKIP的基因表達(dá)及蛋白結(jié)構(gòu)

RKIP基因家族在生物進(jìn)化中高度保守，相隔很遠(yuǎn)的物種都能找到同源蛋白質(zhì)。人除了有RKIP－1表達(dá)外，還存在有h PEBP4。老鼠則表達(dá)三種RKIP基因：RKIP－1全身廣泛表達(dá)；RKIP－2局限于睪丸［3，16］；mRKIP－4位于老鼠的19號(hào)染色體，主要表達(dá)在視網(wǎng)膜［17］。人RKIP基因定位于12號(hào)染色體q24.23［14，18］，長約10 000bp，含4個(gè)外顯子，其轉(zhuǎn)錄的 mRNA長達(dá)1434bp［19］。人 RKIP的 mRNA跟牛的有95%相似性，跟老鼠的則有85.5%相似性［10］。人RKIP是187個(gè)氨基酸組成的23k Da蛋白質(zhì)，與牛21k Da的RKIP有186個(gè)氨基酸重疊，與老鼠23k Da的 RKIP有187個(gè)氨基酸重疊［19］。RKIP能被結(jié)晶成兩種不對稱的蛋白分子，這兩種蛋白的關(guān)系目前還不清楚。用凝膠電泳和熒光技術(shù)還發(fā)現(xiàn)有RKIP二聚體存在［2］。后來的研究顯示磷酸化RKIP會(huì)導(dǎo)致二聚體產(chǎn)生，并且是RKIP與Raf－1解離后結(jié)合到GRK2上的一個(gè)關(guān)鍵步驟［20］。晶體結(jié)構(gòu)研究表明，RKIP是由9個(gè)β折疊和4個(gè)α螺旋組成的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)。對所有的PEBP蛋白家族進(jìn)行基因序列分析，發(fā)現(xiàn)其中間的序列高度保守，而N端和C端序列變異性較大［21］。PEBP中間就都存在一個(gè)保守的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，由中央一個(gè)大的β折疊兩側(cè)分別連著一個(gè)小的β折疊和兩個(gè)C端α螺旋構(gòu)成［22］。RKIP也含這樣的保守結(jié)構(gòu)域作為配體結(jié)合袋，對調(diào)節(jié)多種底物包括核苷酸（GTP和GDP）、黃素單核苷酸（Flavin mononucleotide，F(xiàn)MN）、磷脂和非脂類化 合 物 結(jié) 合 RKIP 有 重 要 作 用［2，15，23－25］。 結(jié)構(gòu)分析顯示，RKIP的配體結(jié)合袋很窄淺，接近蛋白分子的表面，只能容納磷脂分子的極性端［14］。當(dāng)RKIP與配體結(jié)合時(shí)，氫鍵發(fā)生斷裂，分子構(gòu)象改變，游離的N端自由度變大，易被裂解成海馬膽堿能神經(jīng)元刺激肽（Hippocampal cholinergic neurostimulatingpeptide，HCNP）［26］。

2.RKIP與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

2.1 Ras／Raf－1／MEK／ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

Yeung等的體外研究實(shí)驗(yàn)表明，RKIP能與Raf－1、MEK－1及 ERK－2結(jié)合，但結(jié)合 ERK－2的作用較弱，從而抑制Raf－1介導(dǎo)的 MEK磷酸化和Ras／Raf－1／MEK／ERK 信號(hào)通路［5］。RKIP不能同時(shí)結(jié)合Raf－1和MEK，因?yàn)楦髯耘c它們結(jié)合的位點(diǎn)有部分重疊［27］。RKIP不是Raf－1的直接底物也不能與Ras結(jié)合。我們知道Raf－1最重要的磷酸化位點(diǎn)是338位的絲氨酸以及340和341位的酪氨酸。已經(jīng)有研究證明PAK （P21－activated kinase）能磷酸化Raf－1第338位的絲氨酸，而Src家族激酶能磷酸化Raf－1的第340和341位的酪氨酸。突變Raf－1這些位點(diǎn)為模擬磷酸化的天冬氨酸，RKIP對MAPK通路就沒有影響。Trakul等［28，29］發(fā)現(xiàn)，雖然可以與Raf－1和MEK－1結(jié)合，但RKIP是通過封閉PAK與Src家族激酶磷酸化Raf－1激酶的功能區(qū)，而不是通過破壞Raf－1和 MEK間的相互作用來抑制MAPK通路。RKIP缺失并不影響細(xì)胞信號(hào)通路的存在與否，但是會(huì)讓細(xì)胞對EGF等外界刺激變得更加敏感。

雖然RKIP也能與B－Raf相互作用，但B－Raf相當(dāng)于Raf－1 Tyr341的位點(diǎn)已經(jīng)被磷酸化的氨基酸取代了，因此RKIP的表達(dá)水平被下調(diào)后并不影響B(tài)－Raf的激活［28］。這說明RKIP主要通過調(diào)節(jié)Raf－1的活性而不是B－Raf的活性來影響MAPK信號(hào)。研究還表明，蛋白激酶C（Protein kinase C，PKC）可以磷酸化RKIP第153位絲氨酸，致使其失去與Raf－1結(jié)合的能力。同時(shí)PKC與RKIP在質(zhì)膜上位置靠近，這些都表明PKC可以與RKIP相互作用，從而在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮作用［30］。

2.2 G蛋白偶聯(lián)受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

GRK－2（G protein coupled receptor kinase－2）是G蛋白偶聯(lián)受體（G protein coupled recepters，GPCR）主 要 的 負(fù) 反 饋 抑 制 因 子［31］。GPCR 被GRK－2磷酸化后，與G蛋白脫離進(jìn)而內(nèi)化，最終導(dǎo)致G蛋白信號(hào)失活。有研究表明RKIP是GRK－2的生理抑制因子，能夠結(jié)合GRK－2的N端結(jié)構(gòu)域，從而抑制GPCR磷酸化。RKIP不影響其它能磷酸化 GRCP的蛋白激酶如 GRK－5、PKA 和 PKCα等［6］。Kroslak等［32］研究證明，RKIP能增強(qiáng) G 蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。突變RKIP的Ser153為不可磷酸化的氨基酸，結(jié)果RKIP失去了與GRK－2的結(jié)合能力，表明磷酸化的RKIP才能與GRK－2結(jié)合。當(dāng)GPCR受到刺激后，會(huì)激活PKC導(dǎo)致RKIP的Ser153磷酸化。磷酸化的RKIP與Raf－1脫離，轉(zhuǎn)而結(jié)合GRK－2［6］。最新研究顯示RKIP的二聚化在其從Raf－1轉(zhuǎn)換結(jié)合到GRK－2的過程中發(fā)揮重要作用。Ser153磷酸化的RKIP極易變成二聚體，并且RKIP二聚體高親和GRK－2但低親和Raf－1［20］。因此RKIP的磷酸化同時(shí)調(diào)節(jié)了兩條信號(hào)通路：⑴結(jié)合抑制了GRK－2從而增強(qiáng)了GPCR信號(hào)通路；⑵通過與Raf－1分離，激活了 MAPK信號(hào)通路。RKIP在Raf－1和GRK－2之間的這種交叉作用揭示了一種新的信號(hào)調(diào)節(jié)機(jī)制，這對維持促生長的Raf－1信號(hào)通路和抑生長的GRK－2信號(hào)通路間的平衡起著重要作用［6］。

2.3 NF－κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路

NF－κB是由REL轉(zhuǎn)錄因子家族成員組成的同源或異源二聚體，能上調(diào)大量蛋白參與多種重要的生物學(xué)活動(dòng)，如免疫反應(yīng)、炎癥、以及細(xì)胞增殖凋亡等。在無刺激狀態(tài)下，NF－κB與抑制因子IκB結(jié)合，以無活性的復(fù)合物形式存在于細(xì)胞漿中，阻止核轉(zhuǎn)錄作用的發(fā)生。受到刺激后，IκB會(huì)被IKK（IκB kinase）復(fù)合物磷酸化，隨后泛素化，最終被蛋白酶體降解。NF－κB因此被釋放出來并轉(zhuǎn)位到細(xì)胞核內(nèi)［33］。Jazirehi等［34］發(fā)現(xiàn)用利妥昔單抗可以提高非霍奇金淋巴瘤中RKIP的表達(dá)從而抑制NF－κB途徑，使抗凋亡基因的表達(dá)降低。研究表明過表達(dá)RKIP可抑制 TNF－α或者IL－1β誘導(dǎo)的 NF－κB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，低表達(dá)RKIP則有相反作用，并且這種作用獨(dú)立于RKIP對 MAPK信號(hào)通路的影響［7］。進(jìn)一步研究證實(shí)，RKIP能和IKK復(fù)合物自身及上游因子如IKKα（IκB kinaseα）、IKKβ（IκB kinaseβ）、NIK（NF－κB inducing kinase）、TAK1（TGF－βactivated kinase 1）以及泛素連接酶TARF6相互作用［35］?；蚯贸?RKIP后，TAK1、TRAF6和IKK復(fù)合物泛素化或磷酸化減少。有趣的是RKIP表達(dá)無論增加和減少都會(huì)導(dǎo)致IκB磷酸化和降解減少。這些表明RKIP可能是一種支架蛋白，促進(jìn)IKK復(fù)合物的組裝。RKIP表達(dá)下調(diào)會(huì)提高NF－κB靶基因的基底表達(dá)水平，而這似乎與IκB降解減少不一致。研究發(fā)現(xiàn)RKIP基因敲除細(xì)胞會(huì)相應(yīng)的下調(diào)NF－κB信號(hào)通路的負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子IκB、A20和Cyld表達(dá)。這提示RKIP抑制NF－κB信號(hào)通路是通過增加負(fù)反饋調(diào)節(jié)因子表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的［35］。

3.RKIP在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用

3.1 RKIP與阿爾茨海默病

阿爾茨海默?。ˋlzheimer disease，AD）的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，主要有β淀粉樣蛋白級(jí)聯(lián)學(xué)說、中樞膽堿能損傷學(xué)說、興奮性氨基酸毒性學(xué)說和Tau蛋白學(xué)說。也有報(bào)道認(rèn)為其他因素如炎癥和免疫功能異常、自由基和氧化應(yīng)激作用、胰島素相關(guān)糖代謝異常、鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)、脂質(zhì)代謝異常等與AD的發(fā)生有關(guān)，但這些病理生理機(jī)制尚待進(jìn)一步闡明。在遲發(fā)型AD患者的大腦中，我們發(fā)現(xiàn)了RKIP的mRNA水平嚴(yán)重下降［36］。HCNP是RKIP N端2－12位氨基酸殘基的裂解物［26］，HCNP和神經(jīng)生長因子（Nerve growth factor，NGF）一起維持腦內(nèi)膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶（Choline acetyltransferase，Ch AT）高水平，而高水平Ch AT對海馬內(nèi)側(cè)隔核的發(fā)育非常重要［37］。RKIP低表達(dá)會(huì)相應(yīng)的造成Ch AT水平下降，導(dǎo)致與年齡相關(guān)的記憶力減退，這正是AD的特征癥狀之一。研究還發(fā)現(xiàn)海馬CA1區(qū)的Hirano小體大量積聚和強(qiáng)表達(dá) HCNP［38，39］。Hirano小體為神經(jīng)細(xì)胞樹突近端棒形嗜酸性包涵體，大量出現(xiàn)在老年性AD病人中［38］。它能夠擾亂海馬膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)，從而影響人的學(xué)習(xí)和記憶。在AD早期病人的腦脊液中也檢測到了高劑量的HCNP［40］?，F(xiàn)在還不清楚RKIP或者HCNP在神經(jīng)系統(tǒng)以及AD中的具體作用機(jī)制。

在APP過表達(dá)的AD Tg2576小鼠模型中，George等［41］發(fā)現(xiàn)了Aβ斑的形成與海馬區(qū)RKIP水平下降高度相關(guān)。通過敲除小鼠RKIP基因，發(fā)現(xiàn)RKIP在邊緣系統(tǒng)包括嗅核，海馬，杏仁核等中廣泛表達(dá)。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)四個(gè)月大的RKIP－／－小鼠在嗅覺和學(xué)習(xí)方面比同齡的正常小鼠差［16］，而嗅覺下降也是AD的特征表現(xiàn)。研究認(rèn)為RKIP可能通過調(diào)節(jié) GRCP信號(hào)傳導(dǎo)通路來影響嗅覺［6，42］。

種種跡象表明，RKIP及其產(chǎn)物HCNP在AD的病理過程中具有重要作用。

3.2 RKIP神經(jīng)系統(tǒng)中的其他作用

RKIP在神經(jīng)元分化中起著重要作用。分別建立RKIP過表達(dá)和下調(diào)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)RKIP過表達(dá)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤向神經(jīng)元方向分化，而通過sh RNA干擾技術(shù)使RKIP下調(diào)的神經(jīng)母細(xì)胞瘤向膠質(zhì)細(xì)胞方向分化。RKIP使神經(jīng)母細(xì)胞瘤向神經(jīng)元方向分化的機(jī)制主要是增強(qiáng)了PKC－ERK1／2和 GPCR信號(hào)傳導(dǎo)通路［43］。

視交叉上核（Suprachiasmatic nucleus，SCN）是哺乳動(dòng)物晝夜節(jié)律調(diào)節(jié)系統(tǒng)的中樞結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生和調(diào)節(jié)睡眠－覺醒、激素、代謝和生殖等眾多生物節(jié)律和功能。SCN的結(jié)構(gòu)和功能改變被認(rèn)為是生物節(jié)律紊亂的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)。SCN的晝夜節(jié)律性除了受到自身生理和行為調(diào)節(jié)外，還被大量外界環(huán)境因素比如光等影響。光信息通過視網(wǎng)膜下丘腦束從視網(wǎng)膜傳送到視交叉上核后，SCN神經(jīng)元激活一系列胞內(nèi)信號(hào)通路來調(diào)節(jié)生物節(jié)律。其中最重要的信號(hào)通路是p44／p42 MAPK／ERK，是光調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律性的先決條件［44］。研究發(fā)現(xiàn)光能使小鼠SCN的RKIP磷酸化并與Raf解離。在基因突變RKIP使其不可磷酸化的小鼠中，SCN沒有表現(xiàn)出光誘導(dǎo)的ERK1／2激活或者生物節(jié)律的改變。相反的在RKIP基因敲除小鼠中，SCN的ERK1／2活性對光刺激反應(yīng)增強(qiáng)并且加強(qiáng)了光對生物節(jié)律的調(diào)節(jié)。研究表明了RKIP在光調(diào)節(jié)SCN生物晝夜節(jié)律性中的重要作用［45］。

長時(shí)程抑制（Long－term depression，LTD）是突觸可塑性的重要形式之一，并且與學(xué)習(xí)記憶存在著密切的關(guān)系。已經(jīng)有人證明了PKC依賴的MAPK信號(hào)通路在小腦LTD中的重要作用，并且其主要受磷脂酶A2調(diào)節(jié)。最近研究發(fā)現(xiàn)RKIP也可以參與調(diào)節(jié)PKC對MAPK信號(hào)通路的作用，主要是因?yàn)镽KIP能抑制 MAPK的上游分子 Raf－1和MEK。把不可被PKC磷酸化的RKIP突變基因通過膜片鉗電極導(dǎo)入小鼠小腦切片的浦肯野細(xì)胞中，LTD被阻斷，野生型的RKIP則對LTD沒有影響。同時(shí)生化分析發(fā)現(xiàn)，在PKC依賴途徑誘導(dǎo)LTD時(shí)，內(nèi)源性的RKIP會(huì)與Raf－1和MEK分離。從中可以得出，RKIP抑制誘導(dǎo)小腦LTD的PKC依賴途徑［46］。

4.RKIP在腫瘤中的作用

4.1 RKIP在腫瘤轉(zhuǎn)移中的作用

腫瘤轉(zhuǎn)移指腫瘤細(xì)胞從原發(fā)部位經(jīng)淋巴道、血管或體腔等途徑到達(dá)其他部位繼續(xù)生長，是一個(gè)復(fù)雜的過程，需要癌細(xì)胞和宿主共同作用。能抑制轉(zhuǎn)移過程的基因被稱為轉(zhuǎn)移抑制基因（Metastasis suppressor gene，MSG），但它并不抑制原發(fā)腫瘤的發(fā)生。為了篩查出MSG，有人用mRNA基因芯片檢測了兩種前列腺癌細(xì)胞系LNCaP和C4－2B。結(jié)果發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移性的C4－2B前列腺癌細(xì)胞中的RKIP表達(dá)水平與低轉(zhuǎn)移性的LNCaP前列腺癌細(xì)胞相比低很多［18］。對小樣本量的前列腺癌轉(zhuǎn)移患者進(jìn)行統(tǒng)計(jì)也發(fā)現(xiàn)RKIP在轉(zhuǎn)移的前列腺癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)。這些都提示了RKIP在腫瘤轉(zhuǎn)移中的重要作用。

體外實(shí)驗(yàn)顯示，RKIP基因敲除的LNCaP細(xì)胞其侵襲能力增強(qiáng)。相對應(yīng)的，RKIP表達(dá)恢復(fù)的C4－2B細(xì)胞其侵襲能力下降。進(jìn)一步的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，將RKIP表達(dá)恢復(fù)的C4－2B細(xì)胞原位注射到小鼠的前列腺后，前列腺癌肺轉(zhuǎn)移率下降，但是原發(fā)腫瘤的生長沒有受到抑制［18］。通過這個(gè)實(shí)驗(yàn)，我們認(rèn)為RKIP是一種轉(zhuǎn)移抑制基因。除了前列腺癌，RKIP還能抑制乳腺癌、黑色素瘤等其它腫瘤的轉(zhuǎn)移［47］。最近還發(fā)現(xiàn)RKIP表達(dá)下調(diào)能提高神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞存活率和侵襲力，但是不影響腫瘤細(xì)胞的增殖和血管生成［48］。

RKIP抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的具體機(jī)制還不清楚，可能是負(fù)向調(diào)節(jié)導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移的信號(hào)通路。這些腫瘤轉(zhuǎn)移信號(hào)通路可以被腫瘤轉(zhuǎn)移基因 MMP1、OPN和CXCR4等激活。轉(zhuǎn)錄因子c－myc能使LIN28表達(dá)增加，LIN28能結(jié)合let－7的前體物質(zhì)從而減少成熟小 RNA let－7生成。let－7通過減少轉(zhuǎn)錄因子BACH1的合成抑制腫瘤轉(zhuǎn)移基因MMP1、OPN和CXCR4轉(zhuǎn)錄［49，50］。我們知道 ERK 能激活下 游 分子c－myc，而 RKIP能抑制 Ras／Raf－1／MEK／ERK通路進(jìn)而抑制上述的腫瘤轉(zhuǎn)移基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)。最近又有研究表明，RKIP能夠通過抑制NF－κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路從而抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases，MMPs）的表達(dá)?；蚯贸齊KIP的腫瘤細(xì)胞MMPs尤其是MMP－1和MMP－2水平明顯升高，侵襲性增強(qiáng)。但同時(shí)敲除MMPs和RKIP后，腫瘤細(xì)胞的侵襲性回歸正常［51］。

4.2 RKIP在腫瘤中的非轉(zhuǎn)移作用

RKIP減少除了能增加腫瘤轉(zhuǎn)移，還能提高腫瘤細(xì)胞對放射線和化療藥的耐受性［52，53］。目前的研究發(fā)現(xiàn)，RKIP表達(dá)下調(diào)能激活抗氧化應(yīng)激轉(zhuǎn)錄因子 Nrf2，從而減少細(xì)胞凋亡［54］。正常情況下Nrf2的Neh2結(jié)構(gòu)域與Keap1的Kelch重復(fù)區(qū)相互作用，而Keap1與肌動(dòng)蛋白細(xì)絲結(jié)合，這就導(dǎo)致Nrf2被控制在胞質(zhì)中。氧化應(yīng)激使Keap1泛素化后，Keap1結(jié)構(gòu)改變，Nrf2與之解離。隨后Nrf2通過核孔進(jìn)入核內(nèi)，與抗氧化反應(yīng)元件（ARE）相互作用，誘導(dǎo)抗氧化蛋白和Ⅱ相解毒酶的基因表達(dá)，從而在細(xì)胞的防御保護(hù)中發(fā)揮重要作用。近年的研究發(fā)現(xiàn)，Nrf2對腫瘤細(xì)胞也有保護(hù)作用，Nrf2／Keap1／ARE信號(hào)通路的下游靶基因，多數(shù)已證實(shí)與腫瘤的耐藥機(jī)制相關(guān)［55］。RKIP減少會(huì)誘導(dǎo) HEK－293細(xì)胞產(chǎn)生強(qiáng)烈的氧化應(yīng)激反應(yīng)，而且RKIP能提高結(jié)腸直腸癌組織和HT29 CRC細(xì)胞系中Keap1的穩(wěn)定性。在用阿霉素治療的HT29細(xì)胞的過程中還發(fā)現(xiàn)了RKIP／Keap1結(jié)合物［54］。這都說明RKIP通過Nrf2／Keap1／ARE信號(hào)來誘導(dǎo)腫瘤耐藥性。

RKIP在良性前列腺組織中表達(dá)水平最高，然而隨著Gleason評(píng)分的增加，其在前列腺細(xì)胞中表達(dá)水平逐漸減低。有50%原發(fā)性前列腺癌的RKIP低表達(dá)，它的五年無瘤生存時(shí)間只有61%，低于RKIP高表達(dá)的88%［47］。雖然RKIP與宮頸癌的臨床分期和病理類型沒有關(guān)聯(lián)，但是影響宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移［56］。大量的研究數(shù)據(jù)都顯示RKIP與腫瘤的預(yù)后和復(fù)發(fā)相關(guān)，可以作為腫瘤的生物標(biāo)記用于臨床評(píng)估。

5.RKIP與精子發(fā)生

精子是一個(gè)高度分化的細(xì)胞，在生成過程需要進(jìn)行復(fù)雜的細(xì)胞重塑。精子發(fā)生主要在男性的附睪中，但最后要在女性的生殖道中獲能才具備生育能力。RKIP普遍存在于哺乳動(dòng)物的精子、睪丸和附睪［57］，并在大鼠的生精小管、睪丸間質(zhì)細(xì)胞和精子細(xì)胞中高表達(dá)［58］，最近發(fā)現(xiàn)其在小鼠的生精小管也高表達(dá)［3］。研究推測RKIP可能參與精子細(xì)胞膜的生物發(fā)生和精子的免疫屏障作用，但其在生殖系統(tǒng)中的具體作用機(jī)制目前還不清楚［59］。研究發(fā)現(xiàn)RKIP基因敲除的成年大鼠在精子發(fā)生上與野生型大鼠沒有什么區(qū)別［57］，說明RKIP在精子發(fā)生中不重要。RKIP基因敲除雄鼠與正常雌鼠的生育率下降了90%以上，RKIP基因敲除雄鼠與RKIP過表達(dá)雌鼠的生育率也是下降的，但是RKIP過表達(dá)雄鼠與RKIP基因敲除雌鼠的生育率沒什么影響［57］。這說明了RKIP主要影響雄性的生育能力。

Gibbons等［60］發(fā)現(xiàn)RKIP主要影響精子的獲能過程。精子只有在女性的生殖道中獲能了才具備生育能力，而這個(gè)過程涉及精子表面蛋白的丟失。獲能是一個(gè)可逆的過程，能使精子去獲能的物質(zhì)被稱為去獲能因子（Decapacitation factors，DFs）。DFs與精子膜表面的特異性受體結(jié)合后發(fā)揮去獲能作用。Gibbons證明RKIP是一種DFs受體，但也有研究說RKIP是DFs。用金霉素進(jìn)行獲能實(shí)驗(yàn)，檢測附睪尾端的精子獲能率，結(jié)果RKIP基因敲除老鼠的是90%已獲能，相對應(yīng)的野生型老鼠精子的獲能率只有50%［57］。這些都說明了RKIP在生育上的重要性。

6.展望

RKIP被發(fā)現(xiàn)已經(jīng)二十幾年了，人們對它的關(guān)注也越來越多。目前對RKIP的研究集中在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期調(diào)控和凋亡、腫瘤轉(zhuǎn)移以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病等方面。RKIP通過調(diào)控信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路廣泛參與各個(gè)系統(tǒng)的病理生理過程，說明了其在人體中的重要性。RKIP在AD、腫瘤和糖尿病等嚴(yán)重威脅人類的疾病中的具體作用還不清楚，但RKIP在某些細(xì)胞系中被證實(shí)具有抑制細(xì)胞生長和腫瘤轉(zhuǎn)移以及促進(jìn)凋亡等重要功能，且已經(jīng)被確定為前列腺癌的轉(zhuǎn)移抑制基因。有研究表明Raf抑制劑可以改善神經(jīng)退行性疾病。這都表明RKIP能為治療這些疾病提供新的思路和新的靶點(diǎn)，因此對其研究還是非常有必要的。

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