固相萃取-超高效液相色譜法測(cè)定菜籽油中的三種抗氧化劑

楊眉 宋明雄 業(yè)潤(rùn)澤

摘? 要：本文建立了固相萃取結(jié)合超高效液相色譜測(cè)定糧油中的三種抗氧化劑（BHT、BHA、TBHQ）的方法。樣品經(jīng)乙腈提取和C18固相萃取柱凈化，用全自動(dòng)平行濃縮儀蒸干，用乙腈定容，過(guò)濾后進(jìn)入高效液相色譜測(cè)定，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，三種抗氧化劑線性關(guān)系良好（R>0.999），加標(biāo)回收率為100.4%～100.8%，精密度RSD為1.53%～1.63%。本方法簡(jiǎn)便快捷，結(jié)果更加準(zhǔn)確，并成功應(yīng)用于實(shí)際糧油樣品中三種抗氧化劑的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：固相萃取-超高效液相色譜法;菜籽油;固相萃取;三種抗氧化劑

中圖分類號(hào)：TS227

作者簡(jiǎn)介：楊眉，女，碩士，研究方向?yàn)榧Z油監(jiān)測(cè)分析工作。

現(xiàn)如今加工業(yè)發(fā)展迅速，大部分食品及藥品中都含有人工合成抗氧化劑。其中，丁基羥基茴香醚（butylated hydroxyanisole，BHA）、二丁基羥基甲苯（butylated hydroxytoluene，BHT）和特丁基對(duì)苯二酚（tert-butyhydroquinone，TBHQ）是我國(guó)允許使用的三種食品中抗氧化劑?？寡趸瘎┳鳛槭称诽砑觿梢詭椭鷮?duì)抗食品變質(zhì)，防止油脂及制品、餅干、罐頭等含油脂食品的酸敗。經(jīng)調(diào)查和統(tǒng)計(jì)研究，發(fā)現(xiàn)食品中添加抗氧化劑會(huì)導(dǎo)致人體患上前列腺癌等一系列相關(guān)疾病，因此對(duì)這三種抗氧化劑的使用有著一定的限制。近年來(lái)，對(duì)食品中抗氧化劑的分析檢測(cè)有不少研究報(bào)道[1-5]，隨著現(xiàn)代分析檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，目前多為氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法和液相色譜-質(zhì)譜法等[6-8]。這些方法大多數(shù)涉及復(fù)雜的樣品前處理，操作比較復(fù)雜，耗費(fèi)試劑較多，處理過(guò)程容易造成待測(cè)成分損失而使測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生誤差，樣品量大時(shí)，耗費(fèi)時(shí)間較多，難以滿足日常工作需要，因此尋求一個(gè)簡(jiǎn)便而快速的測(cè)定這三種物質(zhì)的分析方法十分有必要。本文在總結(jié)國(guó)內(nèi)外各種分析方法的基礎(chǔ)上建立一種簡(jiǎn)單實(shí)用，能夠同時(shí)測(cè)定糧油中BHA、BHT和TBHQ的方法，該方法簡(jiǎn)便可靠，便于實(shí)驗(yàn)室日常操作。

1 材料與方法

1.1 儀器

Ultimate 3000高效液相色譜儀：配有紫外檢測(cè)器和變色龍工作站，賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司;C18色譜柱：250mm×4.6mm×5μm，美國(guó)安捷倫公司;Raykol Fotector Plus全自動(dòng)固相萃取儀、Raykol EVA-60全自動(dòng)氮吹平行濃縮儀：睿科集團(tuán)股份有限公司;離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4 000r/min，北京時(shí)代北利離心機(jī)有限公司;分析天平：感量0.1mg和0.01mg，梅特勒-托利多。

1.2 主要試劑和材料

1.2.1 試劑

乙腈（色譜純）、甲酸（色譜純）、甲醇色譜純）、正己烷（分析純）、無(wú)水硫酸鈉（分析純）、BHA、BHT、TBHQ標(biāo)準(zhǔn)品均購(gòu)于北京壇墨質(zhì)檢公司。

1.2.2 材料

固相萃取柱：C18柱，2 000mg/12mL。

2 試驗(yàn)部分

2.1 樣品前處理

提?。悍Q取1g新鮮滇雪菜籽油試樣（精確至0.01g）于50mL塑料離心管中，并添加5mL乙腈飽和正己烷溶液溶解樣品，振蕩10min后，靜置15min。再加入5mL正己烷飽和乙腈溶液渦旋提取6min，4 000r/min離心6min，樣品分層后，收集乙腈層于25mL試管中，再重復(fù)使用6mL正己烷飽和乙腈溶液提取2次，合并提取液，待凈化，同時(shí)做空白試驗(yàn)。凈化過(guò)程：在C18固相萃取柱中裝入2.5g無(wú)水硫酸鈉，用5mL甲醇活化，再以10mL乙腈平衡萃取柱，棄去流出液，將之前合并的提取液上柱，棄去流出液后，再以5mL乙腈和甲醇的混合溶液洗脫，收集所有洗脫液于試管中，50℃氮吹至干。加入2mL乙腈定容，用0.22μm有機(jī)相微孔濾膜過(guò)濾，用于測(cè)定。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

2.2.1混合標(biāo)準(zhǔn)中間液

取三種抗氧化劑的單標(biāo)，用乙腈稀釋。中間儲(chǔ)備液的濃度為1 000mg/L。中間儲(chǔ)備液在-20℃冰箱中冷凍保存。

2.2.2 工作標(biāo)準(zhǔn)溶液

取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，依次稀釋成濃度為2.0mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L、10.0mg/L的工作標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 儀器方法

2.3.1 液相色譜方法

色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑5μm;流動(dòng)性A：0.5%甲酸水溶液，流動(dòng)相B：甲醇;洗脫梯度：0～2min，流動(dòng)相A 45%，2～8min，流動(dòng)相A從45%降至5%，8～14min，流動(dòng)相A 5%，14～14.1min，流動(dòng)相A從5%增至45%;柱溫：35℃;進(jìn)樣量：50;檢測(cè)波長(zhǎng)：280nm。

3 試驗(yàn)結(jié)果和討論

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

以濃度為2.0mg/L、4.0mg/L、6.0mg/L、8.0mg/L、10.0mg/L混標(biāo)溶液，建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，以峰面積對(duì)應(yīng)各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量濃度，進(jìn)行線性回歸，試驗(yàn)結(jié)果呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，三種抗氧化劑的線性方程和色譜圖見表1和圖1～圖2。

3.2 方法精密度

配制濃度為8.0mg/L的三種抗氧化劑混合溶液，同條件下進(jìn)樣7次得出RSD在1.53%～1.63%，7次平行試驗(yàn)數(shù)據(jù)和色譜圖見表2和圖3。

3.3 樣品加標(biāo)回收率

選擇新鮮的滇雪菜籽油作為樣品，檢測(cè)其中含有的BHA、BHT、TBHQ，試驗(yàn)結(jié)果表明新鮮的滇雪菜籽油中未含有三種抗氧化劑。以此菜籽油為空白樣品基質(zhì)，進(jìn)行樣品加標(biāo)試驗(yàn)，測(cè)定回收率，平行測(cè)定4次，空白樣品加標(biāo)回收率在100.4%～100.8%，結(jié)果見表4，色譜圖見圖4～圖6。

4 結(jié)束語(yǔ)

本文建立了固相萃取-超高效液相色譜法測(cè)定糧油中BHA、BHT、TBHQ三種抗氧化劑的方法，該方法前處理操作簡(jiǎn)單方便，減少了有機(jī)溶劑的使用和接觸，回收率好（100.4%～100.8%），精密度高（1.53%～1.63%）、方便快捷，能滿足糧油樣品中三種抗氧化劑的檢測(cè)。

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