丹紅注射液對小鼠無氧運(yùn)動抗疲勞的實(shí)驗(yàn)研究*

侯志琨，東 淳

陜西中醫(yī)藥大學(xué)(咸陽 712046)

現(xiàn)代競技體育之所以吸引觀眾，是由于當(dāng)中有大量的短時(shí)快速激烈的對抗，而無氧運(yùn)動是運(yùn)動員對抗中短時(shí)間、高強(qiáng)度運(yùn)動主要能力的體現(xiàn)[1]。無氧運(yùn)動能力是指肌肉在無氧供能代謝狀態(tài)下的身體工作能力，通常以最大無氧代謝狀態(tài)下的身體工作能力表示。表示為人體肌肉的無氧代謝供能系統(tǒng)提供ATP的極限能力[2]。隨著競技體育強(qiáng)度的增加，運(yùn)動員的負(fù)荷也越來越重，再加上反興奮劑的力度越來越大[3]。如何科學(xué)合理的使用藥物既沒有違規(guī)又能增加運(yùn)動員無氧運(yùn)動能力，緩解其肌肉疲勞，使其更好地適應(yīng)各類比賽項(xiàng)目引起了我們的思考與探索[4]。中藥制劑以其提高機(jī)體運(yùn)動能力、降低運(yùn)動損害效果明顯，不良作用小，安全穩(wěn)定，近幾年在運(yùn)動員治療之中的得到了廣泛的運(yùn)用[5]。丹紅注射液具有活血化瘀、通脈舒絡(luò)功效，臨床常用于治療冠心病、心絞痛的治療[6]，近年來也用于內(nèi)分泌等病癥的治療，具有廣泛的藥理作用。丹紅注射液主要含有丹參酮、丹參酸、丹參酚酸及紅花黃色素、紅花酚苷和兒茶酚等化學(xué)成分[7]。近年來丹參、紅花的抗疲勞研究已被多方面報(bào)道[8]。在參考相關(guān)文獻(xiàn)和丹紅注射液應(yīng)用基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)以小鼠為對象，觀察對于糖酵解供能情況下訓(xùn)練小鼠所致疲勞、急性缺氧的改善情況并加以記錄，以此為丹紅注射液抗疲勞提供試驗(yàn)依據(jù)，并對運(yùn)動員訓(xùn)練比賽提供參考。

材料與方法

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品:丹紅注射液，由山東丹紅制藥有限公司提供；紅景天膠囊，由陜西嘉禾植物化工有限責(zé)任公司提供；生理鹽水。

1.2 動物:昆明種小鼠，體重18～20 g雄性，由中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。實(shí)驗(yàn)前適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。

1.3 器械與儀器:腹腔注射器、玻璃游泳缸、解剖剪、電子分析天平、酶標(biāo)儀，ELX808-IU酶聯(lián)免疫檢測儀、勻漿機(jī)、離心機(jī)、離心管、秒表等。

1.4 試劑:SOD試劑盒、MDA試劑盒、LD試劑盒、Hb 試劑盒、LDH 試劑盒、BUN 試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 分組與給藥:動物分籠飼養(yǎng)，自由飲食，自然光照，動物房室內(nèi)溫度(20±2)℃，相對濕度40%～60%?？瞻捉M、訓(xùn)練組、低劑量組、高劑量組、紅景天陽膠囊陽性對照組各15只?？瞻捉M腹腔注射等量蒸餾水，不運(yùn)動。訓(xùn)練組，腹腔注射等量蒸餾水，運(yùn)動。低劑量組，腹腔注射低劑量0.05 ml/kg丹紅注射液，運(yùn)動。高劑量組，腹腔注射高劑量0.1 ml/kg丹紅注射液，運(yùn)動。紅景天膠囊陽性對照組，灌胃給藥0.674 g/kg紅景天膠囊，運(yùn)動[9]。給藥30 d。

2.2 負(fù)荷游泳實(shí)驗(yàn)：于給藥20 d后，小鼠實(shí)驗(yàn)每日下水進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練3 d，每天3 min以適應(yīng)水刺激。3 d后開始為期6 d的游泳訓(xùn)練。在水深30 cm水溫25 ℃的游泳池中進(jìn)行無氧訓(xùn)練。第1天不負(fù)重，適應(yīng)性訓(xùn)練5 min。從第1天起，每天訓(xùn)練2 min×5次。間隔時(shí)間大于1 min。第1、2天負(fù)重13%體質(zhì)量的鉛絲，第3、4天負(fù)重15%體質(zhì)量的鉛絲，第5、6天負(fù)重18%體質(zhì)量的鉛絲，保證游泳范圍充足，避免碰撞。并對小鼠運(yùn)動能力進(jìn)行觀察。在完成6 d無氧游泳運(yùn)動后，第7天選擇空白組、訓(xùn)練組、低劑量組、高劑量組、紅景天陽膠囊陽性對照組小鼠，采取尾部負(fù)重10%體質(zhì)量的鉛絲進(jìn)行一次性力竭游泳運(yùn)動，并記錄小鼠沉到水下8 s不能返回水面的時(shí)間[10]。

2.3 體質(zhì)量測試：在小鼠灌胃飼養(yǎng)前和末次灌胃后，分別稱量各組小鼠的體質(zhì)量，然后計(jì)算灌胃前、后體質(zhì)量差值，考察丹紅注射液對小鼠體質(zhì)量的影響。

2.4 生化指標(biāo)檢測：采集血液，游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的小鼠立即處死，摘除眼球采集內(nèi)眥血，參照LD試劑盒說明書測定血乳酸含量和全血中血紅蛋白含量，其余血液在4 ℃，3000 r/min離心15 min，取血清作為測定樣品。稱取0.1 g小鼠肝臟組織，加0.9 ml生理鹽水，冰水浴條件下，使用玻璃勻漿器手動勻漿，4000 r/min離心15 min，取上清，制成10%肝臟組織勻漿液。分別參照SOD試劑盒、MDA試劑盒、LDH試劑盒、BUN試劑盒測定肝組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和血清中乳酸脫氫酶(LDH)、血尿素氮(BUN)的含量。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對所有數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和多重比較，試驗(yàn)各種數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和方差檢驗(yàn)判斷均數(shù)差異。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組小鼠體質(zhì)量變化 見表1。給藥前各組小鼠體質(zhì)量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，實(shí)驗(yàn)期間小鼠體重均自然增長。游泳訓(xùn)練結(jié)束后各組小鼠的體重均逐漸增長，但空白組小鼠體質(zhì)量增長幅度較給藥組緩慢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 各組小鼠游泳時(shí)間變化 見表1。給藥組小鼠在訓(xùn)練期間的游泳時(shí)長普遍高于對照組。 給藥組小鼠游泳時(shí)體力狀況較訓(xùn)練組好，能很好地完成每日規(guī)定的15次訓(xùn)練任務(wù)，低劑量、高劑量組和陽性組小鼠游泳時(shí)間明顯長于空白組與訓(xùn)練組小鼠。在完成6 d無氧游泳運(yùn)動后，第7天小鼠游泳力竭時(shí)間，低劑量組、高劑量組和陽性組力竭游泳時(shí)間較空白組顯著延長，較訓(xùn)練組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)。

表1 丹紅注射液對小鼠體質(zhì)量及游泳時(shí)間的影響

3 小鼠運(yùn)動后抗氧化指標(biāo)的變化 見表2。各給藥組的小鼠的抗氧化指標(biāo)普遍優(yōu)于空白組和訓(xùn)練組，SOD活性明顯高于空白組和訓(xùn)練組(P<0.05)，MDA含量明顯低于空白組和訓(xùn)練組(P<0.05)。

表2 丹紅注射液對小鼠運(yùn)動后抗氧化指標(biāo)的影響

4 小鼠運(yùn)動后抗疲勞指標(biāo)的變化 見表3。 各給藥組小鼠Hb含量和LDH活力高于空白組和訓(xùn)練組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；LD含量和BUN含量比空白組和訓(xùn)練組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 丹紅注射液對小鼠運(yùn)動后抗疲勞指標(biāo)的影響

討 論

本試驗(yàn)以雄性小鼠為實(shí)驗(yàn)對象，先進(jìn)行適應(yīng)性水刺激訓(xùn)練，確定用相當(dāng)于小鼠自身重量的負(fù)重來達(dá)到模擬無氧運(yùn)動的目的。通過大強(qiáng)度訓(xùn)練可使機(jī)體處于極度缺氧狀態(tài)，導(dǎo)致運(yùn)動耐力下降，而中醫(yī)認(rèn)為這種疲勞為氣耗血滯所致。丹紅注射液的主要成分為丹參、紅花。丹參味苦，微寒，具有活血祛瘀，通經(jīng)止痛，清心除煩，涼血消癰之功效；紅花辛，溫，活血通經(jīng)，散瘀止痛，兩者合一具有活血化瘀、通脈舒絡(luò)功效，故對無氧運(yùn)動引起的疲勞有一定作用。而現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為無氧運(yùn)動可引起體內(nèi)代謝物——乳酸大量堆積，這是因?yàn)闊o氧運(yùn)動期間動物主要以糖酵解方式供能[11]，乳酸是糖無氧氧化的產(chǎn)物。而以糖酵解為主的無氧訓(xùn)練所致的疲勞是因?yàn)槿樗岫逊e過多，阻礙肌糖原和葡萄糖的分解，影響ATP再合成的緣故，降低乳酸含量可以起到緩解疲勞的作用。生物機(jī)體還有抵抗自由基損傷的防御系統(tǒng)，有國外臨床研究發(fā)現(xiàn)，對成年男子進(jìn)行21周的耐力訓(xùn)練后，成年男子體內(nèi)SOD、過氧化氫酶(CAT)等抗氧化酶的活性增強(qiáng)[12]，提高體內(nèi)SOD、CAT等抗氧化酶的活性，進(jìn)而提高機(jī)體消除自由基能力，增強(qiáng)機(jī)體對運(yùn)動疲勞的耐受性。本實(shí)驗(yàn)通過對實(shí)驗(yàn)鼠肝勻漿SOD、MAD；血漿中LD、Hb以及血清中LDH、BUN的影響[13]來驗(yàn)證丹紅注射液對實(shí)驗(yàn)鼠無氧運(yùn)動具有抗疲勞作用。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，給藥小鼠LD和BUN濃度較對照組顯著降低、Hb含量有顯著升高，說丹紅注射液具有的活血養(yǎng)血補(bǔ)血和較強(qiáng)的耐缺氧功效，能穩(wěn)定紅細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，促進(jìn)Hb生成，有效改善機(jī)體缺氧狀況，提高小鼠無氧運(yùn)動能力。在實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)用藥組小鼠游泳時(shí)長普遍多于對照組，而在氣血指標(biāo)中也可看出LDH活性也高于對照組。所以可以證明丹紅注射液對于負(fù)荷的適應(yīng)性和抗疲勞有很大幫助。血清BUN為運(yùn)動時(shí)蛋白質(zhì)的代謝產(chǎn)物，是反映蛋白質(zhì)分解代謝的主要指標(biāo)[14]，機(jī)體血清BUN含量隨著運(yùn)動負(fù)荷的增加而增加，機(jī)體對負(fù)荷的適應(yīng)能力越差，血清BUN的增加就越明顯。而實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明丹紅注射液明顯降低血清中BUN的含量可以延緩疲勞的發(fā)生。我們還觀察到，用藥組小鼠在質(zhì)量的增加幅度上略高于對照組。理論上機(jī)體產(chǎn)生的自由基可以通過損害RNA來抑制蛋白質(zhì)合成來阻礙生長發(fā)育[15]。但SOD活性的升高，小鼠體重的增加也可以說明丹紅注射液對小鼠無氧運(yùn)動能力的保持具有一定作用。

綜上所述，丹紅注射液能顯著提高無氧運(yùn)動疲勞小鼠的耐力，明顯降低疲勞小鼠體內(nèi)血清尿素和血乳酸的含量，提高疲勞小鼠體內(nèi)SOD和MDA活性，抗疲勞作用顯著。丹紅注射液抗疲勞的作用和機(jī)制值得進(jìn)一步研究。