中藥糖腎方單體成分莫諾苷藥理作用的研究進展

高駿偉 許可 吳宸廣 王立范 李平

摘要?通過查閱近些年的國內(nèi)外文獻對中藥糖腎方單體成分莫諾苷的藥理作用及分子機制進行歸納、梳理、分析及總結(jié)。從分子機制角度闡述莫諾苷具有促進細胞生長、減輕炎性反應(yīng)、抑制細胞內(nèi)鈣超載、抑制氧化應(yīng)激、抗凋亡、抗凝等作用，以便為今后臨床及實驗研究提供更多科學(xué)依據(jù)。

關(guān)鍵詞?糖腎方;莫諾苷;環(huán)烯醚萜類成分;藥理作用;研究進展

Abstract?The pharmacological effects and molecular mechanisms of the monomer component of the traditional Chinese medicine Tangshen Formula were summarized， combed， analyzed and summarized by consulting domestic and foreign literature in recent years. From the perspective of molecular mechanism， it is expounded that morroniside has the effects of promoting cell growth， reducing inflammatory response， inhibiting intracellular calcium overload， inhibiting oxidative stress， anti-apoptosis， anticoagulation， etc.， so as to provide more scientific basis for future clinical and experimental research.

Keywords?Tangshen formula; Morroniside; Iridoid terpenoids; Pharmacological effect; Study progress

中圖分類號：R285.6;R256.5;R255.4文獻標識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.17.003

中藥糖腎方（Tangshen Formula，TSF）顆粒是李平教授團隊在傳承國內(nèi)名家的經(jīng)驗基礎(chǔ)上，結(jié)合多年自身臨床實踐和現(xiàn)代研究成果研創(chuàng)的中藥復(fù)方。該方由黃芪、生地黃、山茱萸、三七、鬼箭羽、熟大黃和枳殼七味藥組成。該方功效為益氣養(yǎng)陰，活血通絡(luò)，體現(xiàn)了“肝腎同治”的科學(xué)內(nèi)涵，在防治糖尿病腎病中發(fā)揮著多渠道、多通道、多靶點的獨特優(yōu)勢。以往的研究已證實，TSF可減少糖尿病腎臟疾?。―iabetic Kidney Disease，DKD）患者尿蛋白，改善腎小球濾過率[1]。在動物實驗中，TSF通過減輕炎性反應(yīng)，抗纖維化以及改善脂質(zhì)代謝紊亂來改善糖尿病所致的腎損傷[2-4]，以及通過誘導(dǎo)AMPK/SIRT1途徑介導(dǎo)的細胞自噬來改善肝臟脂肪變性[5]。然而，盡管中藥復(fù)方療效顯著，但因其成分復(fù)雜及作用機制不明確，難以被國際學(xué)術(shù)界認可，所以研究化學(xué)結(jié)構(gòu)明確的中藥單體越來越受到重視。在我們前期的研究中發(fā)現(xiàn)，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（LC-MS）已證實莫諾苷為TSF灌胃小鼠血清中的單體化合物[6]。其中莫諾苷（C17H26O11）作為糖腎方中的一種環(huán)烯醚萜類化合物，主要來源于中草藥山茱萸。見圖1。近些年，國內(nèi)外的研究表明莫諾苷具有減小大腦的梗死體積[7]，促進神經(jīng)細胞增殖和分化[8]，促進血管再生[9]，抑制血小板聚集[10]，降低血液黏度[11]，抗凝[12]，保護心肌細胞[13]，保護腎臟細胞[14]等作用。本文從分子機制角度就促進血管新生、促進細胞生長、減輕炎性反應(yīng)、抑制細胞內(nèi)鈣超載、抑制氧化應(yīng)激、抑制細胞凋亡、抗凝等方面作進一步系統(tǒng)總結(jié)，以期為莫諾苷的深入研究提供參考。

1?莫諾苷的藥理作用

1.1?促進血管新生?血管新生是指通過血管內(nèi)皮細胞的激活、增殖、遷移，在已有血管的基礎(chǔ)上血管分裂、分支形成的血管和血管網(wǎng)[15]。新生的血管是神經(jīng)祖細胞遷移至梗死周邊的依附支架，其有利于缺血后腦損傷的神經(jīng)功能恢復(fù)和組織的營養(yǎng)供應(yīng)[16]。研究表明，莫諾苷可通過激活ephrinB2/VEGFR2和VEGF/VEGFR2信號通路，提高促進血管新生因子的蛋白表達水平，如血管內(nèi)皮生長因子（Vascular Endothelial Growth Factor，VEGF）、血管生成素-1（Angiopoietin-1，Ang-1）、成纖維生長因子-2（Fibroblast Growth Factor-2，F(xiàn)GF-2），進而促進腦組織、心肌缺血損傷后血管內(nèi)皮細胞的分裂、增殖和遷移[7，9，13]。而且莫諾苷可明顯上調(diào)血管內(nèi)皮細胞特異性酪氨酸激酶受體-2（Endothelium-specific Receptor Tyrosine Kinase-2，Tie-2）的表達水平，對于缺血后受損區(qū)域周邊血管的新生和重塑發(fā)揮著重要的作用[17]。

此外，通過對大腦中動脈閉塞（MACO）大鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，莫諾苷可顯著提高CD34蛋白表達水平，促進腦組織、心肌缺血損傷后血管新生[18]。內(nèi)皮祖細胞（Endothelial Progenitor Cells，EPC）主要來源于骨髓單核細胞中的CD34+細胞，在外周血中含量非常少，但在組織缺血損傷后，EPC會從骨髓遷移至外周，歸巢于損傷區(qū)，最終分化為成熟的內(nèi)皮細胞，參與血管新生和修復(fù)[19]，故CD34+作為EPC的主要表面標志物，是血管新生的重要觀察指標。

1.2?促進細胞增殖和分化?Wnt信號通路是一條調(diào)控細胞的增殖、分化、凋亡和自我更新的信號通路，主要包括4條通路：β-連環(huán)蛋白（β-catenin）、T細胞因子/淋巴細胞-增強子-結(jié)合因子通路、細胞極性通路和Wnt-Ca2+通路。其中結(jié)腸腺瘤性息肉病基因（Adenomatous Polyposis Coli，APC）蛋白作為Wnt信號通路的負向調(diào)節(jié)因子，可促使β-catenin的降解，抑制Wnt通路的激活來達到調(diào)節(jié)細胞的增殖分化的作用。通過對大腦中動脈閉塞（MACO）大鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，莫諾苷可抑制APC蛋白的表達，促進Wnt信號通路上游的重要配體Wnt7a的表達、激活Wnt/β-catenin通路，促進神經(jīng)細胞的增殖和分化[8]。近期研究也表明，莫諾苷可激活多種Wnt信號通路下游分子，如β-catenin和淋巴增強因子1（Lymphoid Enhancer Factor 1，LEF1），誘導(dǎo)細胞因子TGF-β、IL-4分泌量增加，促進T細胞的活化和分化以及通過Wnt/β-catenin信號通路促進外根鞘細胞的增殖和遷移，調(diào)節(jié)毛囊的生長和發(fā)育[20-21]。

1.3?抑制血小板聚集?血小板聚集在血栓形成的過程中起著非常重要的作用。激活血小板聚集反應(yīng)的途徑非常復(fù)雜，目前至少有二磷酸腺苷（Adenosine Diphosphate，ADP）、血栓素A2（Thromboxane A2，TXA2）和血小板活化因子（Platelet Activation Factor，PAF）等3種途徑。而細胞內(nèi)游離的Ca2+為血小板的聚集和釋放提供必要的物質(zhì)基礎(chǔ)，可通過多種途徑來激活血小板，比如其活化磷脂酶A2作用于磷脂，從而產(chǎn)生活化血小板的主要遞質(zhì)血栓素（Thromboxane，TX）。而TXA2半衰期短，難以檢測，TXB2作為TXA2的穩(wěn)定代謝產(chǎn)物，常用作判斷其濃度的指標。通過對ADP誘導(dǎo)的兔血小板聚集模型研究發(fā)現(xiàn)，莫諾苷能顯著地減少TXB2的含量，從而抑制血小板的聚集，表明其有顯著抗血栓的作用[10]。此外，環(huán)氧酶（Cyclooxygenase，COX）作為阿司匹林抗血小板聚集的作用靶點，莫諾苷能減少COX的含量從而抑制血小板的聚集[22]。

1.4?降低血液黏度?血液黏度是反映血液流動性質(zhì)的重要指標，其升高會使血流速度下降，導(dǎo)致血液中凝血因子以及各種血細胞沉積在血管內(nèi)，是血栓性疾病的重要原因之一。艾厚喜等[11]研究發(fā)現(xiàn)莫諾苷能有效地降低局灶性腦缺血損傷大鼠的紅細胞比容（Hema-tocrit Percentage，Hct），降低血液黏度，其效果與阿司匹林類似。Hct是紅細胞占全血容積的比值，它作為影響血黏度的重要因素，與血栓性疾病的發(fā)生密切相關(guān)，血液黏度會隨著Hct的增加而升高。

1.5?抗凝?袁廷偉等[12]研究發(fā)現(xiàn)莫諾苷能有效地降低纖維蛋白原（Fibrinogen，F(xiàn)ib）含量，延長凝血酶原時間（Prothrombin Time，PT）、活化部分凝血活酶時間（Activated Partial Thromboplastintime，APTT）和凝血酶時間（Thrombin Time，TT），從而達到抗凝血的作用。以上4項是評判凝血功能以及指導(dǎo)臨床用藥的重要指標，其中APTT和PT主要反映內(nèi)源性和外源性凝血系統(tǒng)狀況;而TT主要反映Fib轉(zhuǎn)為纖維蛋白的時間。當(dāng)血小板被激活，血漿Fib的連接形成了血小板聚集體，最終形成血栓。

1.6?調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝?固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（Sterol Regulatory Element Binding Proteins，SREBPs）是調(diào)控脂肪酸合成、膽固醇合成的重要轉(zhuǎn)錄因子。在糖尿病患者中，高血糖可上調(diào)SREBP-1和SREBP-2的表達，導(dǎo)致腎臟中脂肪酸和膽固醇的合成增加。Park等[23]研究表明莫諾苷可通過下調(diào)db/db小鼠腎臟中SREBP-1和SREBP-2的表達來降低三酰甘油和膽固醇的含量，從而改善腎臟異常的脂質(zhì)代謝。

1.7?其他?胰高血糖素樣肽-1（Glucagon-like Peptide-1，GLP-1）受體是一種B類G蛋白偶聯(lián)受體，主要分布于人類的胰島、肺、心血管系統(tǒng)和中樞神經(jīng)系統(tǒng)等組織中，脊髓中的GLP-1受體為控制慢性疼痛的潛在靶點，其特異性表達于脊髓背角的小膠質(zhì)細胞，而且GLP-1受體激動劑可誘導(dǎo)小膠質(zhì)細胞釋放β-內(nèi)啡肽以減輕神經(jīng)性疼痛[24]。有研究表明，莫諾苷是GLP-1受體的鄰位激動劑，在神經(jīng)病理性疼痛模型中通過激活脊髓GLP-1受體產(chǎn)生抗超敏反應(yīng)，達到止痛的作用[25]。

蛋白磷酸酶2A（Protein Phosphatase 2A，PP2A）是腦內(nèi)主要的蛋白磷酸酶，在多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮重要作用，包括細胞周期調(diào)控、細胞生長發(fā)育、細胞骨架動力學(xué)和細胞運動。有研究表明，莫諾苷能有效地提高PP2A活性，減弱Tau（Tubulin Associated Unit）蛋白的過度磷酸化，從而改善岡田酸誘導(dǎo)的神經(jīng)細胞損傷[26]。具體而言，PP2A可介導(dǎo)Tau蛋白的去磷酸化，當(dāng)PP2A活性降低時，Tau蛋白被過度磷酸化，導(dǎo)致微管的解體，神經(jīng)細胞結(jié)構(gòu)和功能的損害[27]。過度磷酸化的Tau蛋白在大腦中的積累是阿爾茨海默?。ˋlzheimer Disease，AD）的重要標志，而莫諾苷能抑制Tau蛋白的過度磷酸化，所以該項研究為莫諾苷作為AD的潛在治療方案提供了參考。

2?莫諾苷可能的分子作用機制

2.1?減輕炎性反應(yīng)?炎性反應(yīng)是指具有血管系統(tǒng)的機體組織當(dāng)受到損傷因素刺激時所產(chǎn)生的以防御反應(yīng)為主的基本病理過程。莫諾苷可能通過以下途徑來減輕炎性反應(yīng)：1）在腦缺血再灌注損傷后，莫諾苷可通過提高金屬蛋白酶組織抑制因子1（Tissue Inhibitor of Metalloproteinases 1，TIMP1）的表達，抑制基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix Metalloproteinases，MMPs）中MMP-2和MMP-9表達來達到保護及修復(fù)腦組織的作用[28-29]。具體而言，腦卒中后缺血區(qū)域的血氧供應(yīng)不足，導(dǎo)致炎性反應(yīng)、自由基增加，再灌注后血腦屏障通透性增加，大量神經(jīng)細胞、膠質(zhì)細胞死亡，微血管受損，最后導(dǎo)致缺血部位的組織壞死。MMPs是一類促進細胞外基質(zhì)降解的蛋白酶，其中，MMP-2和MMP-9是MMPs家族中的重要成員，在生理及病理條件下，MMP-2和MMP-9被過度激活，加重炎性反應(yīng)，促進血腦屏障基底膜的降解，引起血腦屏障的通透性增加，造成腦組織損傷[30]。TIMP通過與MMPs的結(jié)合來抑制MMPs的活性，從而阻止血腦屏障的破壞[31]。2）急性心肌梗死后炎性細胞因子IL-6、IL-1β和TNF-α水平會明顯升高，且與病情的嚴重程度呈正相關(guān)，通過對結(jié)扎冠狀動脈誘導(dǎo)的急性心肌梗死大鼠模型研究表明，莫諾苷能有效地抑制急性心肌梗死后IL-6、IL-1β和TNF-α的表達，從而發(fā)揮了減輕炎性反應(yīng)、保護心肌細胞的作用[32]。3）核因子κB（Nuclear Factor Kappa B，NF-κB）是由Rel蛋白家族成員RelA（p65）、RelB、c-Rel、NF-κB1（p50）與NF-κB2（p52）組成的二聚體，它是一種能將信息從胞質(zhì)傳至胞核的重要轉(zhuǎn)錄因子，參與調(diào)控機體免疫、炎性反應(yīng)及細胞凋亡等相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄。腦出血后NF-κB被激活，并誘導(dǎo)產(chǎn)生炎性反應(yīng)因子如IL-1、TNF-α，最終導(dǎo)致腦組織損傷的加重[33]。袁志俊等[34]研究發(fā)現(xiàn)莫諾苷可通過促進小泛素相關(guān)修飾蛋白（Small Ubiquitin-related Modifier，SUMO）2/3競爭性結(jié)合NF-κB的抑制蛋白α（the Alpha Inhibitor of NF-κB，IκB-α）以抑制IκB-α的降解和NF-κB的激活，下調(diào)炎性反應(yīng)因子IL-1和TNF-α的表達，從而明顯減輕腦出血后血腫周圍的炎性反應(yīng)以及改善神經(jīng)功能。此外，活化的IκB激酶（Inhibitor of Nuclear Factor Kappa B Kinase，IKK）能將IκB-α磷酸化并使其降解，從而激活NF-κB并啟動炎性因子的轉(zhuǎn)錄，引發(fā)炎性反應(yīng)。通過對MNNG聯(lián)合不規(guī)律飲食誘導(dǎo)的慢性萎縮性胃炎大鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，莫諾苷可抑制p65和p-IKKα/β的表達水平，顯著上調(diào)IκB-α的表達水平，從而達到減輕炎性反應(yīng)的作用[35]。近期研究表明莫諾苷可通過阻斷STAT3/NF-κB通路，抑制炎性細胞因子的分泌，進而減輕結(jié)腸炎的炎性反應(yīng)[36]。

2.2?抑制細胞內(nèi)鈣超載?線粒體作為鈣庫在生理狀態(tài)下緩沖細胞內(nèi)鈣離子的水平，而維持細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)對于機體組織正常的生理功能發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。王文等[37]研究證實莫諾苷可明顯抑制H2O2引發(fā)的Ca2+內(nèi)流，改善SH-SY5Y神經(jīng)細胞形態(tài)和功能，推斷莫諾苷可能直接作用于Ca2+通道，或者阻斷與Ca2+通道的信號傳導(dǎo)來發(fā)揮作用。在腦缺血時，神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細胞的去極化抑制谷氨酸的重攝取，導(dǎo)致細胞外谷氨酸的蓄積，引發(fā)天冬氨酸受體過度興奮，并介導(dǎo)其偶聯(lián)的Ca2+通道開放以致Ca2+大量內(nèi)流，而Ca2+濃度的異常增高引起線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開放，致使Na+、Cl-和水進入細胞，造成細胞的腫脹和ATP能量合成的終止，最終導(dǎo)致神經(jīng)細胞的凋亡以及微血管、血腦屏障的破壞[37-38]。

2.3?抑制氧化應(yīng)激?氧化應(yīng)激是指機體受到有害刺激時體內(nèi)活性氧、活性氮等高活性分子的產(chǎn)生過多，導(dǎo)致氧化程度超出細胞對氧化物清除的能力，氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失去平衡，引起組織的損傷。莫諾苷可能通過以下4個方面來抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)，實現(xiàn)對組織損傷的保護作用：1）研究表明莫諾苷通過抑制活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）和丙二醛（Malondialdehyde，MDA）的產(chǎn)生，同時抑制促凋亡基因Bax和刺激抗凋亡基因Bcl-2的表達，從而保護細胞免受氧化損傷[39-40]。ROS是一類含氧活性分子的總稱，包括超氧陰離子自由基、過氧化氫、單線態(tài)氧、羥自由基、脂過氧化自由基等，其對于細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)以及維持細胞穩(wěn)定發(fā)揮著非常重要的作用。在腦缺血時，磷脂酶A2被激活水解膜磷脂并釋放游離脂肪酸，而線粒體內(nèi)分泌型磷脂酶A2還破壞了線粒體呼吸鏈，使ROS生成增加，進而產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化物，并降解為有活性的醛類產(chǎn)物如MDA，其可間接反映組織中氧自由基的水平及細胞損傷的程度。2）研究表明莫諾苷通過抑制db/db小鼠肝臟中細胞色素C（Cytochrome C，CytC）的蛋白表達來改善氧化應(yīng)激誘導(dǎo)的線粒體功能障礙，發(fā)揮其保護肝臟的作用[41]。在某些外界因素刺激下產(chǎn)生大量自由基，并激活線粒體膜通透性孔道開放，使大量CytC釋放到胞質(zhì)中，從而激活如Caspase-3等細胞凋亡相關(guān)酶[42]。3）通過對缺氧缺血性腦損傷大鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，莫諾苷能顯著上調(diào)心肌組織中Nrf2通路相關(guān)蛋白表達如血紅素氧合酶-1（Heme Oxygenase-1，HO-1）和醌氧化還原酶1（NADPH Quinone Oxidoreductase-1，NQO1），提高谷胱甘肽（Glutathione，GSH）和超氧化物歧化酶（Superoxidase Dismutase，SOD）活性，減輕氧化應(yīng)激的損傷，從而發(fā)揮抗氧化的作用[43]。細胞內(nèi)的抗氧化系統(tǒng)主要包括：以SOD為代表的抗氧化酶系統(tǒng)和以GSH為代表的非酶抗氧化系統(tǒng)，兩者共同發(fā)揮清除氧自由基的作用。Keap1/Nrf2/ARE信號通路是體內(nèi)最重要的內(nèi)源性抗氧化應(yīng)激信號通路[44]。其中核因子E2相關(guān)因子2（Nuclear Factor Erythroid-2-related Factor 2，Nrf2）是細胞氧化應(yīng)激反應(yīng)中的關(guān)鍵因子，在正常狀態(tài)下Nrf2與抑制因子Keapl結(jié)合存在于胞質(zhì)內(nèi)，當(dāng)機體受到刺激時，Keapl的構(gòu)象發(fā)生變化，釋放并激活Nrf2信號通路，上調(diào)細胞保護因子HO-1、NQO1、GSH和SOD。4）通過對糖基化終末產(chǎn)物（Advanced Glycosylation end Products，AGEs）誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細胞損傷模型研究發(fā)現(xiàn)，莫諾苷可通過AGEs-RAGE信號通路，抑制RAGE、p38MAPK和NF-κB蛋白的表達，從而減輕氧化應(yīng)激的損傷，以達到對糖尿病腎損傷的保護作用[14]。在糖尿病腎病發(fā)展過程中，長期高血糖可促使體內(nèi)還原糖與蛋白質(zhì)發(fā)生非酶糖基化反應(yīng)，從而形成AGEs。AGEs會與腎臟細胞表面受體RAGE結(jié)合，引起ROS生成增加，產(chǎn)生氧自由基，從而使膜蛋白功能受損、細胞鈣離子內(nèi)流，致使胞內(nèi)鈣離子濃度增高，最后誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)，損傷細胞的功能和結(jié)構(gòu)。前期研究發(fā)現(xiàn)，在糖尿病或終末期腎衰竭患者中，AGEs大多沉積在腎臟血管、組織結(jié)構(gòu)中，如內(nèi)皮細胞、系膜細胞、足細胞以及腎小管上皮細胞，并且AGEs通過氧化應(yīng)激反應(yīng)和多種細胞因子的過量產(chǎn)生等機制參與糖尿病腎病的進展[45]。

2.4?抑制細胞凋亡?細胞凋亡是指細胞在生長發(fā)育過程中受到某些因素的刺激，由細胞內(nèi)基因及其產(chǎn)物所調(diào)控的細胞自主有序的死亡。而細胞凋亡過度是組織缺血再灌注損傷的主要原因[46]，所以抑制細胞凋亡對于損傷的器官組織的功能恢復(fù)具有十分重要的意義。

莫諾苷可能會通過以下途徑來抑制細胞凋亡：1）研究顯示莫諾苷能使腦組織、胃組織、心肌細胞的抗凋亡基因Bcl-2表達增高和促凋亡基因Bax表達降低，Bcl-2/Bax比率提高，抑制組織中caspase-3的活化，表現(xiàn)出明顯的抗凋亡能力[29，35，47-48]。Bcl-2家族成員包含抗凋亡成員如Bcl-2和促凋亡成員如Bax，兩者與細胞凋亡關(guān)系密切。在腦缺血早期階段，自由基的損傷和反復(fù)細胞膜的去極化所致的能量耗竭，導(dǎo)致級聯(lián)式“瀑布反應(yīng)”，引發(fā)血腦屏障破壞及神經(jīng)細胞的凋亡。半胱氨酸蛋白酶家族（Caspase）與細胞凋亡機制有著密切的聯(lián)系，而Caspase-3作為Caspase級聯(lián)反應(yīng)下游最重要的凋亡執(zhí)行蛋白酶[49]，在正常情況下一般是以酶原形式存在，只有在受到缺血、鈣超載等因素的刺激后才會形成活化的Caspase-3。活化的Caspase-3會引起細胞皺縮、DNA裂解、染色質(zhì)濃縮和凋亡小體形成等細胞形態(tài)的變化，故其可以反映組織細胞損傷的程度。2）楊炳友等[50]研究發(fā)現(xiàn)莫諾苷可通過抑制有絲分裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated Protein Kinase，MAPK）通路和NF-κB通路，抑制c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal Kinase，JNK）蛋白磷酸化以致凋亡分子Caspase-3和Caspase-9表達下調(diào)，抑制細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（Extracellular Signal-regulated Kinase，ERK）和p38蛋白磷酸化以致炎性因子IL-6、IL-Iβ顯著減少，進而抑制TNF-α誘導(dǎo)的成骨細胞凋亡。MAPK信號通路是參與調(diào)控炎性反應(yīng)和細胞凋亡的分子通路，其主要包括JNK、ERK和p38蛋白通路，磷酸化的JNK蛋白進入細胞內(nèi)的線粒體從而啟動細胞凋亡分子，磷酸化的ERK和p38蛋白可介導(dǎo)多種炎性反應(yīng)因子的表達從而引起炎性反應(yīng)。3）Cheng等[51]研究發(fā)現(xiàn)莫諾苷能顯著提高軟骨細胞Ⅱ型膠原和蛋白聚糖表達水平，表明莫諾苷對基質(zhì)合成有促進作用，可以通過激活A(yù)KT/S6和ERK/p70S6K/S6通路來保護骨性關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）軟骨細胞免受凋亡和基質(zhì)耗竭的影響。蛋白激酶B（Protein Kinase B，AKT）以及ERK在關(guān)節(jié)軟骨細胞的代謝過程中起著重要作用，可以調(diào)節(jié)細胞增殖、細胞凋亡和血管生成等多種細胞過程[51-52]。4）通過對MCAO再灌注大鼠模型研究發(fā)現(xiàn)，莫諾苷可抑制腦缺血所致的細胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和周期蛋白依賴性激酶6（Cyclin-dependent Kinase 6，CDK6）的過量表達，抑制神經(jīng)細胞進入異常細胞周期，從而發(fā)揮神經(jīng)保護的作用[53]。細胞周期相關(guān)蛋白的異常激活與神經(jīng)細胞的凋亡有著密切的聯(lián)系，是腦缺血后神經(jīng)細胞死亡的重要調(diào)控因素[53]。在正常細胞分裂時，細胞周期相關(guān)蛋白可促進細胞分裂增殖，但在病理因素刺激下，細胞周期相關(guān)蛋白被異常激活致使分化末期的細胞再次進入細胞周期，最后導(dǎo)致細胞死亡，在此過程中，參與細胞周期調(diào)控的蛋白有細胞周期蛋白、CDK和周期蛋白依賴性激酶抑制因子等。5）體外實驗表明莫諾苷可通過激活Cyclin D1/CDK/P21信號通路，降低Cyclin D1、Bcl-2和提高P21、Bax的表達，以促進人惡性黑色素瘤細胞的凋亡，進而起到抗腫瘤的作用[54]。細胞周期的異常會導(dǎo)致細胞無限增殖，它是腫瘤細胞的顯著特征之一，而細胞周期蛋白的異常表達會使腫瘤細胞具有侵襲、轉(zhuǎn)移、耐藥和抗凋亡的能力[55]。Cyclin D1是調(diào)節(jié)細胞周期G1/S期的主要周期蛋白[56]，P21作為CKI家族成員，其可抑制Cyclin D1的活性，阻止細胞增殖，對細胞生長起著負向調(diào)節(jié)作用。

2.5?調(diào)控細胞自噬?自噬是廣泛存在于真核細胞的自我保護機制，在接收到如氧化應(yīng)激、感染、饑餓等自噬信號之后，細胞通過膜包裹需降解的產(chǎn)物形成自噬體，并與溶酶體融合形成自噬溶酶體，降解所包裹的產(chǎn)物，進而促進細胞新陳代謝和細胞器更新。而自噬在軟骨細胞增殖分化過程中發(fā)揮著積極的作用。研究表明，莫諾苷可能通過PI3K/AKT/mTOR信號途徑抑制人OA軟骨細胞的自噬活性，進而起到對軟骨細胞的保護作用，為治療膝骨性關(guān)節(jié)炎提供了線索[57]。

3?結(jié)語

近期眾多研究表明通過對莫諾苷藥理作用及分子機制的研究，發(fā)現(xiàn)莫諾苷具有促進血管新生、促進細胞生長、減輕炎性反應(yīng)、抑制細胞內(nèi)鈣超載、抑制氧化應(yīng)激、抗凋亡、抗凝等作用。見表1。從傳統(tǒng)中醫(yī)藥角度剖析，山茱萸作為莫諾苷主要的來源之一，性酸、澀，微溫，入肝、腎經(jīng)，功效為補益肝腎，收斂固脫，主治頭暈?zāi)垦＃Q，腰膝酸痛，遺精遺尿，崩漏帶下，虛汗不止。結(jié)合前期研究成果，我們推斷莫諾苷適合作為保護神經(jīng)、心肌、腎臟及軟骨等細胞的藥物，因此，進一步深入探索莫諾苷的分子作用機制及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，可為臨床治療及實驗研究提供參考。

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（2020-08-01收稿?責(zé)任編輯：王明）