曹艷紅, 楊 帆, 陳少梅, 宣澤義, 吳柱月, 王 超, 林 波*, 楊膺白*
(1.廣西壯族自治區(qū)畜牧研究所,廣西南寧 530022;2.廣西大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,廣西南寧 530005)
如果中國(guó)畜禽全部用商業(yè)飼料飼喂,推測(cè)出我國(guó)現(xiàn)有階段的飼料產(chǎn)量總體上僅滿(mǎn)足30%的需求量,其中反芻動(dòng)物的供給量不足20%。因此,玉米、豆粕等糧型飼料已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿(mǎn)足畜禽需要量,合理的開(kāi)發(fā)與利用非糧型飼料資源迫在眉睫(武婷婷等,2018)。任豆葉、木豆、桂牧一號(hào)、菊苣、高羊茅、桑樹(shù)葉、葛藤是南方常見(jiàn)的新型飼料,廣西畜牧研究所經(jīng)過(guò)多年培育出桂牧一號(hào)象草,其產(chǎn)量、質(zhì)量均高于親本的象草新品種,粗纖維和能量水平也優(yōu)于同類(lèi)牧草。桑樹(shù)葉粗蛋白質(zhì)含量高,葉中蛋氨酸、亮氨酸、甘氨酸、蘇氨酸含量豐富,且含有大量維生素和微量元素,能夠優(yōu)化畜禽飼料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)桑樹(shù)葉在氨化稻草飼料中可完全替代菜籽粕補(bǔ)充反芻動(dòng)物生長(zhǎng)所需要的蛋白質(zhì)(陸晶山等,2018)。菊苣品質(zhì)優(yōu)良、抗病較廣,是近些年具有發(fā)展前途的飼料和經(jīng)濟(jì)作物新品種。葛藤是反芻動(dòng)物的潛在蛋白質(zhì)飼料,其化學(xué)成分和消化特性與其他常見(jiàn)飼料相比具有一定價(jià)值優(yōu)勢(shì),且能充分被反芻動(dòng)物瘤胃吸收。木豆是一種富含蛋白質(zhì)且粗纖維較低的作物。研究發(fā)現(xiàn)在蛋雞日糧中添加20%~30%木豆,其產(chǎn)蛋量保持高水平且不影響營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)(王中身等,2013)。關(guān)于高羊茅的遺傳育種以及抗逆性國(guó)內(nèi)外都做了很多研究,但作為反芻動(dòng)物體外發(fā)酵試驗(yàn)的并沒(méi)有詳細(xì)說(shuō)明。本文將對(duì)桑樹(shù)葉、木豆、桂牧一號(hào)、菊苣、任豆葉、高羊茅、葛藤7種植物進(jìn)行常規(guī)養(yǎng)分分析、體外產(chǎn)氣分析、干物質(zhì)消失率測(cè)定和有機(jī)酸測(cè)定等,綜合闡述這7種植物作為反芻動(dòng)物飼料的營(yíng)養(yǎng)特性、價(jià)值優(yōu)勢(shì)和消化特性,為解決我國(guó)南方反芻動(dòng)物飼料短缺的現(xiàn)狀提供啟發(fā)。
1.1 飼料樣品 本試驗(yàn)選用7種南方常見(jiàn)的粗飼料,分別為桑樹(shù)葉、任豆葉、木豆、桂牧一號(hào)、菊苣、高羊茅和葛藤。7種粗飼料樣品采用齊地面刈割法分別取500 g帶回實(shí)驗(yàn)室,切碎后再置于鼓風(fēng)干燥烘箱內(nèi)95℃殺青0.5 h,然后65℃烘干48 h,最后用微型植物粉碎機(jī)粉碎后過(guò)1 mm篩,備用。
1.2 人工瘤胃培養(yǎng)液的制備 人工瘤胃培養(yǎng)液的配制參照Menke等(1979)的方法。本研究采用的全自動(dòng)體外瘤胃發(fā)酵設(shè)備,包括厭氧瓶、三通電磁閥、培養(yǎng)箱、壓力傳感器、計(jì)算機(jī)和氣相色譜儀(Wang等,2013)。培養(yǎng)箱設(shè)定:振蕩頻率 50 r/min和培養(yǎng)溫度39.5℃,通過(guò)導(dǎo)管進(jìn)入氣相色譜儀(安捷倫7890A,美國(guó)安捷倫公司)測(cè)定甲烷含量。甲烷產(chǎn)量根據(jù)厭氧瓶、壓力與氣體體積的轉(zhuǎn)化系數(shù)和甲烷含量進(jìn)行計(jì)算(Wang等2011)。
瘤胃液取自裝有永久性瘤胃瘺管的成年瀏陽(yáng)黑山羊,試驗(yàn)動(dòng)物每天飼喂2次,飼喂時(shí)間為07:00和17:00,自由飲水。晨飼前1 h采集瘤胃瘺管中新鮮瘤胃液,迅速裝入保溫瓶帶回實(shí)驗(yàn)室。將采集的瘤胃液用6層脫脂紗布過(guò)濾,量取500 mL的瘤胃液迅速加入到準(zhǔn)備好的2000 mL人工瘤胃營(yíng)養(yǎng)液中 (瘤胃液與人工瘤胃營(yíng)養(yǎng)液體積比為1:4),制成混合人工瘤胃培養(yǎng)液。整個(gè)過(guò)程的溫度保持在39.5℃,通入純CO2以保持厭氧環(huán)境(以刃天青變成無(wú)色來(lái)判斷),用磁力攪拌器攪拌以保持瘤胃液與培養(yǎng)液混合均勻。
1.3 常規(guī)養(yǎng)分的測(cè)定 按照常規(guī)方法測(cè)定飼料樣品中的干物質(zhì)(DM)、粗蛋白質(zhì)(CP)、粗纖維(CF)、粗脂肪(EE)、無(wú)氮浸出物(NFE)、中性洗滌纖維(NDF)、能量(E)和粗灰分(Ash)的含量。
1.4 體外瘤胃發(fā)酵試驗(yàn)操作 稱(chēng)取0.5 g底物置入150 mL厭氧發(fā)酵瓶中,置于39.5℃的培養(yǎng)箱中預(yù)熱,然后向厭氧發(fā)酵瓶中通入CO2以保證發(fā)酵瓶中為厭氧環(huán)境,最后用分液器(Eppendorf)向每個(gè)發(fā)酵瓶中加入60 mL人工瘤胃培養(yǎng)液。
1.5 干物質(zhì)降解率和揮發(fā)性脂肪酸測(cè)定 將發(fā)酵內(nèi)容物用紗布抽干置于鋁盒中,放入105℃烘箱烘8 h后稱(chēng)重,用于測(cè)定干物質(zhì)降解率(DMD),DMD的計(jì)算參照 Zhang等(2019)的方法。
70 h體外發(fā)酵終止后,取2 mL發(fā)酵液,4℃、15000 r/min條件下離心10 min。取1.5 mL上清液于2 mL離心管中,加入0.15 mL 25%偏磷酸固定15 min,放置于-20℃保存。樣品在常溫條件下解凍,15000 r/min和4℃條件下再次離心10 min,取0.6 mL裝于測(cè)定瓶中,在氣相色譜儀測(cè)定發(fā)酵液樣品中揮發(fā)性脂肪酸各組分含量(Wang,2011)。
1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理 應(yīng)用非線(xiàn)性軟件(NLREG)程序,按照Wang(2011)模型對(duì)體外瘤胃發(fā)酵產(chǎn)氣
曲線(xiàn)進(jìn)行擬合,模型及相關(guān)參數(shù)的計(jì)算公式如下:
式中:GP為 t時(shí)刻的累積產(chǎn)氣量,mL/g;Vf為潛在最大產(chǎn)氣量,mL/g;k 為產(chǎn)氣速率,mL/h;b為形狀參數(shù)。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel初步記錄并做簡(jiǎn)單處理,然后采用SPSS(21.0)軟件中一般線(xiàn)性模型(GLM)程序?qū)?shù)據(jù)進(jìn)行方差(ANOVA)分析和Duncan’s多重比較。
2.1 7種植物的常規(guī)養(yǎng)分測(cè)定結(jié)果 由表1可知,不同植物的粗蛋白質(zhì)含量為任豆葉>桑樹(shù)葉>菊苣>葛藤>桂牧一號(hào)>高羊茅>木豆。其中木豆、桂牧一號(hào)、高羊茅粗蛋白質(zhì)明顯低于其他植物。粗纖維含量為木豆>桂牧一號(hào)>高羊茅>葛藤>菊苣>任豆葉>桑樹(shù)葉。其中木豆、桂牧一號(hào)、高羊茅、葛藤的粗纖維含量明顯高于菊苣、任豆葉、桑樹(shù)葉,以桑樹(shù)葉為最低。木豆、任豆葉和葛藤的總能值高于桑樹(shù)葉、菊苣等,以菊苣為最低。
表1 七種植物營(yíng)養(yǎng)成分含量
2.2 體外瘤胃發(fā)酵的產(chǎn)氣參數(shù) 由圖1和表2可知,最終累積總產(chǎn)氣量與所得參數(shù)的潛在最大產(chǎn)氣量(Vf)依次為高羊茅>桑樹(shù)葉>桂牧一號(hào)>菊苣>葛藤>任豆葉>木豆。形狀參數(shù)(b)由低到高依次為任豆葉<木豆<桑樹(shù)葉<高羊茅<葛藤<桂牧一號(hào)<菊苣。產(chǎn)氣速率為菊苣>木豆>桂牧一號(hào)>桑樹(shù)葉>葛藤>高羊茅>任豆葉。最終甲烷產(chǎn)量由高到低依次為高羊茅>桑樹(shù)葉>桂牧一號(hào)>木豆>葛藤>任豆葉>菊苣。
2.3 體外發(fā)酵干物質(zhì)消失率及發(fā)酵液中揮發(fā)性脂肪酸含量 由表3得知,發(fā)酵液中乙酸濃度為高羊茅>菊苣>桂牧一號(hào)>桑樹(shù)葉>任豆葉>葛藤>木豆。丁酸濃度為高羊茅>木豆>桑樹(shù)葉>任豆葉>葛藤>桂牧一號(hào)>菊苣;丙酸濃度依次為高羊茅>桂牧一號(hào)>任豆葉>桑樹(shù)葉>葛藤>菊苣>木豆;戊酸濃度依次為任豆葉>桑樹(shù)葉>桂牧一號(hào)>高羊茅>葛藤>木豆>菊苣。總揮發(fā)性脂肪酸濃度依次為高羊茅>菊苣>桂牧一號(hào)>桑樹(shù)葉>任豆葉>葛藤>木豆。干物質(zhì)消失率依次為桑樹(shù)葉>菊苣>高羊茅>任豆葉>桂牧一號(hào)>葛藤>木豆(39.11%),以桑樹(shù)葉最高,木豆最低,僅為桑樹(shù)葉的51.1%。
飼料化學(xué)分析的方法將養(yǎng)分劃分為水分、粗蛋白質(zhì)、粗纖維、粗脂肪、粗灰分和無(wú)氮浸出物6大營(yíng)養(yǎng)成分,然而不同植物品種所含養(yǎng)分存在明顯差異。本研究中七種飼料中木本科桑樹(shù)葉和任豆葉、菊科的菊苣、藤本科的葛藤粗蛋白質(zhì)含量均高于20%,其中任豆葉達(dá)31.2%,顯著高于其他禾本科植物,表明禾本科植物的蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值低于其他科的植物;七種植物中以禾本科的高羊茅和桂牧一號(hào)纖維含量較高,桑葉和任豆葉的纖維含量較低,可見(jiàn)木本科植物的葉子可能對(duì)動(dòng)物具有較好的消化特性,可作為動(dòng)物良好的粗飼料來(lái)源。然而飼料常規(guī)養(yǎng)分中能被動(dòng)物消化吸收的部分都是有營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的,禾本科植物雖然蛋白質(zhì)含量低、纖維含量高,但其長(zhǎng)纖維一方面可刺激反芻,另一方面在瘤胃內(nèi)緩慢降解后,仍然能為動(dòng)物提供養(yǎng)分(付霞杰等,2017)。因此,僅測(cè)定了飼料原料的化學(xué)養(yǎng)分,并不能代表其真正的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
表2 體外瘤胃發(fā)酵產(chǎn)氣公式與最大產(chǎn)氣量與甲烷產(chǎn)量比例參數(shù)
表3 發(fā)酵液中揮發(fā)性脂肪酸濃度和干物質(zhì)消失率
利用反芻動(dòng)物瘤胃體外產(chǎn)氣方法對(duì)飼料進(jìn)行體外發(fā)酵后,根據(jù)不同時(shí)間的累積產(chǎn)氣量可以反映飼料的降解程度,再結(jié)合原料化學(xué)成分的組成,其預(yù)測(cè)結(jié)果將更加準(zhǔn)確(Muetzel等,2011)。靳玲品(2013)研究發(fā)現(xiàn),粗飼料體外最大產(chǎn)氣量與 ADL呈顯著負(fù)相關(guān),與NDF和ADF的含量呈顯著正相關(guān)。從本試驗(yàn)各種飼料體外發(fā)酵產(chǎn)氣量動(dòng)態(tài)變化曲線(xiàn)來(lái)看,不同的飼料產(chǎn)氣量達(dá)到最高峰的時(shí)間不同,表明各飼料養(yǎng)分的快速降解部分含量不同。體外發(fā)酵產(chǎn)氣量是反映反芻動(dòng)物飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的一個(gè)很重要的指標(biāo),本研究結(jié)果表明,7種植物的總產(chǎn)氣量以高羊茅為最高,其次為桑樹(shù)葉,木豆最低,而禾本科的桂牧一號(hào)與菊苣和葛藤相似,表明在實(shí)際動(dòng)物瘤胃狀態(tài)下,如果瘤胃存留時(shí)間足夠長(zhǎng),高羊茅的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高,甚至高于桑葉等易消化飼料??梢?jiàn)反芻動(dòng)物除需要高蛋白的粗飼料外,長(zhǎng)纖維的禾本科飼料若能刺激反芻,提高粗飼料的瘤胃存留時(shí)間,將提高纖維飼料的利用效率(武婷婷等,2017)。產(chǎn)氣速率可反映飼料在瘤胃內(nèi)的存留時(shí)間,也可反映粗飼料快速降解部分的含量,本試驗(yàn)中產(chǎn)氣速率由高到低依次為菊苣、木豆、桂牧一號(hào)、桑樹(shù)葉、葛藤、高羊茅和任豆葉,表明菊苣最容易被降解,而高羊茅和任豆葉不容易被快速降解。瘤胃甲烷的產(chǎn)生會(huì)導(dǎo)致飼料能量的散失和溫室氣體的排放,本研究發(fā)現(xiàn)體外產(chǎn)氣量高的桑葉和高羊茅等植物甲烷產(chǎn)量也較高,與其他研究結(jié)果一致(付霞杰等,2017;林波等,2016)。 然而,菊苣作為一種產(chǎn)氣量高、易降解的飼料,其甲烷產(chǎn)量為七種飼料中最低,表現(xiàn)出與其他植物不同的趨勢(shì),表明菊苣可抑制瘤胃發(fā)酵過(guò)程中甲烷的產(chǎn)生,可能是一種抑制瘤胃甲烷的良好飼料來(lái)源。
反芻動(dòng)物瘤胃內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定是保證反芻動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)正常消化利用的前提,而內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定取決于揮發(fā)性脂肪酸的濃度。瘤胃VFA是反芻動(dòng)物主要的能量來(lái)源,因此VFA的產(chǎn)量及其比例可顯著影響反芻動(dòng)物生產(chǎn)能力(楊云燕等,2018)。本研究中,各植物發(fā)酵液中的總揮發(fā)性脂肪產(chǎn)量以高羊茅為最高,木豆為最低,與體外總產(chǎn)氣量一致,表明體外飼料的消化率與發(fā)酵液中VFA產(chǎn)量呈正相關(guān)關(guān)系,與其他研究結(jié)果一致。然而,真正反映體外飼料降解率的指標(biāo)為體外干物質(zhì)消失率,產(chǎn)氣量和總VFA產(chǎn)量受飼料中養(yǎng)分組成的影響較大,本研究中高蛋白飼料諸如桑葉和菊苣的產(chǎn)氣量不高,但72 h的體外干物質(zhì)消失率較高,其原因與粗蛋白質(zhì)在發(fā)酵液中的產(chǎn)氣量較低有關(guān)(李建國(guó)等,1998)。此外,本研究中高羊茅產(chǎn)氣量和體外干物質(zhì)消失率均為各飼料最高,顯著高于同為禾本科的桂牧一號(hào),可見(jiàn)雖然高羊茅養(yǎng)分中NDF含量較高,但其大部分均為瘤胃可降解NDF,因此高羊茅為一種較為優(yōu)質(zhì)的禾本科牧草。
本試驗(yàn)結(jié)果表明,木本科的桑葉和任豆葉、藤本科的葛藤和菊科的菊苣粗蛋白質(zhì)含量均在20%以上,且體外消化率均較高,菊苣還有抑制瘤胃甲烷產(chǎn)生的作用;豆科的木豆粗蛋白質(zhì)含量和體外消化率均較低,表明其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較低;禾本科的高羊茅產(chǎn)氣量和體外消化率為7種飼料中最高,并且可消化NDF含量高,是一種優(yōu)質(zhì)的牧草。