飼喂中草藥飼料添加劑對(duì)肉兔生產(chǎn)性能、血清生化指標(biāo)及免疫功能的影響

邱時(shí)秀， 陳亞迎， 李 娟， 劉瀚揚(yáng)， 徐麒麟， 吳永勝， 許禎瑩， 朱佳文， 雷春龍， 齊桂蘭

（成都市農(nóng)林科學(xué)院畜牧研究所，四川成都 611130）

中草藥飼料添加劑，是以中草藥為原料制成的飼料添加劑。中草藥源于自然，且有效成分組合天然合理，是用來(lái)替代化學(xué)類(lèi)飼料添加劑的最佳天然藥物。動(dòng)物源性食品安全是目前最受關(guān)注的問(wèn)題，對(duì)動(dòng)物源性食品安全威脅最大的是化學(xué)合成類(lèi)飼料添加劑和飼用抗生素的普遍使用，其常導(dǎo)致這類(lèi)物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)殘留超標(biāo)，引起病原微生物和寄生蟲(chóng)等病原體產(chǎn)生抗藥性，嚴(yán)重的還可引起“致癌、致畸形和致突變”等后果。近幾年來(lái)，歐美等一些經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國(guó)家開(kāi)始禁止在飼料中添加化學(xué)合成類(lèi)飼料添加劑。歐盟從2006年開(kāi)始全面禁用飼用飼料添加劑，澳大利亞等國(guó)家也開(kāi)始限制飼用抗生素和治療用抗生素的使用。中草藥添加劑保持了其自然結(jié)構(gòu)和生物活性，并且其來(lái)源豐富、成本低廉、作用廣泛，既含有營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，又具有驅(qū)蟲(chóng)保健和防病治病作用，各國(guó)開(kāi)始對(duì)天然藥物飼料添加劑和天然藥物的抗病原性、抗微生物功效進(jìn)行深入研究。因此，飼料工業(yè)中開(kāi)發(fā)應(yīng)用中草藥添加劑具有極其重要的意義。

本試驗(yàn)以中獸醫(yī)基礎(chǔ)理論為依據(jù)，結(jié)合現(xiàn)代肉兔養(yǎng)殖生產(chǎn)情況，選用桑葉、菊花、黃柏、川芎、當(dāng)歸、金銀花等組成中草藥添加劑復(fù)方，經(jīng)加工制成不同的中草藥飼料添加劑添加于肉兔飼糧中，探討其對(duì)肉兔生產(chǎn)性能和免疫功能的影響，旨在揭示中草藥添加劑作用機(jī)理，為其應(yīng)用推廣提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 中草藥添加劑復(fù)方 選用桑葉、菊花、黃柏、川芎、當(dāng)歸、金銀花等多種中草藥原料，根據(jù)中草藥配伍原則，結(jié)合肉兔生理特點(diǎn)，按照不同配比形成4種中草藥添加劑復(fù)方，并且經(jīng)加工處理制成中草藥制劑。生產(chǎn)工藝流程：中草藥原料→除雜、干燥處理→粉碎機(jī)粉碎處理→按配方稱(chēng)重→混合均勻→加工處理→裝袋封口待用。復(fù)方1：桑葉、菊花、黃柏、川芎、當(dāng)歸、山楂、神曲；復(fù)方2：桑葉、黃柏、川芎、當(dāng)歸、金銀花、山楂、神曲；復(fù)方 3：桑葉、菊花、黃柏、川芎、當(dāng)歸、陳皮、青皮；復(fù)方 4：桑葉、黃柏、川芎、當(dāng)歸、金銀花、陳皮、青皮。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼糧 試驗(yàn)選取150只30日齡（斷奶）健康、體重相近的新西蘭公兔，按隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)分為5組，分別為對(duì)照組和I、II、III、IV組，試驗(yàn)每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只，對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧（原料組成及營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1），試驗(yàn)組分別在基礎(chǔ)日糧中添加4種中草藥制劑，按每2 kg添加100 g中草藥制劑，飼養(yǎng)試驗(yàn)為期40 d，其中試驗(yàn)預(yù)飼期為6 d，正式試驗(yàn)期為34 d。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

1.3 飼養(yǎng)管理 在成都市蒲江縣欣欣兔業(yè)新西蘭兔養(yǎng)殖場(chǎng)進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)肉兔采取半開(kāi)放式籠養(yǎng)，自由采食和飲水，光照采用自然光照時(shí)長(zhǎng)，地面光照強(qiáng)度為5 lx，按正常程序防疫和兔舍消毒。

1.4 樣品收集與處理

1.4.1 生產(chǎn)性能 試驗(yàn)期開(kāi)始后每日準(zhǔn)確測(cè)定采食量，試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)稱(chēng)量初始體重，結(jié)束時(shí)稱(chēng)量末期體重，計(jì)算平均日增重，計(jì)算公式如下：

日采食量/g=當(dāng)天飼喂飼糧總重量-第二天早晨飼喂前剩余飼糧重量；

平均日增重/g=（末期平均體重-初始平均體重）/時(shí)間間隔。

1.4.2 血清生化、抗氧化及免疫指標(biāo) 試驗(yàn)期第40天晚上停止喂料，第41天早上，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取2只體重接近的健康肉兔，每個(gè)處理共10只，心臟采血，采集完的血液靜置過(guò)夜24 h，3000 r/min離心10 min，收集血清，裝入EP管中，于-20℃保存?zhèn)溆?，用于測(cè)定血清生化、抗氧化及免疫性能指標(biāo)。

血清生化指標(biāo)總蛋白（TP）、甘油三酯（TG）、總膽固醇（TCHO）、尿素氮（BUN）、血清酸性磷酸酶（ACP），均采用南京建成生物工程研究所的血液生化指標(biāo)檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

血清超氧化物歧化酶（SOD）、總抗氧化能力（T-AOC）、乳酸脫氫酶（LDH）、干擾素-γ（IFN-γ）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、免疫球蛋白 G（IgG），均采用北京奇松生物有限公司的酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行測(cè)定。

1.5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 數(shù)據(jù)采用SPSS 22軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。方差分析使用One-way ANOVA，多重比較采用LSD法，P＜0.05為差異顯著。

2結(jié)果分析

2.1 飼糧中添加不同配比中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響 由表2可知，II、III、IV組末期重較對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），四個(gè)中草藥添加組平均日采食量較對(duì)照組分別增加8.62%、7.24%、7.78%、9.71%，II、III組平均日增重較對(duì)照組提高，但差異不顯著。各試驗(yàn)組料重比與對(duì)照組差異不顯著。

2.2 飼糧中添加不同配比中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響 由表3可知，四個(gè)中草藥添加組血清膽固醇低于對(duì)照組，分別降低 19.32%（P ＞ 0.05）、49.24%（P ＜ 0.05）、25%（P＞ 0.05）、39.39%（P ＜ 0.05）；四個(gè)中草藥添加組血清甘油三酯顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；II組血清葡萄糖水平顯著提高 （P＜0.05），較對(duì)照組提高19.97%，I、III、IV 組與對(duì)照組差異不顯著；I、II、III、IV組血清總蛋白水平比對(duì)照組分別提高11.33%、4.27%、4.27%和24.18%，其中IV組血清總蛋白水平顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；各試驗(yàn)組血清酸性磷酸酶含量較對(duì)照組有提高的趨勢(shì)，但差異不顯著 （P＞0.05）。各試驗(yàn)組血清尿素氮含量與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。

表2 中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔生長(zhǎng)性能的影響

表3 中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響

2.3 飼糧中添加不同配比中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔血清抗氧化及免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，四個(gè)中草藥添加組血清IgG均高于對(duì)照組，分別增加18.60%、49.16%、18.92%和9.69%，其中II組血清 IgG 水平顯著提高（P ＜ 0.05）；I、II組血清IFN-γ高于對(duì)照組，但差異不顯著（P＞0.05）；四個(gè)中草藥添加組血清IL-6顯著高于對(duì)照組，分別提高 109.94%、179.78%、245.31%、207.68%（P＜0.05）。四個(gè)中草藥添加組血清LDH顯著低于對(duì)照組，分別比對(duì)照組降低61.41%、44.13%、58.01%和 86.35%（P ＜ 0.05）；II、III組血清 SOD 分別比對(duì)照組增加58.47%和17.81%，其中II組血清SOD 水平顯著提高 （P ＜ 0.05）；II、III組血清 TAOC高于對(duì)照組（P＞0.05）。

表4 中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔血清抗氧化及免疫指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 飼糧中添加不同配比中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔生產(chǎn)性能的影響 本試驗(yàn)的中草藥飼料添加劑根據(jù)中獸醫(yī)學(xué)理論，采用清熱解毒、健脾開(kāi)胃、補(bǔ)養(yǎng)氣血的原則，調(diào)整陰陽(yáng)、祛邪逐疫，主要成分有：桑葉、菊花、黃柏、川芎、當(dāng)歸、山楂、神曲、金銀花、陳皮、青皮等中草藥組成。結(jié)果表明中草藥復(fù)方能夠不同程度的提高肉兔的平均日采食量和平均日增重。II、III組肉兔全期平均日采食量顯著高于對(duì)照組，平均日增重高于對(duì)照組，料重比小于對(duì)照組（P＞0.05），對(duì)肉兔的生長(zhǎng)具有一定的促進(jìn)作用。其原因可能是組方中川芎和當(dāng)歸益氣補(bǔ)血，可抗氧化清除自由基，提高防病能力；桑葉、黃柏、車(chē)前草、金銀花、菊花清熱消毒、抗菌消炎，可增強(qiáng)機(jī)體抗病能力；陳皮、青皮理氣健脾，可提高免疫力；山楂、神曲一起用藥，可加強(qiáng)消化，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收；因此在一定程度上可以改善動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。 吳占福（2007）、許騰（2013）、王震等（2009）均利用不同中草藥組成不同復(fù)方中草藥添加劑添加到兔飼料中，結(jié)果均表明復(fù)方中草藥添加劑具有促進(jìn)兔生長(zhǎng)的作用。劉榮欣等（2013）報(bào)道，在肉用幼兔日糧中添加1.5%中草藥，幼兔平均日增重提高14.10%，飼料轉(zhuǎn)化率降低4.48%。這些報(bào)道結(jié)果均與本試驗(yàn)結(jié)果一致，表明日糧中添加中草藥可以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)。然而其余中草藥添加組效果不顯著的原因可能是由于各試驗(yàn)組所用中草藥略微不同，各中草藥的藥理作用不同所致，具體原因還有待于進(jìn)一步研究。

3.2 飼糧中添加不同配比中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔血清生化指標(biāo)的影響 本試驗(yàn)結(jié)果表明，中草藥添加組血清總蛋白含量高于對(duì)照組。與祝國(guó)強(qiáng)等（2004）在肉雞中添加1%中草藥能提高血清總蛋白含量的結(jié)果相一致。血清總蛋白與尿素氮的水平可反映機(jī)體蛋白質(zhì)代謝水平，當(dāng)總蛋白含量升高或尿素氮含量降低，機(jī)體可能處于正氮平衡狀態(tài)，此時(shí)日糧中蛋白質(zhì)的吸收和利用率較高，利于動(dòng)物生長(zhǎng)（陳曉生等，2005）。試驗(yàn)結(jié)果顯示II組血清葡萄糖水平顯著提高，四個(gè)中草藥添加組血清膽固醇及甘油三酯低于對(duì)照組。血清葡萄糖是體內(nèi)各組織細(xì)胞的主要能量來(lái)源，當(dāng)其在生理范圍內(nèi)升高時(shí)，機(jī)體自身免疫力及抗應(yīng)激能力增強(qiáng)，同時(shí)也表示動(dòng)物對(duì)飼料中碳水化合物的利用率提高。復(fù)方中桑葉（王道營(yíng)等，2011）、菊花（崔艷，2014）、川芎（黃世領(lǐng)等，1999）、當(dāng)歸（俞雷等，1999）、山楂（于蓓蓓等，2015）、金銀花（龍彬等，2018；王強(qiáng)等，2007）、陳皮 （李玲和陳常秀，2009）均有降低血清或組織中膽固醇及甘油三酯的作用。酸性磷酸酶（ACP）是動(dòng)物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶酶體的標(biāo)志性酶，參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝（柳淑琴，2012）。本研究中，投喂中草藥添加劑后ACP活性較對(duì)照組總體表現(xiàn)為上升趨勢(shì)，表明中草藥添加劑作為一種免疫增強(qiáng)劑增強(qiáng)了肉兔體內(nèi)非特異性免疫力。以上結(jié)果表明，中草藥添加劑能通過(guò)影響斷奶新西蘭兔對(duì)飼料中蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂類(lèi)營(yíng)養(yǎng)的利用，調(diào)節(jié)機(jī)體非特異性免疫及抗應(yīng)激能力。

3.3 飼糧中添加不同配比中草藥復(fù)合飼料添加劑對(duì)肉兔血清抗氧化及免疫指標(biāo)的影響 IgG是血液中含量最高的免疫球蛋白，在抗體介導(dǎo)的防衛(wèi)機(jī)理中占主要地位，IgG比其他免疫球蛋白更易逸出血管，參加體表和組織間的防衛(wèi)。IFN-γ是I型輔助T細(xì)胞的標(biāo)志性細(xì)胞因子，能夠激活抗原提呈細(xì)胞，可抑制變態(tài)反應(yīng)，調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫水平。IL-6在B細(xì)胞生長(zhǎng)分化時(shí)起關(guān)鍵作用，可在體液免疫中促進(jìn)B細(xì)胞增殖和分化，分泌免疫球蛋白。結(jié)果顯示四個(gè)中草藥添加組血清IgG高于對(duì)照組，II組血清IFN-γ和IL-6水平提高，其值也是在正常范圍內(nèi)，表明添加中草藥添加劑能提高兔的體液和細(xì)胞免疫水平。與賈青輝等（2014）研究結(jié)果一致，五味子、甘露寡糖與益生素合用能提高肉雞免疫功能。

SOD、T-AOC等抗氧化酶類(lèi)含量和活力往往被用作評(píng)價(jià)機(jī)體組織器官機(jī)能的重要指標(biāo)（Felver-Gant等，2014）。LDH存在于機(jī)體所有組織細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，當(dāng)心肌細(xì)胞損傷時(shí)，LDH從受損細(xì)胞內(nèi)釋放出來(lái)，進(jìn)入血液中，致血液中LDH活性升高，因此，血清中LDH的量與心肌損傷和壞死程度呈正相關(guān)（王天等，2007）。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，中草藥添加組血清LDH水平顯著降低，II血清SOD水平顯著提高，II、III組血清T-AOC水平顯著提高。因此在新西蘭肉兔日糧中，添加中草藥添加劑復(fù)方可使機(jī)體血清 IgG、IFN-γ、IL-6、SOD和T-AOC活性顯著提高，血清LDH的含量減少，提高了機(jī)體整體抗氧化功能，從而有利于兔只生產(chǎn)性能和抗病力的充分發(fā)揮。

4 小結(jié)

飼糧中添加中草藥添加劑復(fù)方可調(diào)節(jié)斷奶新西蘭兔對(duì)飼料中蛋白質(zhì)、碳水化合物和脂類(lèi)營(yíng)養(yǎng)的利用，提高機(jī)體免疫及抗氧化能力，有利于其生產(chǎn)性能的提高。