辣木葉提取物對(duì)蛋鴨抗氧化、脂質(zhì)代謝及免疫功能的影響

饒?bào)w宇 ， 吳伯梅 ， 鮮思美 *， 張 友 ， 包濤濤 ， 楊倩

（1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州貴陽(yáng) 550025；2.貴州省動(dòng)物疫病研究所，貴州貴陽(yáng) 550025）

辣木（Moringa oleifera Lam）原產(chǎn)于印度，為辣木科辣木屬速生喬木樹(shù)種（劉嬌，2019）。其葉營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，食用安全，內(nèi)含黃酮類(lèi)、多酚類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)等多種功能性成分 （Gopalakrishnan等，2016），2012年被我國(guó)衛(wèi)生部門(mén)公布為新資源食品 （張彤，2015；長(zhǎng)春，2007）。辣木葉提取物主要的活性成分是辣木葉黃酮（FMOL）。研究表明，F(xiàn)MOL具有抗氧化（Siddhuraju 等，2003）、抗菌（王遠(yuǎn)等，2017）、增強(qiáng)機(jī)體免疫力（張幸怡等，2016）等功能。另外，F(xiàn)MOL在調(diào)節(jié)機(jī)體脂質(zhì)代謝方面也具有積極作用（孫朦等，2018）。目前關(guān)于辣木葉提取物對(duì)蛋鴨脂質(zhì)代謝、抗氧化性能及免疫功能的影響鮮有報(bào)道。因此，本研究以25周齡金定蛋鴨為試驗(yàn)動(dòng)物，在飼糧中添加不同水平的辣木葉提取物，研究其對(duì)蛋鴨抗氧化、脂質(zhì)代謝及免疫相關(guān)指標(biāo)含量的影響，為辣木葉提取物在蛋鴨健康養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 辣木葉提取物購(gòu)自蘭州沃特萊斯生物科技有限公司，有效成分辣木黃酮含量為20%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)選用同一鴨舍內(nèi)體況良好、產(chǎn)蛋量相近的25周齡金定蛋鴨480只，隨機(jī)分成4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)24只。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧 （不含辣木葉提取物）；試驗(yàn)組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加1、1.5 g/kg和2 g/kg的辣木葉提取物 （有效成分辣木黃酮含量分別為200、300 mg/kg和400 mg/kg）的試驗(yàn)飼糧?；A(chǔ)飼糧及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)）

試驗(yàn)期間，每天9：00和17：00各喂飼料一次。采用大棚旱養(yǎng)模式，自由采食、飲水。每天光照15 h，清糞一次。試驗(yàn)分為預(yù)飼期7 d和正飼期56 d，共 63 d。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 抗氧化指標(biāo)測(cè)定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束前12 h禁食，自由飲水。每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取3只蛋鴨，翅靜脈采血2 mL，3000 r/min離心10 min，分離血清于-20℃保存?zhèn)溆谩Ａ黼S機(jī)抽取3枚鴨蛋，分離蛋黃，將新鮮蛋黃置于平皿中，用玻棒攪拌均勻后抽取2 mL于離心管中，－20℃保存?zhèn)溆?。血清和蛋黃中丙二醛 （MDA）含量及超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）活性均采用上?？婆d商貿(mào)有限公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)定（產(chǎn)品批號(hào)均為：LOT NO.:1905N）。

1.3.2 脂質(zhì)代謝指標(biāo)測(cè)定 樣本采集方法同1.3.1，用ELISA試劑盒分別測(cè)定血清和蛋黃中甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量。

1.3.3 免疫指標(biāo)測(cè)定 血清樣本的采集方法同1.3.1；另外，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)抽取3份新鮮十二指腸樣本，每份樣本稱取1 g左右，用預(yù)冷的PBS（pH為 7.2～7.4，濃度為 0.01 mol/L）按 1：9的比例在冰浴上勻漿，5000 r/min離心15 min取上清液待檢，采用上?？婆d商貿(mào)有限公司生產(chǎn)的ELISA試劑盒進(jìn)行測(cè)定（產(chǎn)品批號(hào)：LOT NO.1904N）。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析方法 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 24軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨血清及蛋黃抗氧化指標(biāo)的影響 由表2可知，與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組的血清MDA含量無(wú)顯著變化（P＞0.05），2 g/kg組蛋黃MDA含量顯著降低，降低了16.6%（P＜0.05）；與對(duì)照組相比，1.5、2 g/kg組血清和蛋黃中SOD活性顯著提高，1.5 g/kg組血清和蛋黃SOD分別提高17.3%和 30.2%（P ＜ 0.05），2 g/kg組血清和蛋黃SOD分別提高31.1%和43.9%（P＜0.05），在改善血清和蛋黃SOD活性方面2 g/kg組效果較好；與對(duì)照組相比，1、1.5 g/kg組血清和蛋黃中GSH-Px活性無(wú)顯著變化 （P＞0.05），2 g/kg組蛋鴨血清和蛋黃GSH-Px活性顯著提高，分別提高14.2%和15.5%（P ＜ 0.05）。

表2 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨血清及蛋黃抗氧化指標(biāo)的影響

2.2 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨血清及蛋黃脂質(zhì)代謝指標(biāo)的影響 由表3可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加辣木葉提取物對(duì)血清中TG、TC和LDL-C含量均無(wú)顯著影響 （P＞0.05），1.5、2 g/kg組的血清HDL-C含量顯著升高17.1%和26.1%（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，各試驗(yàn)組TG含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）；2 g/kg組蛋黃TC含量顯著降低14.3%（P＜ 0.05）；1.5、2 g/kg組蛋黃 HDL-C 含量分別升高9.2%和 20.9%（P＞0.05），LDL-C含量分別降低9.8%和15.9%（P＜0.05）。

表3 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨血清及蛋黃脂質(zhì)代謝指標(biāo)的影響

2.3 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨免疫指標(biāo)的影響 由表4可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加1.5、2 g/kg的辣木葉提取物可顯著提高蛋鴨血清IgA和十二指腸sIgA含量，血清IgA含量分別提高了40.2%和47.5%（P＜0.05），十二指腸sIgA含量分別提高了 41.8%和 65.6%（P＜0.05）；2 g/kg組的血清IgG、IgM含量顯著高于空白對(duì)照組，分別提高16.5%和35.4%（P＜0.05）。

表4 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨免疫指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨血清及蛋黃抗氧化指標(biāo)的影響 MDA是自由基作用于脂質(zhì)后產(chǎn)生的過(guò)氧化反應(yīng)終產(chǎn)物，在一定程度上反映了脂質(zhì)過(guò)氧化強(qiáng)度和膜系統(tǒng)損害程度 （劉嬌，2019）；SOD和GSH-Px是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化酶，SOD能夠?qū)⒏呋钚缘腛2-催化為低活性的過(guò)氧化氫，而GSH-Px能分解體內(nèi)的過(guò)氧化物，SOD和GSH-Px相互作用，進(jìn)而保護(hù)細(xì)胞膜功能與結(jié)構(gòu)的完整性（張艷梅等，2019）。研究表明，黃酮類(lèi)化合物可抑制自由基對(duì)機(jī)體的氧化損傷，發(fā)揮抗氧化作用（謝相悅等，2018）。岳秀潔等（2016）、王遠(yuǎn)等（2017）在體外抗氧化試驗(yàn)中研究發(fā)現(xiàn)，辣木葉黃酮對(duì)1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基具有較好的清除能力，孫朦等（2018）、陳瑞嬌等（2007）也證實(shí)了辣木黃酮能夠顯著降低小鼠MDA含量和提高SOD活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加2 g/kg的辣木葉提取物可顯著降低蛋黃中MDA含量，說(shuō)明辣木葉提取物能在一定程度上減少蛋鴨體內(nèi)的脂質(zhì)過(guò)氧化；1.5、2 g/kg組血清和蛋黃中SOD活性顯著提高；2 g/kg組蛋鴨血清和蛋黃中GSH-Px活性顯著提高，說(shuō)明辣木葉提取物可通過(guò)提高蛋鴨體內(nèi)抗氧化酶活性來(lái)發(fā)揮抗氧化活性。

3.2 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨血清及蛋黃脂質(zhì)代謝的影響 有研究表明，HDL-C降低和LDL-C升高都是導(dǎo)致心血管疾病的獨(dú)立因素，HDL能夠?qū)⒋嬖谟诟瓮饨M織的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行再循環(huán)或被分解代謝，有效介導(dǎo)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)（韓獻(xiàn)華等，2016），而較高的LDL-C則是心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素（陳銀華等，2018）。賀家勇等（2018）研究表明，12、24 mg/kg的玫瑰黃酮能夠顯著降低TC、TG水平，且能顯著升高HDL-C水平；孫朦等（2018）研究表明，飼糧中添加高、中劑量的辣木黃酮飼喂高脂血癥小鼠，能極顯著降低血清中TC、TG、LDH-C含量并極顯著提高HDL-C含量，謝貴林等（2015）研究發(fā)現(xiàn)，100 μmol/L 的雪菊黃酮能夠通過(guò)抑制HMG-COA活性來(lái)降低肝細(xì)胞中總膽固醇含量，Pankaj等（2010）研究證明，辣木葉提取物能夠降低HMG-CoA還原酶的活性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加2 g/kg辣木葉提取物能顯著降低蛋黃TC、LDL-C和顯著提高HDL-C含量，分析其原因，可能是由于辣木黃酮能降低HMG-CoA還原酶活性，進(jìn)而減少肝臟中膽固醇的合成，并通過(guò)提高HDL-C的含量，促進(jìn)肝外組織的膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)到肝臟進(jìn)行再循環(huán)或被分解，進(jìn)而降低了鴨蛋中TC含量。

3.3 辣木葉提取物對(duì)蛋鴨免疫指標(biāo)的影響IgG、IgA和IgM是體液免疫應(yīng)答中發(fā)揮免疫功能的重要免疫分子，楊汝才（2019）等在飼糧中添加0.2%和0.4%的辣木黃酮飼喂蛋雛鴨，結(jié)果發(fā)現(xiàn)0.4%組蛋雛鴨血清中IgA含量顯著提高 （P＜0.05），張幸怡等（2016）在飼糧中添加0.9～1.8 g/kg的辣木葉提取物發(fā)現(xiàn)，血液中IgA和IgG的含量顯著提高。而sIgA是黏膜免疫的主要效應(yīng)因子（王定越等，2012），在免疫防御系統(tǒng)中占有非常重要的作用，其抗病能力隨sIgA分泌量的增加而增加（謝全喜等，2013）。研究表明，sIgA能干擾病原生物附著于宿主細(xì)胞，從而減少病原體的傳播及感染（李偉等，2008），金鐘（2014）用中劑量的沙棘葉黃酮飼喂小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，小鼠腸道黏膜中sIgA的含量顯著提高，本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧中添加2 g/kg的辣木葉提取物可顯著提高蛋鴨血清中IgG、IgA、IgM和十二指腸中sIgA含量，這可能是因?yàn)槔蹦救~提取物中的黃酮類(lèi)化合物具有抗菌、消炎、清除自由基等作用，提高了抗體的合成能力，從而增強(qiáng)了機(jī)體的特異性免疫功能（王志剛等，2019）。

4 結(jié)論

飼糧中添加辣木葉提取物可在一定程度上提高蛋鴨的抗氧化能力，降低蛋黃中膽固醇含量，促進(jìn)血清中IgG、IgA、IgM和十二指腸中sIgA的分泌，本試驗(yàn)條件下，2 g/kg組效果最好。