浙貝母UPLC-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜的建立及其抗炎質(zhì)量標(biāo)志物的分析

程斌 周愛(ài)珍 彭昕 王昕蕾 王娟

摘 要 目的：建立浙貝母超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-Q-TOF-MS/MS）指紋圖譜，并確定其抗炎質(zhì)量標(biāo)志物。方法：色譜柱為Eclipse Plus C18，流動(dòng)相為甲醇-0.1%甲酸水溶液（梯度洗脫），流速為0.4 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為2 ?L;采用電噴霧離子源，以正、負(fù)離子模式檢測(cè)，在質(zhì)荷比（m/z）50～1 200范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2004A版）建立10批不同產(chǎn)地浙貝母的UPLC-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜。以小鼠耳腫脹度和血清中丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）水平為抗炎指標(biāo)，采用雙變量相關(guān)分析法和灰色關(guān)聯(lián)度分析法對(duì)浙貝母指紋圖譜中各共有峰相對(duì)峰面積與抗炎指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析，篩選質(zhì)量標(biāo)志物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：在正、負(fù)離子模式下，10批浙貝母藥材分別各有共有峰26、10個(gè)。綜合雙變量相關(guān)分析和灰色關(guān)聯(lián)度分析結(jié)果，共發(fā)現(xiàn)與抗炎作用相關(guān)的質(zhì)量標(biāo)志物9個(gè)，經(jīng)鑒定分別為貝母素乙、貝母素甲、環(huán)巴胺、胡蘿卜苷、Polyphyllin Ⅴ、苦鬼臼毒素、植物甾醇、Ent-kaur-15-en-17-ol、Ent-17-norkauran-16-one。結(jié)論：所建立的UPLC-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜可用于評(píng)價(jià)浙貝母藥材的質(zhì)量;貝母素乙、貝母素甲、環(huán)巴胺等可能是浙貝母具有抗炎作用的質(zhì)量標(biāo)志物。

關(guān)鍵詞 浙貝母;抗炎作用;超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜;雙變量相關(guān)分析;灰色關(guān)聯(lián)度分析;質(zhì)量標(biāo)志物

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish UPLC-Q-TOF-MS/MS fingerprint of Fritillaria thunbergii， and to define its anti-inflammatory quality markers. METHODS： The determination was performed on Eclipse Plus C18 column with mobile phase consisted of methanol-0.1% formic acid solution （gradient elution） at the flow rate of 0.4 mL/min. The column temperature was set at 30 ℃， and injection volume was 2 ?L. The electrospray ion source was used to scan in the range of m/z 50-1 200 with positive and negative ion detection mode. UPLC-Q-TOF-MS/MS fingerprints of 10 batches of F. thunbergii from different habitats were established by using the Similarity Evaluation System of TCM Chromatographic Fingerprints （2004A edition）. With ear swelling degree， the serum levels of MDA and NO as anti-inflammatory indexes， the correlation between the relative area of common peaks in fingerprint and the anti-inflammatory indexes was analyzed by using bivariate correlation analysis and grey correlation analysis， and the quality markers were screened and identified. RESULTS： In positive and negative ion mode， 10 batches of F. thunbergii had 26 peaks and 10 peaks. Based on bivariate correlation analysis and grey correlation analysis， nine quality markers related to anti-inflammatory effect were found， which were identified as peiminine， peimine， cyclobalamine， daucidin， polyphyllin Ⅴ， bitumen podophyllotoxin， phytosterol， ent-kaur-15-en-17-ol， ent-17-norkauran-16-one. CONCLUSIONS： Established UPLC-Q- TOF-MS/MS fingerprint can be used to evaluate the quality of F. thunbergii; peiminine， peimine and cyclobalamine and so on may be the quality markers of anti-inflammatory effect of F. thunbergii.

KEYWORDS? ?Fritillaria thunbergii; Anti-inflammatory effect; UPLC-Q-TOF-MS/MS; Bivariate correlation analysis; Grey correlation analysis; Quality markers

浙貝母是百合科植物浙貝母（Fritillaria thunbergii Miq.）的干燥鱗莖，具有清熱、化痰、止咳、解毒、散結(jié)、消癰等功效，主治風(fēng)熱犯肺、痰火咳嗽、肺癰、乳癰、瘰疬和瘡毒等癥[1]。近年來(lái)研究表明，浙貝母的化痰、止咳、松弛氣管平滑肌、抗炎等作用是其治療呼吸系統(tǒng)疾病的藥理學(xué)基礎(chǔ)[2]，其中浙貝母化痰、止咳的活性成分已較為明確，但對(duì)其抗炎活性成分的研究相對(duì)較少，主要集中在生物堿類成分貝母素甲和貝母素乙[3-5]。

質(zhì)量標(biāo)志物是2016年提出的中藥質(zhì)量評(píng)價(jià)新概念，即通過(guò)一系列篩選和驗(yàn)證研究，確定與該藥物目標(biāo)活性相關(guān)的成分，作為反映其安全性和有效性的標(biāo)志性物質(zhì)進(jìn)行質(zhì)量控制[6-7]。中藥譜-效研究是篩選中藥質(zhì)量標(biāo)志物的重要方法和技術(shù)之一，即先將化學(xué)指紋圖譜中有用的化學(xué)信息提取出來(lái)，然后與藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果相結(jié)合，通過(guò)線性或非線性數(shù)學(xué)處理，建立譜-效數(shù)學(xué)模型，從而確定與藥效相關(guān)的化合物[8]。本研究采用超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-Q-TOF-MS/MS）建立10批不同產(chǎn)地浙貝母的指紋圖譜;以小鼠耳腫脹度和血清中丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）水平為藥效指標(biāo)，采用雙變量相關(guān)分析法和灰色關(guān)聯(lián)度分析法對(duì)UPLC-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜中各共有峰與抗炎藥效指標(biāo)的相關(guān)性進(jìn)行分析，從而篩選出質(zhì)量標(biāo)志物并進(jìn)行鑒定，以期初步揭示浙貝母具有抗炎作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為其質(zhì)量控制和資源開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Acquity型UPLC色譜儀、PGA495型MS儀（美國(guó)Waters公司）;125D-1CN型十萬(wàn)分之一電子分析天平（德國(guó)Sartorius公司）;VS10-300C型超聲波清洗器（無(wú)錫沃信儀器制造有限公司）;HH-W420型電熱恒溫水浴鍋（濟(jì)南歐萊博科學(xué)儀器有限公司）;UV-5200PC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海力申科學(xué)儀器有限公司）;HBS-1096A型酶標(biāo)儀（南京德鐵實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）;FrontierTM 5000型微量高速離心機(jī)（美國(guó)Ohaus公司）。

1.2 藥品與試劑

西貝素、貝母辛、貝母素甲、貝母素乙對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)：B21331、B20082、B20080、B20081，純度均大于99.0%）; MDA、NO酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20190203、20190119）;地塞米松片（遂成藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：180803，規(guī)格：0.75 mg）;甲醇、乙腈為色譜純，甲酸為質(zhì)譜級(jí)，水為純凈水。浙貝母藥材購(gòu)于浙江磐安藥材市場(chǎng)，經(jīng)浙江醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校中藥學(xué)院楊雄志教授鑒定為百合科植物浙貝母（F. thunbergii Miq.）的干燥鱗莖，藥材信息詳見(jiàn)表1。

1.3 動(dòng)物

潔凈級(jí)ICR小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2） g，購(gòu)于長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（吉）2018-0007。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜與質(zhì)譜條件

色譜條件：色譜柱為Agilent Zorbax HPLC Eclipse Plus C18（150 mm×3 mm，1.8 μm）;流動(dòng)相為乙腈（A）- 0.1%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（0～5 min，2%A→25%A;5～10 min，25%A→45%A;10～15 min，45%A→80%A;15～25 min，80%A→100%A;25～30 min，100%A;30～33 min，100%A→2%A）;流速為0.4 mL/min;柱溫為30 ℃;進(jìn)樣量為2 ?L。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，V模式，電壓為3.0 kV，離子源溫度為100 ℃，去溶劑氣溫度為400 ℃;正、負(fù)離子掃描模式，掃描范圍為質(zhì)荷比（m/z）50～1 200;去溶劑氣流速為800 L/h。

2.2 供試品溶液的制備

取浙貝母藥材適量，粉碎，過(guò)四號(hào)篩（下同），取其粉末2 g，加入濃氨水溶液4 mL，浸潤(rùn)1 h，加入三氯甲烷-甲醇（4 ∶ 1，V/V）40 mL，混勻，稱定質(zhì)量，于80 ℃水浴加熱回流2 h，放冷，補(bǔ)足減失的質(zhì)量，過(guò)濾;取續(xù)濾液10 mL，于98～100 ℃水浴條件下蒸干，殘?jiān)约状既芙獠⒍ㄈ萦? mL 量瓶中，即得供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

本研究在正、負(fù)離子掃描模式下均進(jìn)行方法學(xué)考察。

2.3.1 精密度試驗(yàn) 取浙貝母藥材（編號(hào)：S1）粉末2 g，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次。在正、負(fù)離子掃描模式下，分別以6號(hào)峰（貝母素甲）、5號(hào)峰（浙貝素）的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，在正離子掃描模式下，26個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于2.40%（n=5）;在負(fù)離子掃描模式下，10個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于2.80%（n=5），詳見(jiàn)表2、表3。這表明本方法精密度良好。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取浙貝母藥材（編號(hào)：S1）粉末2 g，共5份，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析。在正、負(fù)離子掃描模式下，分別以6號(hào)峰（貝母素甲）、5號(hào)峰（浙貝素）的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，在正離子掃描模式下，26個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于3.00%（n=5）;在負(fù)離子掃描模式下，10個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于2.70%（n=5），詳見(jiàn)表2、表3。這表明本方法重復(fù)性良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取浙貝母藥材（編號(hào)：S1）粉末2 g，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、12、24 h后，按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析。在正、負(fù)離子掃描模式下，分別以6號(hào)峰（貝母素甲）、5號(hào)峰（浙貝素）的保留時(shí)間和峰面積為參照，記錄各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，在正離子掃描模式下，26個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于2.90%（n=5）;在負(fù)離子掃描模式下，10個(gè)共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD均小于3.00%（n=5），詳見(jiàn)表2、表3。這表明供試品溶液于室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 浙貝母UPLC-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜的生成及相似度分析

2.4.1 指紋圖譜的生成 取10批浙貝母藥材樣品粉末，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，分別在正、負(fù)離子掃描模式下采集圖譜，然后將圖譜文件導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2004A版），以中位數(shù)法生成UPLC-Q- TOF-MS/MS指紋圖譜。結(jié)果，在正、負(fù)離子模式下，10批浙貝母藥材分別各有共有峰26、10個(gè)，詳見(jiàn)圖1。

2.4.2 相似度分析 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》（2004A版）進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，按照相關(guān)步驟進(jìn)行色譜峰的匹配及對(duì)照?qǐng)D譜（R）的生成。以對(duì)照?qǐng)D譜為參照?qǐng)D譜，將10批浙貝母指紋圖譜分別與其進(jìn)行比較，并計(jì)算相似度值。結(jié)果，在正、負(fù)離子模式下，10批浙貝母藥材的相似度均分別大于0.840、0.810，表明不同產(chǎn)地浙貝母藥材中所含化學(xué)成分有一定的差異，詳見(jiàn)表4。

2.5 浙貝母的抗炎作用考察

2.5.1 分組、造模與給藥 將小鼠分為模型組（生理鹽水）、陽(yáng)性對(duì)照組（地塞米松，0.000 4 g/kg，根據(jù)人與小鼠等效劑量系數(shù)換算）和10批浙貝母高、低劑量組（1.3、0.325 g/kg，均以生藥量計(jì)，根據(jù)人與小鼠等效劑量系數(shù)換算，其中高劑量為臨床等效劑量的2倍），共22組，每組10只，每天灌胃給藥1次（臨用時(shí)均用水制成相應(yīng)藥液），連續(xù)給藥7 d。末次灌胃給藥30 min后，取20 ?L二甲苯涂布于各組小鼠右耳的前后兩面以復(fù)制炎癥模型，并以其左耳作為空白對(duì)照，涂布生理鹽水。

2.5.2 小鼠血清中MDA、NO水平檢測(cè) 造模1 h后，各組小鼠摘眼球取血，以3 500 r/min離心后取上層血清，根據(jù)相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，檢測(cè)血清中MDA、NO的水平。結(jié)果，與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和10批浙貝母高、低劑量組小鼠血清中MDA水平均顯著升高，NO水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01），詳見(jiàn)表5。

2.5.3 小鼠耳腫脹度的檢測(cè) 參考相關(guān)文獻(xiàn)方法[9]，將各組小鼠脫頸處死，用直徑為9 mm的打孔器在小鼠左、右耳對(duì)稱部位打下圓耳片，稱定質(zhì)量，并計(jì)算耳腫脹度（耳腫脹度=右圓耳片質(zhì)量-左圓耳片質(zhì)量）。結(jié)果，與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組和10批浙貝母高、低劑量組小鼠耳腫脹度均顯著減少（P<0.05或P<0.01），詳見(jiàn)表5。

2.6 浙貝母譜-效相關(guān)性分析

2.6.1 雙變量相關(guān)分析 參考相關(guān)文獻(xiàn)方法[10]，以均值化后的10批浙貝母指紋圖譜的共有峰相對(duì)峰面積為因變量，抗炎指標(biāo)小鼠耳腫脹度和血清MDA、NO水平為自變量，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行雙變量相關(guān)分析，計(jì)算各變量與共有峰相對(duì)峰面積的相關(guān)系數(shù)。當(dāng)相關(guān)系數(shù)絕對(duì)值大于0.6時(shí)，表示顯著相關(guān);當(dāng)該值大于0.7時(shí)，表示極顯著相關(guān)。結(jié)果，在正離子模式下，12、21號(hào)峰相對(duì)峰面積與耳腫脹度顯著相關(guān)，5、6、7、9、11、17號(hào)峰相對(duì)峰面積與NO水平顯著相關(guān)，12、14號(hào)峰相對(duì)峰面積與NO水平極顯著相關(guān);負(fù)離子模式下沒(méi)有色譜峰與抗炎指標(biāo)呈顯著相關(guān)，詳見(jiàn)表6、表7。

2.6.2 灰色關(guān)聯(lián)度分析 以10批浙貝母指紋圖譜共有峰的相對(duì)峰面積為子序列，以小鼠耳腫脹度和血清中MDA、NO水平為母序列，進(jìn)行灰色關(guān)聯(lián)度分析。當(dāng)關(guān)聯(lián)度>0.5時(shí)，認(rèn)為子序列與母序列之間有著一定的關(guān)聯(lián)性，且關(guān)聯(lián)度數(shù)值越高，說(shuō)明關(guān)聯(lián)性越強(qiáng)[11]。結(jié)果，在正離子模式下，1、3、4、5、6、7、9、10、11、12、14、17、20、21、24、26號(hào)峰與耳腫脹度和MDA、NO水平均相關(guān);在負(fù)離子模式下，3、5號(hào)峰與耳腫脹度和MDA、NO水平均相關(guān)，詳見(jiàn)表8、表9。

綜合雙變量相關(guān)分析和灰關(guān)聯(lián)度分析結(jié)果可知，與抗炎指標(biāo)相關(guān)的共有峰分別為5、6、7、9、11、12、14、17、21號(hào)峰，初步推測(cè)這9個(gè)峰所對(duì)應(yīng)的化合物為浙貝母抗炎作用的質(zhì)量標(biāo)志物。

2.7 浙貝母抗炎質(zhì)量標(biāo)志物的化學(xué)成分鑒定

通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)[12-18]，構(gòu)建浙貝母化學(xué)成分的數(shù)據(jù)集，包括化學(xué)成分、英文名稱、分子式、結(jié)構(gòu)以及化學(xué)物質(zhì)登錄號(hào)等。利用Waters Masslynx 4.1軟件，對(duì)“2.6”項(xiàng)下篩選出的與抗炎作用相關(guān)的9個(gè)共有峰進(jìn)行成分結(jié)構(gòu)表征。方法參數(shù)設(shè)置如下：保留時(shí)間范圍為0～33 min，保留時(shí)間誤差限為0.01 min，質(zhì)量誤差限為0.01 Da，質(zhì)量精確度小于10 ppm。將各共有峰的峰強(qiáng)度、保留時(shí)間和m/z等信息與對(duì)照品進(jìn)行比較，同時(shí)結(jié)合化合物的一、二級(jí)質(zhì)譜信息和裂解規(guī)律，參考文獻(xiàn)資料進(jìn)行分析，結(jié)果詳見(jiàn)表10。

由表10可知，浙貝母質(zhì)量標(biāo)志物為貝母素乙、貝母素甲、環(huán)巴胺、胡蘿卜苷、Polyphyllin Ⅴ、苦鬼臼毒素、植物甾醇、Ent-kaur-15-en-17-ol、Ent-17-norkauran-16-one。

3 討論

UPLC-Q-TOF-MS/MS法將液相色譜的高分離效能與質(zhì)譜的強(qiáng)大結(jié)構(gòu)鑒定功能相結(jié)合，故在中藥化學(xué)成分分析、中藥質(zhì)量控制等研究中得到廣泛應(yīng)用。本研究采用UPLC-Q-TOF-MS/MS技術(shù)建立了10批不同產(chǎn)地浙貝母藥材的指紋圖譜。在試驗(yàn)前期，筆者考察了色譜分析的條件后發(fā)現(xiàn)，利用乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脫的分離效果優(yōu)于甲醇-水溶液，且色譜圖中各峰峰形穩(wěn)定、分離度良好。

地塞米松是一種人工合成的皮質(zhì)類固醇，屬于腎上腺皮質(zhì)激素類藥，可抑制炎癥部位中白細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的聚集，減弱兩者的吞噬作用，并對(duì)溶酶體酶以及炎癥介質(zhì)的合成和釋放起到抑制作用，能夠減輕和防止炎癥反應(yīng)，從而達(dá)到減輕炎癥的效果[19]，故在浙貝母抗炎作用實(shí)驗(yàn)中將其作為陽(yáng)性對(duì)照。

本研究選用二甲苯對(duì)小鼠耳廓進(jìn)行造模，可迅速引起小鼠耳血管內(nèi)液向組織液滲出，導(dǎo)致耳腫脹，產(chǎn)生炎癥[20]。炎癥狀態(tài)下，MDA 是氧自由基與細(xì)胞膜上不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，可間接反映血漿中氧自由基的水平，且其水平與抗炎效果呈正相關(guān);NO 由內(nèi)源性一氧化氮合酶（NOS）催化 L-精氨酸生成，NOS主要分布于巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞中，在炎癥狀態(tài)下大量產(chǎn)生，繼而催化產(chǎn)生大量 NO，加重炎癥反應(yīng)[21]。本研究結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地浙貝母藥材均具有良好的抗炎作用。

雙變量相關(guān)分析是研究2個(gè)或2個(gè)以上隨機(jī)變量間相關(guān)關(guān)系的統(tǒng)計(jì)分析方法[22]，本研究將中藥指紋圖譜中各色譜峰看作為一個(gè)變量，各抗炎指標(biāo)也可看作一個(gè)變量，分析兩者之間的相關(guān)程度?；疑P(guān)聯(lián)度分析適用于系統(tǒng)信息量較少而涉及因素多的圖譜，有利于體現(xiàn)各成分間的相互作用，同時(shí)關(guān)聯(lián)系數(shù)可反映2個(gè)被比較序列的緊密程度[23-24]。本研究綜合雙變量相關(guān)分析和灰關(guān)聯(lián)度分析的結(jié)果，推測(cè)出與抗炎作用相關(guān)的共有峰有9個(gè)，經(jīng)鑒定分析確定為貝母素乙（5號(hào)峰）、貝母素甲（6號(hào)峰）、環(huán)巴胺（7號(hào)峰）、胡蘿卜苷（9號(hào)峰）、Polyphyllin Ⅴ（11號(hào)峰）、苦鬼臼毒素（12號(hào)峰）、植物甾醇（14號(hào)峰）、Ent-kaur-15-en-17-ol（17號(hào)峰）、Ent-17-norkauran-16-one（21號(hào)峰）。

綜上所述，本研究建立了不同產(chǎn)地浙貝母的UPLC-Q-TOF-MS/MS指紋圖譜，并初步推測(cè)貝母素乙、貝母素甲、環(huán)巴胺、胡蘿卜苷、Polyphyllin Ⅴ、苦鬼臼毒素、植物甾醇、Ent-kaur-15-en-17-ol、Ent-17-norkauran- 16-one是其具有抗炎作用的質(zhì)量標(biāo)志物，這可為后續(xù)浙貝母的質(zhì)量控制及資源開(kāi)發(fā)提供參考。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S]. 2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：292.

[ 2 ] 趙金凱，杜偉鋒，應(yīng)澤茜，等.浙貝母的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2019，30（1）：177-180.

[ 3 ] YI PF，WU YC，DONG HB，et al. Peimine impairs pro-inflammatory cytokine secretion through the inhibition? ? ?of the activation of NF-κB and MAPK in LPS-induced RAW264.7 macrophages[J]. Immunopharmacol Immunotoxicol，2013，35（5）：567-572.

[ 4 ] 歸改霞.貝母素甲對(duì)急性肺損傷小鼠 TNF-α、IL-4、IL-10 及 PGE-2 時(shí)空表達(dá)的影響[J].中醫(yī)臨床研究，2017，9（1）：1-4.

[ 5 ] PARK JH，LEE B，KIN HK，et al. Peimine inhibits the production of pro-inflammatory cytokine secretion through regulation of the phosphorylation of NF-κB and MAPKs in HMC-1 cells[J]. Pharmac Magazine，2017，13（2）：359-364.

[ 6 ] 彭任，陸兔林，胡立宏，等.中藥飲片質(zhì)量標(biāo)志物（Q-mar- ker）研究進(jìn)展[J].中草藥，2020，51（10）：2603-2610.

[ 7 ] 葉霽，李睿旻，曾華武，等.基于整體觀中藥質(zhì)量標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)及研究進(jìn)展[J].中草藥，2019，50（19）：4529-4537.

[ 8 ] 蔡靚，張倩，楊豐慶.中藥譜效學(xué)的應(yīng)用進(jìn)展[J].中草藥，2017，48（23）：5005-5011.

[ 9 ] 甘露，任振堃，葉彪，等.威靈仙不同提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛、平痙作用[J].華西藥學(xué)雜志，2020，35（2）：179-182.

[10] 俞靜靜，蘇潔，顏美秋，等.陳皮降脂藥效與黃酮類成分的相關(guān)性研究[J].中國(guó)中藥雜志，2019，44（15）：3335- 3342.

[11] 郝鵬升，范嘉育，耿淑琴，等.數(shù)據(jù)分析技術(shù)在中藥抗氧化譜效關(guān)系研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2019，36（7）：877-884.

[12] 崔琳琳，包永睿，王帥，等. UPLC-Q-TOF-MS/MS快速鑒定補(bǔ)肺健脾方的化學(xué)成分[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2020，26（9）：184-193.

[13] 李成容，李冬連，李玲蕊，等.栽培瓦布貝母中生物堿類成分的研究[J].華西藥學(xué)雜志，2019，34（5）：463-467.

[14] 張?chǎng)┫?還貝止咳方止咳作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究[D]. 太原：山西中醫(yī)藥大學(xué)，2019.

[15] 康俊麗，黃海英，劉雅敏，等.基于UPLC-QE-Orbitrap- MS法測(cè)定補(bǔ)肺益腎方中10個(gè)入血成分的含量[J].藥物分析雜志，2019，39（3）：441-450.

[16] 張寧.基于中藥質(zhì)量標(biāo)志物的杏貝止咳顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升研究[D].南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2019.

[17] 黃海英，康俊麗，余亞輝，等.基于UPLC-Q-Orbitrap MS法分析補(bǔ)肺益腎方的化學(xué)成分[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2019，38（1）：1-13.

[18] 張寧，高霞，周宇，等. UPLC-Q-TOF-MS/MS快速分析杏貝止咳顆?；瘜W(xué)成分[J].中國(guó)中藥雜志，2018，43（22）：4439-4449.

[19] 彭小平，郭慧琴，陳虹.地塞米松聯(lián)合抗炎、抗感染治療虹膜睫狀體炎的有效性觀察[J].藥品評(píng)價(jià)，2019，16（18）：20-24.

[20] 薛焱，劉欣媛，高洪皮，等.蒙藥阿給水提物的抗炎作用及其機(jī)制研究[J].中國(guó)藥房，2020，31（12）：1425-1429.

[21] 李金儒.愈潰方對(duì)實(shí)驗(yàn)性潰瘍性結(jié)腸炎大鼠SOD、MDA、NO及iNOS、MPO影響[D].沈陽(yáng)：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，2019.

[22] 郝鵬升，范嘉育，耿淑琴，等.數(shù)據(jù)分析技術(shù)在中藥抗氧化譜效關(guān)系研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2019，36（7）：877-884.

[23] 李力，潘倩雯，劉宏.灰色關(guān)聯(lián)度分析法在中藥譜效學(xué)研究中的應(yīng)用[J].中國(guó)藥房，2018，29（11）：1581-1584.

[24] 周愛(ài)珍，鮑珍貝，程斌，等.溫郁金中5種成分的含量測(cè)定及其產(chǎn)地加工方法優(yōu)化[J].中國(guó)藥房，2019，30（3）：381- 386.

（收稿日期：2020-02-24 修回日期：2020-06-04）

（編輯：唐曉蓮）