基于OPG/RANKL信號(hào)通路探討姜黃素對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松模型大鼠骨代謝平衡的影響

張慶剛 張慶紅 張克民 姚明 田月洋 毛小莉 馮宜蒀 王卉

摘 要 目的：探討姜黃素對(duì)去勢(shì)骨質(zhì)疏松模型大鼠骨代謝平衡的影響，并探討其可能機(jī)制。方法：將雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組（A組）、模型組（B組）、雌二醇組[C組（陽性對(duì)照），戊酸雌二醇50 μg/（kg·d）]和姜黃素低、中、高劑量組[D～F組，55、110、165 μg/（kg·d）]，每組15只。除A組外，其余各組均采用去卵巢法建立去勢(shì)骨質(zhì)疏松模型。造模后，A、B組大鼠均灌胃生理鹽水，各給藥組灌胃相應(yīng)藥物，體積均為30 mL/kg，每日1次，連續(xù)12周。采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法檢測(cè)各組大鼠血清骨代謝標(biāo)志物[骨特異性堿性磷酸酶、核心結(jié)合因子α1、Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽、Ⅰ型前膠原氨基端前肽、骨鈣素]含量，采用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微型CT影像系統(tǒng)檢測(cè)大鼠骨密度（BMD）和骨小梁結(jié)構(gòu)參數(shù)[相對(duì)骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、骨小梁數(shù)量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、連接密度（Conn.D）、骨小梁分離度（Tb.Sp）、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)（SMI）]，采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法和Western blotting法分別檢測(cè)下丘腦和股骨組織中骨保護(hù)素（OPG）和核因子κB受體活化因子配體（RANKL）mRNA及蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果：與A組比較，B組大鼠血清骨代謝標(biāo)志物含量，BMD和BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn.D以及OPG mRNA及其蛋白的表達(dá)量均顯著降低，Tb.Sp、SMI以及RANKL mRNA及其蛋白的表達(dá)量均顯著升高（P<0.05）。與B組比較，各給藥組大鼠血清骨代謝標(biāo)志物含量，BMD和BV/TV、? ? ?Tb.N、Tb.Th、Conn.D以及OPG mRNA及其蛋白的表達(dá)量均顯著升高，Tb.Sp、SMI以及RANKL mRNA及其蛋白的表達(dá)量均顯著降低，且姜黃素各組效果均呈劑量依賴性（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論：姜黃素能夠改善去勢(shì)骨質(zhì)疏松模型大鼠的骨代謝水平，增加其BMD、改善骨小梁微結(jié)構(gòu)、抑制骨吸收;這種作用可能與調(diào)控OPG/RANKL信號(hào)通路有關(guān)。

關(guān)鍵詞 骨質(zhì)疏松;姜黃素;骨代謝平衡;骨保護(hù)素/核因子κB受體活化因子配體信號(hào)通路;大鼠

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To investigate the effects of curcumin on bone metabolism balance in ovariectomized osteoporosis model rats， and to investigate its potential mechanism. METHODS： Totally female Wistar rats were randomly divided into blank group （group A）， model group （group B）， estradiol group [group C （positive control）， estradiol valerate 50 μg/（kg·d）]， curcumin low-dose， medium-dose and high-dose groups [group D-F， 55， 110， 165 μg/（kg·d）]， with 15 rats in each group. Except for group A， other rats were ovariectomized to establish osteoporosis model. After modeling， group A and B were given normal saline intrgastrically， and administration groups were given relevant medicine intrgastrically 30 mL/kg， once a day， for consecutive 12 weeks. The contents of serum bone metabolism markers [BALP， CBF-α1， CTX-Ⅰ， PINP and OC] were determined by ELISA. The bone mineral density （BMD） and trabecular structure indexes [relative bone volume fraction （BV/TV）， trabecular number? （Tb.N）， trabecular thickness （Tb.Th）， connectivity density （Conn. D）， trabecular separation （Tb.Sp） and structure model index （SMI）] were determined by micro CT imaging system. The mRNA and protein expression of OPG and RANKL in hypothalamus and femur were determined by RT-PCR and Western blotting assay. RESULTS： Compared with group A， the contents of serum bone metabolism markers， BMD， BV/TV， Tb.N， Tb.Th， Conn.D， mRNA and protein expression of OPG were decreased significantly in group B， while Tb.Sp， SMI， mRNA and protein expression of RANKL were increased significantly （P<0.05）. Compared with group B， the contents of serum bone metabolism markers， BMD， BV/TV， Tb.N， Tb.Th， Conn.D， mRNA and protein expression of OPG were increased significantly in administration groups; Tb.Sp， SMI， mRNA and protein expression of RANKL were decreased significantly， in a dose-dependent manner among curcumin groups （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： Curcumin can improve the level of bone metabolism， increase BMD， improve the trabecular microstructure and inhibit bone absorption in ovariectomized osteoporosis model rats. Its mechanism may be related to the regulation of OPG/RANKL signaling pathway.

KEYWORDS? ?Osteoporosis; Curcumin; Bone metabolism balance; OPG/RANKL signaling pathway; Rats

骨質(zhì)疏松癥（Osteoporosis，OP）是臨床常見疾病，該病的發(fā)生多與骨質(zhì)退變、骨量減少以及骨微結(jié)構(gòu)改變有關(guān)，可降低骨載荷承受力、增加骨脆性，從而引起患者慢性疼痛并且增加骨折風(fēng)險(xiǎn)[1]。因此，臨床評(píng)價(jià)多從患者骨量、骨代謝標(biāo)志物等指標(biāo)入手。有研究發(fā)現(xiàn)，OP的發(fā)生是免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)等多系統(tǒng)共同作用的結(jié)果[2]。近年來有學(xué)者指出，骨保護(hù)素（OPG）/核因子κB受體活化因子配體（RANKL）信號(hào)通路對(duì)破骨細(xì)胞形成、分化和吸收具有重要的調(diào)節(jié)作用[3]。姜黃素可從姜科、天南星科等植物的根莖中分離得到的一種天然活性成分，具有改善骨微結(jié)構(gòu)、促進(jìn)成骨細(xì)胞生成的作用[4-5]。基于此，本研究通過切除雌性大鼠雙側(cè)卵巢的方法建立去勢(shì)OP動(dòng)物模型，并給予姜黃素進(jìn)行干預(yù)，觀察該化合物對(duì)大鼠OPG/RANKL信號(hào)通路以及骨代謝平衡的影響，旨在為姜黃素臨床治療OP提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Benchmark Plus型酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）;Inveon型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微型計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）影像系統(tǒng)（德國(guó)Siemens公司）;DXA型骨密度（BMD）儀（徐州品源醫(yī)療科技有限公司）;Tannon-5200型成像系統(tǒng)（上海天能科技有限公司）;ABI 7300型熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀（美國(guó)ABI公司）;TG-16M型離心機(jī)（上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

姜黃素對(duì)照品（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：F20160703，純度：99.8%）;戊酸雌二醇片（陽性對(duì)照，德國(guó)Bayer公司，批號(hào)：JYHB1901034，規(guī)格：1 mg）;山羊抗兔OPG抗體（批號(hào)：bs-0431R-1）、大鼠源RANKL抗體（批號(hào)：bs-0747R-1）、大鼠源GAPDH抗體（批號(hào)：bs- 00542R-1）均購(gòu)自博奧森（北京）生物技術(shù)有限公司;小鼠抗人β-actin單克隆抗體（美國(guó)Abcam公司，批號(hào)：Ab179696）;辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G二抗（上海長(zhǎng)島生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：D-3004）;ECL顯色試劑盒（批號(hào)：R1600）、RIPA組織/細(xì)胞快速裂解液（批號(hào)：BYL40836）均購(gòu)自基爾頓生物科技（上海）有限公司;骨特異性堿性磷酸酶（BALP）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：E201902）、核心結(jié)合因子α1（CBF-α1）ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：E201906）、Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽（CTX-Ⅰ）ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：E201906）、Ⅰ型前膠原氨基端前肽（PINP）ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：E201905）、骨鈣素（OC）ELISA檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：E201901）均購(gòu)自北京方程生物科技有限公司;PCR擴(kuò)增引物由上海英駿生物技術(shù)有限公司設(shè)計(jì)、合成（引物序列見表1）;RNA抽提試劑盒（批號(hào)：DP419）、BCA蛋白測(cè)定試劑盒（批號(hào)：PICPI23222）、SYBR Green PCR試劑盒（含SYBR Pri mix等試劑，批號(hào)：K0223）均購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（美國(guó)Fermentas公司，批號(hào)：K1622）;上樣緩沖液（中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)：K0223）;0.9%氯化鈉溶液（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20190001;作生理鹽水用）;其余試劑均為分析純或?qū)嶒?yàn)室常用規(guī)格，水為去離子水。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)Wistar大鼠90只，雌性，23周齡，體質(zhì)量（180±20） g，由華中科技大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK（鄂）2016-0009。所有大鼠均適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。本研究試驗(yàn)過程及操作均遵守國(guó)家健康與醫(yī)學(xué)研究委員會(huì)（NHNRC）的動(dòng)物道德準(zhǔn)則，并經(jīng)華中科技大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

2 方法

2.1 分組與造模

將Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組（A組）、模型組（B組）、雌二醇組（C組）和姜黃素低、中、高劑量組（D～F組），每組15只。除A組不作任何處理外，其余各組大鼠均參照文獻(xiàn)去卵巢法[6-7]建立OP模型：腹腔注射戊巴比妥鈉（30 mg/kg）進(jìn)行麻醉后，以俯臥位固定，于大鼠背部脊柱兩側(cè)切口，在無菌條件下摘除其雙側(cè)卵巢，以BMD明顯降低、骨小梁微結(jié)構(gòu)受損嚴(yán)重判定模型復(fù)制成功[8]。

2.2 給藥

手術(shù)3個(gè)月后，A、B組大鼠均灌胃等體積生理鹽水，C組大鼠灌胃戊酸雌二醇[50 μg/（kg·d），以水為溶劑;劑量設(shè)置參考成人等效劑量并按人鼠體型系數(shù)換算而得]，D～F組大鼠均灌胃相應(yīng)姜黃素混懸液[55、110、165 μg/（kg·d），以水為溶劑;劑量設(shè)置參考本課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果]。灌胃體積均為30 mL/kg，每日1次，連續(xù)12周。

2.3 標(biāo)本采集與指標(biāo)檢測(cè)

2.3.1 血清骨代謝標(biāo)志物BALP、CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC含量檢測(cè) 末次給藥后，處死大鼠，于心臟取血2 mL，以3 000 r/min離心10 min，分離血清，采用ELISA法以酶標(biāo)儀檢測(cè)各組大鼠血清中BALP、CBF-? ? α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC的含量，嚴(yán)格按照相應(yīng)試劑盒說明書操作。

2.3.2 BMD及骨小梁微結(jié)構(gòu)參數(shù)檢測(cè) 分離各組大鼠右側(cè)股骨標(biāo)本，使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微型CT影像系統(tǒng)對(duì)遠(yuǎn)端干骺端進(jìn)行掃描（掃描電壓：65 kV，電流：384 mA，分辨率：18 μm）。掃描完成后，選擇感興趣區(qū)域（ROI）行三維重組后提取圖像資料，利用專用骨骼分析軟件Advanced Bone Analysis（ABA）2.0進(jìn)行骨組織計(jì)量學(xué)分析，包括BMD、相對(duì)骨體積分?jǐn)?shù)（BV/TV）、骨小梁數(shù)量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.Th）、連接密度（Conn.D）、骨小梁分離度（Tb.Sp）、結(jié)構(gòu)模型指數(shù)（SMI）。上述所有操作均由同一組研究人員完成。

2.3.3 下丘腦和股骨組織中OPG、RANKL mRNA表達(dá)情況檢測(cè) 采用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法（RT-PCR）檢測(cè)。各組大鼠采血后，取其下丘腦和股骨組織適量，用RNA抽提試劑盒提取組織中總RNA，對(duì)RNA純度、含量進(jìn)行檢測(cè)后使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒獲取cDNA。以上述cDNA為模板，進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)體系（共20 μL）：SYBR Pri mix 10 μL，上、下游引物各1 μL，模板cDNA 2 μL，ddH2O 6 μL;反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性20 s;95 ℃變性10 s，62 ℃退火30 s，70 ℃延伸30 s，共45個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，使用熒光定量PCR儀檢測(cè)，并以2-ΔΔCt法計(jì)算各目標(biāo)mRNA的表達(dá)量（Ct表示每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)熒光信號(hào)強(qiáng)度達(dá)到設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)）。

2.3.4 下丘腦和股骨組織中OPG、RANK蛋白表達(dá)情況檢測(cè) 采用Western blotting法檢測(cè)。取“2.3.3”項(xiàng)下各組大鼠下丘腦和股骨組織適量，加入RIPA裂解液于冰上裂解30 min，采用BCA蛋白測(cè)定試劑盒檢測(cè)蛋白濃度。蛋白經(jīng)變性后，取適量用上樣緩沖液稀釋，行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳后，轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜上，于4 ℃下加入相應(yīng)一抗（稀釋度均為1 ∶ 500），4 ℃孵育過夜;以三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽（TBST）溶液洗滌5 min×3次，加入相應(yīng)二抗（稀釋度均為1 ∶ 500），室溫孵育2 h;以TBST溶液洗滌5 min×3次，以ECL試劑顯色后，于成像系統(tǒng)上成像并使用QuantityOne v4.52軟件進(jìn)行分析。以目標(biāo)蛋白與內(nèi)參蛋白（β-actin）條帶灰度值的比值表示該目標(biāo)蛋白的表達(dá)量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以x±s表示，多組間比較采用F檢驗(yàn)，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠血清骨代謝標(biāo)志物含量比較

與A組比較，B組大鼠血清BALP、CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC含量均顯著降低（P<0.05）。與B組比較，C～F組大鼠血清上述指標(biāo)均顯著升高（P<0.05）;且E組、F組顯著高于D組，F(xiàn)組顯著高于E組（P<0.05），詳見表2。

3.2 各組大鼠BMD及骨小梁微結(jié)構(gòu)參數(shù)比較

與A組比較，B組大鼠BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn.D均顯著降低，Tb.Sp、SMI均顯著升高（P<0.05）。與B組比較，C～F組大鼠BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn.D均顯著升高，且E組、F組上述指標(biāo)均顯著高于D組，F(xiàn)組顯著高于E組;Tb.Sp、SMI均顯著降低，且E組、F組上述指標(biāo)均顯著低于D組，F(xiàn)組顯著低于E組（P<0.05），詳見表3。

3.3 各組大鼠下丘腦和股骨組織中OPG、RANKL mRNA表達(dá)量比較

與A組比較，B組大鼠下丘腦和股骨組織中OPG mRNA的表達(dá)量顯著降低，RANKL mRNA的表達(dá)量顯著升高（P<0.05）。與B組比較，C～F組大鼠下丘腦及股骨組織中OPG mRNA的表達(dá)量均顯著上升，且E組、F組上述指標(biāo)顯著高于D組，F(xiàn)組顯著高于E組;RANKL mRNA的表達(dá)量均顯著降低，且E組、F組上述指標(biāo)均顯著低于D組，F(xiàn)組顯著低于E組（P<0.05），詳見表4。

3.4 各組大鼠下丘腦和股骨組織中OPG、RANKL蛋白表達(dá)量比較

與A組比較，B組大鼠下丘腦和股骨組織中OPG蛋白的表達(dá)量顯著降低，RANKL蛋白的表達(dá)量顯著上升（P<0.05）。與B組比較，C～F組大鼠下丘腦及股骨組織中OPG蛋白的表達(dá)量均顯著升高，且E組、F組顯著高于D組，F(xiàn)組顯著高于E組;RANKL蛋白的表達(dá)量均顯著降低，且E組、F組顯著低于D組，F(xiàn)組顯著低于E組（P<0.05），詳見圖1、表5。

4 討論

OP發(fā)病原因復(fù)雜多變，目前多認(rèn)為其與微循環(huán)障礙、代謝異常、基因多態(tài)性等多種因素有關(guān)[9-10]。隨著人口老齡化加劇，全球OP患者的數(shù)量正在逐年增加，由其導(dǎo)致的骨折風(fēng)險(xiǎn)也越來越高[11]。中醫(yī)學(xué)將OP歸屬于“骨痿”“骨枯”等范疇，辨證論治時(shí)多從腎肝脾等臟腑入手。西醫(yī)治療OP的主要藥物包括雌激素調(diào)節(jié)藥物、骨形成促進(jìn)藥物、骨礦化促進(jìn)藥物等，但長(zhǎng)期使用會(huì)引發(fā)一系列毒副反應(yīng)，如骨脆性增加、骨折易發(fā)等全身骨骼疾病[12]。姜黃素是從姜科、天南星科等植物的根莖中提取的一種多酚類化學(xué)成分，具有抗腫瘤、抗氧化、提高免疫力等多種藥理作用[13]。近期有研究表明，姜黃素對(duì)于修復(fù)細(xì)胞、調(diào)節(jié)骨再造、改善骨質(zhì)量等的效果明顯[14]?；诖?，本研究以戊酸雌二醇為陽性對(duì)照，初步考察了姜黃素對(duì)去勢(shì)OP模型大鼠骨代謝平衡的影響及可能機(jī)制。

CBF-α1由成骨細(xì)胞特異性表達(dá)，是決定成骨細(xì)胞分化的重要因子，在維持骨骼正常生長(zhǎng)發(fā)育中起著重要作用。已有研究證實(shí)，CBF-α1不僅能夠調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化，還能調(diào)控已分化成骨細(xì)胞的發(fā)育和生長(zhǎng)因子的表達(dá)，從而控制骨骼形成和發(fā)育的生理過程[15]。CTX-Ⅰ是骨吸收過程中Ⅰ型膠原釋放入血的產(chǎn)物;PINP為Ⅰ型前膠原細(xì)胞胞外分泌產(chǎn)物，是骨形成的敏感指標(biāo);血液中上述兩種指標(biāo)的含量可反映Ⅰ型膠原合成速率、成骨細(xì)胞活動(dòng)以及骨吸收情況，是診斷OP的特異性指標(biāo)[16-17]。OC是成骨細(xì)胞分泌的一種非膠原蛋白，其含量變化是成骨細(xì)胞活動(dòng)以及骨代謝變化的重要標(biāo)志[18]。由此可見，CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP以及OC含量均能特異性地反映OP骨代謝平衡情況。

OPG/RANKL信號(hào)通路是成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞相互作用機(jī)制中較重要的通路之一，其可有效調(diào)控破骨細(xì)胞生成并控制骨代謝，與OP發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)[19]。下丘腦能通過分泌多種因子調(diào)控破骨細(xì)胞來釋放骨吸收標(biāo)志物，BALP就是其中之一。有研究發(fā)現(xiàn)，BALP可誘導(dǎo)成骨細(xì)胞分泌RANKL，調(diào)控骨吸收[20]。OPG是由成骨細(xì)胞分泌的RANKL誘餌受體，在BALP干預(yù)下可與RANK競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合RANKL，從而誘導(dǎo)破骨細(xì)胞凋亡、抑制骨吸收。有研究證實(shí)，補(bǔ)充外源性O(shè)PG可提高OP患者BMD、增強(qiáng)骨強(qiáng)度、促進(jìn)骨吸收[21]。此外，BMD及骨小梁微結(jié)構(gòu)改變可有助于預(yù)測(cè)OP的發(fā)生與發(fā)展，可為該病的診斷提供重要參考[22]?；诖?，本研究以BMD，骨小梁微結(jié)構(gòu)參數(shù)，血清BALP、CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC含量以及小丘腦/股骨組織中OPG、RANKL蛋白及其mRNA的表達(dá)量為考察指標(biāo)，初步評(píng)價(jià)了姜黃素對(duì)去勢(shì)OP模型大鼠骨代謝平衡的影響。

本研究結(jié)果顯示，在摘除卵巢后，大鼠血清中骨代謝標(biāo)志物BALP、CBF-α1、CTX-Ⅰ、PINP、OC含量以及BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn.D均顯著降低，Tb.Sp和SMI均顯著升高，提示大鼠骨量丟失、骨吸收增加、骨小梁顯微結(jié)構(gòu)受損，與OP病理表現(xiàn)相符，表明模型復(fù)制成功。此外，OP模型大鼠下丘腦和股骨遠(yuǎn)端組織中OPG/RANKL蛋白及其mRNA的表達(dá)量也發(fā)生了明顯的變化，其中OPG表達(dá)下調(diào)、RANKL表達(dá)上調(diào)，提示OP模型大鼠的骨量丟失、骨吸收增加可能與下丘腦和股骨組織中OPG/RANKL通路有關(guān)。經(jīng)姜黃素處理后，各給藥組大鼠血清骨代謝標(biāo)志物含量，BMD、BV/TV、Tb.N、Tb.Th、Conn.D以及OPG蛋白及其mRNA的表達(dá)量均顯著升高，Tb.Sp、SMI以及RANKL蛋白及其mRNA的表達(dá)量均顯著降低，且呈劑量依賴性，提示姜黃素能劑量依賴性地改善大鼠的骨代謝平衡，增加其BMD、抑制骨吸收、改善骨小梁微結(jié)構(gòu)，這與許東亮等[23]、蔣琪等[24]研究結(jié)果一致;同時(shí)，上述作用可能與姜黃素調(diào)控OPG/RANKL信號(hào)通路的表達(dá)有關(guān)。

綜上所述，姜黃素能夠改善去勢(shì)OP模型大鼠骨代謝水平，可增加BMD、抑制骨吸收、改善骨小梁微結(jié)構(gòu)，其機(jī)制可能與調(diào)控OPG/RANKL信號(hào)通路有關(guān)。本課題組后續(xù)將進(jìn)一步增加藥物干預(yù)劑量、擴(kuò)大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物樣本量、延長(zhǎng)藥物干預(yù)時(shí)間，以進(jìn)一步挖掘姜黃素對(duì)去勢(shì)OP模型大鼠骨代謝平衡改善作用的量效關(guān)系。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2020-03-15 修回日期：2020-07-20）

（編輯：張?jiān)拢?/p>