中藥治療慢性腎小球腎炎所涉信號(hào)通路研究進(jìn)展

★ 吳素琪 席藝軒 陳俊 葛海濤*（.中國(guó)藥科大學(xué) 南京 98；.江蘇蘇中藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司 南京 006）

慢性腎小球腎炎簡(jiǎn)稱慢性腎炎（chronic glomerulonephritis，CGN），是一種原發(fā)性腎小球疾病，由多病因引起，多種病理類型組成，且以慢性腎小球病變?yōu)橹?。常見的臨床癥狀有血尿、蛋白尿、高血壓、水腫等，且多數(shù)癥狀隱匿、發(fā)病緩慢。病程較長(zhǎng)者可發(fā)展為不同程度的腎功能減退、腎纖維化，最后導(dǎo)致末期腎衰竭，威脅數(shù)百萬(wàn)患者的生命。

中醫(yī)藥治療CGN有著悠久的歷史，臨床經(jīng)驗(yàn)豐富，值得大力推廣，但由于其作用機(jī)制未明，影響了中藥在該領(lǐng)域的發(fā)展。有研究發(fā)現(xiàn)，相關(guān)信號(hào)通路通過調(diào)節(jié)腫瘤壞死因子TNF-α、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子TGF-β、干擾素INF-γ、白細(xì)胞介素IL-1、IL-6等的含量表達(dá)［1-3］，進(jìn)而調(diào)控CGN發(fā)病以及發(fā)展。本文通過整理中藥治療CGN所涉及的信號(hào)通路及其研究進(jìn)展，為闡明中藥治療CGN的作用機(jī)制提供思路。

1 關(guān)鍵信號(hào)通路

1.1 NF-κB信號(hào)通路 NF-κB（nuclear factor-kappa B）是核轉(zhuǎn)錄因子Rel家族成員之一，其介導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路在免疫炎癥反應(yīng)中具有重要的調(diào)節(jié)作用［4-5］。通常情況下，NF-κB/Rel家族成員首先兩兩結(jié)合形成同源或異源二聚體，然后與抑制性蛋白 IκB（inhibitory protein of NF-κB）結(jié)合成三聚體復(fù)合物，最終以非活性狀態(tài)存在于細(xì)胞質(zhì)中。當(dāng)受到某些胞外信號(hào)刺激時(shí)，IκB激酶（IKK）被激活，使IκB磷酸化進(jìn)而從三聚體中解離出來，導(dǎo)致NF-κB被活化，進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，啟動(dòng)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)IL-6、TNF-α、IL-2、IL-1β、MCP-1 等炎癥因子和介質(zhì)的分泌，導(dǎo)致炎癥發(fā)生［5-6］。因此，通過抑制腎組織NF-κB信號(hào)通路，減少相關(guān)炎性因子的釋放，可能是減輕腎小球炎癥損傷的途徑之一。

雷公藤甲素是雷公藤抗炎的主要活性成分。YingZhou等［7］研究雷公藤甲素治療膜性腎小球腎炎小鼠的作用機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，雷公藤 甲 素 組 中 NF-κB p65、IκBα、TNF-α、IL-1β、MCP-1表達(dá)均顯著下降，提示雷公藤甲素可能通過抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，減少炎性因子的分泌，從而緩解膜性腎小球腎炎的炎癥反應(yīng)。益腎清利顆粒處方由黃芪、山茱萸、杜仲、白術(shù)、澤瀉、石韋、白花蛇舌草等中藥組成。研究表明，益腎清利顆?？梢越档完?yáng)離子化牛血清白蛋白誘導(dǎo)的CGN大鼠的24h尿蛋白及血清肌酐含量，升高血清白蛋白量，改善膽固醇升高趨勢(shì)。其作用機(jī)制可能是抑制NF-κB信號(hào)通路，從而下調(diào)血清IL-6、TNF-α表達(dá)水平，達(dá)到減輕腎小球炎癥損傷的目的［8］。CGN常伴有腎小球系膜細(xì)胞增生，王強(qiáng)［9］研究升降散對(duì)系膜增生大鼠的治療機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，升降散能明顯降低系膜增生大鼠腎組織中TLR4、NF-κB的表達(dá)。提示，升降散可能通過下調(diào)TLR4的水平，進(jìn)而抑制NF-κB信號(hào)通路的激活，從而減少相應(yīng)炎癥因子的釋放，達(dá)到抑制系膜細(xì)胞增殖的作用。此外，參地顆粒［10］、益腎寧配方顆粒［11］等也可通過調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路緩解CGN癥狀。

1.2 Wnt信號(hào)通路 Wnt信號(hào)通路參與了許多重要的生物進(jìn)程，包括動(dòng)物胚胎的生長(zhǎng)發(fā)育、器官形成、細(xì)胞的增殖、分化、遷移、凋亡等，分為經(jīng)典Wnt信號(hào)通路（Wnt/β-catenin）和非經(jīng)典Wnt信號(hào)通路（Wnt/Ca2+、Wnt/JNK）［12-13］。研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)典Wnt信號(hào)通路與CGN的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。病理狀態(tài)下，Wnt信號(hào)通路被激活，Wnt蛋白與FZD/LRP受體結(jié)合，激活細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的DVL蛋白，抑制了與Axin、APC、GSK-3、CK-1等蛋白形成的β-catenin復(fù)合物的降解活性，使β-catenin蛋白在細(xì)胞內(nèi)堆積，游離的β-catenin進(jìn)入細(xì)胞核中與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF結(jié)合，激活下游相關(guān)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄［14-15］。

益氣清熱膏由生黃芪、白術(shù)、穿山龍、白花蛇舌草、防風(fēng)、金銀花等組成。孫雪艷［16］發(fā)現(xiàn)益氣清熱膏對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的CGN大鼠腎小球系膜細(xì)胞的增殖有抑制作用，可明顯降低β-catenin、Wnt4和TGF-β1蛋白的表達(dá)水平。表明益氣清熱膏通過抑制CGN大鼠中Wnt信號(hào)通路，減少β-catenin的堆積，進(jìn)而抑制腎小球系膜細(xì)胞的增殖。一半湯由大青葉、玄參、浮海石、地膚子、敗醬草、天冬、甘草、半枝蓮、益母草、蒲公英、黃芪、西洋參、菊花組成。劉益源［17］研究一半湯對(duì)牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖誘導(dǎo)的IgA大鼠腎組織的影響，發(fā)現(xiàn)一半湯可減少大鼠血尿、蛋白尿等癥狀，其機(jī)制可能是下調(diào)Wnt4、Wnt5a、β-catenin蛋白表達(dá)，抑制Wnt信號(hào)通路的過度激活，從而治療慢性腎炎。

1.3 MAPK信號(hào)通路 由絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是真核細(xì)胞最廣泛的調(diào)控機(jī)制之一，在CGN發(fā)病機(jī)制中占有重要地位。目前，已發(fā)現(xiàn)ERK1/2、JNKs、P38、ERK7/8、ERK3/4、ERK5 6種MAPK信號(hào)通路，其中，以ERK1/2、JNKs、P38三條級(jí)聯(lián)反應(yīng)研究最多。當(dāng)受到細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、炎癥介質(zhì)、射線等刺激時(shí)，MAPK激酶激酶（MKKKs/MAP3Ks/MEKKs）、MAPK激 酶（MKKs/MAP2Ks/MEKs）、MAPK（ERK/JNK/ P38）逐級(jí)磷酸化，激活轉(zhuǎn)錄因子c-fos、c-Jun、c-myc等，增強(qiáng)AP-1的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而調(diào)控INF-γ、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8等炎癥因子的表達(dá)，導(dǎo)致炎癥的發(fā)生［18-19］。

Tu等［20］使用黃葵膠囊（0.5、2 g/kg/d）治療阿霉素誘導(dǎo)的小鼠慢性腎病時(shí)發(fā)現(xiàn)，小鼠的精神狀態(tài)、腎形態(tài)外觀、蛋白尿、白蛋白含量、腎硬化得到明顯改善，另外，黃葵膠囊高劑量組還能減少巨噬細(xì)胞（ED1+、ED3+）的浸潤(rùn)，降低腎組織 TNF-α、IL-2含 量 和 TGF-β1、p38MAPK、pp38MAPK的表達(dá)，提示黃葵膠囊改善腎臟炎癥和腎小球損傷的作用機(jī)制可能是通過抑制p38MAPK信號(hào)通路，減少促炎因子TNF-α、IL-2的釋放，從而減輕腎小球炎癥損傷。王朝?。?1］研究腎炎康復(fù)片（由西洋參、人參、生地黃、杜仲、、山藥、白花蛇舌草、黑豆、土茯苓、益母草、丹參、澤瀉、白茅根、桔梗組成）對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的腎病大鼠模型腎組織炎癥損傷的分子機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，腎炎康復(fù)片可減少大鼠腎小球內(nèi)巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)，下調(diào)TGF-β1、pp38MAPK蛋白的表達(dá)，抑制p38MAPK信號(hào)通路的異常激活，發(fā)揮抗炎作用。

1.4 Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路 Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路不僅參與了自身免疫、免疫反應(yīng)和免疫球蛋白的產(chǎn)生，還與B細(xì)胞功能密切相關(guān)。B細(xì)胞是體液免疫過程中的重要免疫細(xì)胞，脾絡(luò)氨酸激酶（Spleen tyrosine kinase，Syk）是B細(xì)胞受體（BCR）信號(hào)傳導(dǎo)的關(guān)鍵介質(zhì)，而BCR信號(hào)通路對(duì)CGN炎癥的發(fā)生具有重要影響。Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路能促進(jìn)活化蛋白-1（AP-1）的形成，對(duì)TNF-α、IL-2、IL-6、IL-8等細(xì)胞因子的表達(dá)具有重要調(diào)控作用，最后導(dǎo)致CGN炎癥的發(fā)生［22］。

宋俊梅［23］將10只未造模大鼠作為正常對(duì)照組，50只阿霉素誘導(dǎo)的CGN大鼠模型隨機(jī)分為模型組、芪藤消濁顆粒不同劑量組（5.4、10.8、21.6 g/kg）、黃葵膠囊組（1.0 g/kg）。其中，芪藤消濁顆粒組、黃葵膠囊組給予相應(yīng)劑量的藥物，模型組和正常對(duì)照組給予等量溶媒，每天一次，連續(xù)30天后，測(cè)定大鼠24 h尿蛋白、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）以及血清中尿素氮、肌酐、胱抑素、視黃醇結(jié)合蛋白的含量，發(fā)現(xiàn)芪藤消濁顆粒中、高劑量組均可顯著降低以上因子的含量。通過檢測(cè)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2和 c-Fos mRNA及相應(yīng)蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)芪藤消濁顆粒的作用機(jī)制可能是抑制上述mRNA及相應(yīng)蛋白的表達(dá)量，影響下游信號(hào)因子的表達(dá)，從而抑制Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路，進(jìn)而起到治療慢性腎炎的作用。

2 其他信號(hào)通路

2.1 AGEs/RAGE/NF-κB信號(hào)通路 晚期糖基化終末產(chǎn)物（advanced glycation end products，AGEs）與晚期糖基化終末產(chǎn)物受體（receptor for advanced glycation end products， RAGE）結(jié)合，促進(jìn)了 NF-κB的核轉(zhuǎn)錄，從而提高TNF-α、IL-1β、IL-6等促炎因子的表達(dá)，最終導(dǎo)致炎癥的發(fā)生［24］。真武湯出自《傷寒論》，由茯苓、芍藥、生姜、附子、白術(shù)組成。Wu等［25］研究發(fā)現(xiàn)真武湯可抑制由陽(yáng)離子化牛血清白蛋白誘導(dǎo)的膜性腎小球腎炎大鼠腎組織中ACGs、RAGE1、NF-κB p65的表達(dá)，其作用機(jī)制是通過抑制ACGs/RAGE/NF-κB信號(hào)通路的激活，降低血清中炎癥介質(zhì)TNF-α、IL-1β和IL-6的水平，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)腎臟的作用，治療膜性腎小球腎炎。

2.2 P13K/AKT信號(hào)通路 磷脂酰肌醇3-激酶/ 蛋白激酶B（P13K/AKT）信號(hào)通路與細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和炎癥的發(fā)生密切相關(guān)。白芍總苷（TGP）是毛茛科植物白芍干燥根中的主要活性成分，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抗炎的作用。研究表明，白芍總苷可通過P13K/AKT途徑抑制系膜增生性腎炎大鼠血清中IL-1α、IL-2、IL-10、INF-γ的水平，從而抑制腎系膜細(xì)胞的過度增殖，改善腎臟炎癥損傷［26］。

3 結(jié)語(yǔ)

慢性腎小球腎炎具有起病隱匿、病程長(zhǎng)、復(fù)發(fā)率高、難治愈等特點(diǎn)，另外，其起病原因、作用機(jī)制尚未明確，增加了治療的難度。中藥治療著眼于整體調(diào)控，有效成分多樣，相互協(xié)調(diào)，具有多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)。中藥治療慢性腎炎涉及的信號(hào)通路有NF-κB信號(hào)通路、Wnt信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路、Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路等，不同信號(hào)通路之間存在相互作用。同時(shí)，一種中藥可調(diào)控多條信號(hào)通路，如雷公藤可抑制NF-κB和MAPK信號(hào)通路，黃葵膠囊可抑制P38MAPK/AKT和P38MAPK信號(hào)通路。中藥通過調(diào)控不同信號(hào)通路，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的表達(dá)，進(jìn)而達(dá)到緩解腎組織炎癥、恢復(fù)腎小球功能的作用，見表1。因此，通過信號(hào)通路研究中藥治療CGN的作用機(jī)制，可為CGN的治療提供新的思路，促進(jìn)中藥在慢性腎小球腎炎方面的應(yīng)用。

表1 治療慢性腎小球腎炎的相關(guān)中藥