理氣暖胃顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究*

★ 楊晗 孫嘉文 李勝華 胡浩武 高羽 沈麗琴 周青罡*（江西匯仁藥業(yè)股份有限公司 南昌 330052）

理氣暖胃顆粒（原名：氣滯胃炎顆粒）［國藥準(zhǔn)字Z20110034］為江西匯仁藥業(yè)股份有限公司獨(dú)家研制的新藥品種。該方系南昌市草藥科研所副所長孟靈源根據(jù)《景岳全書》柴胡疏散加減而成［1］，由柴胡、白芍、甘草、高良姜、香附、枳殼、旋復(fù)花、郁金、元胡等9味中藥材組成。功能主治為疏肝理氣，溫胃止痛。適用于肝胃不和挾寒型慢性淺表性胃炎，主治胃脘脹痛或痛竄兩脅，且喜溫喜按，噯氣頻作，嘈雜泛酸，或口泛清涎，舌質(zhì)淡紅，苔薄白或白厚，脈弦。或遇惱怒復(fù)發(fā)或加重，或納呆少食，或腹脹。經(jīng)臨床試驗(yàn)表明本品應(yīng)用安全、療效確切［2］、質(zhì)量穩(wěn)定。為了有效控制本品制劑的內(nèi)在質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，分別采用了薄層色譜法（TLC）及高效液相色譜法（HPLC）開展實(shí)驗(yàn)，對本品中的白芍、延胡索、枳殼進(jìn)行定性鑒別，對芍藥苷進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100高效液相色譜儀；Lambda 25紫外可見分光光度儀（PerkinElmer公司）；AB204-S型電子天平（梅特勒—托利多公司）；AG-135型電子天平（梅特勒—托利多公司）。

1.2 試藥 理氣暖胃顆粒（自制，批號：20030501、20030502、20030503）；芍藥苷對照品（購自于中國藥品生物制品檢定所，批號：110737-200312），橙皮甙對照品（購自于中國藥品生物制品檢定所）；延胡索對照藥材（購自于中國藥品生物制品檢定所，批號：928-9001）；所用乙腈為色譜純規(guī)格，其余試劑均為分析純規(guī)格。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

2.1.1 白芍薄層色譜鑒別 取本品顆粒20 g，研細(xì)，加乙醇30 mL后，振搖5 min，濾過。濾液置已處理好的中性氧化鋁固相萃取柱（中性氧化鋁5g，柱子內(nèi)徑約1.5 cm，用乙醇30 mL進(jìn)行預(yù)洗），采用乙醇30 mL進(jìn)行洗脫，收集洗脫液后，蒸干，殘?jiān)尤胍掖? mL，使之溶解，作為供試品溶液。取白芍對照藥材2 g，加水50 mL煎煮30 min，濾過，蒸干，加乙醇5 mL振搖，取上清液從置已處理好的中性氧化鋁固相萃取柱，同法制成對照藥材溶液。另取芍藥苷對照品，加入乙醇，制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。參照薄層色譜法（中國藥典2005版一部附錄ⅥB）進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-甲酸（45∶5∶10∶0.7）為展開劑，展開，取出，晾干，然后噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱使其顯色，至斑點(diǎn)清晰。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同的顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1。

圖1 白芍TLC鑒別圖

2.1.2 枳殼薄層色譜鑒別 取本品20 g研細(xì)，加甲醇25 mL，超聲波處理30 min，濾過，濾液與1 g聚酰胺（14～30目）混勻，再使溶劑揮發(fā)去盡使呈松散狀，加在已制備好的聚酰胺柱上（3 g，內(nèi)徑1.5 cm，干法裝柱），用水洗脫至近無色，5%乙醇30 mL洗脫。再加20%乙醇進(jìn)行洗脫，并收集洗脫液40 mL，蒸干，再加入甲醇1 mL，使之溶解，作為供試品溶液。取枳殼對照藥材1 g，加水50 mL煎煮30 min，濾過，蒸干，加入5 mL甲醇溶解，取上清液，與上述濾液同法制成對照藥材溶液。另取橙皮甙對照品，加入甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005版一部附錄ⅥB）進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各5 μL，分別點(diǎn)樣于同一0.5%氫氧化鈉硅膠G板上，以醋酸乙酯-甲醇-水（100∶17∶13）為展開劑，展至約4 cm，取出，晾干；再以甲苯-醋酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1）的上層溶液作為展開劑，展開至約10 cm，取出，晾干，再噴以三氯化鋁試液，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖2。

圖2 枳殼TLC鑒別圖

2.1.3 延胡索薄層色譜鑒別 取本品20 g，研細(xì)，加甲醇30 mL，超聲波處理20 min，濾過，濾液蒸干，加1%鹽酸2 mL使溶解，濾過，濾液加濃氨試液調(diào)至堿性，用氯仿振搖提取3次，每次10 mL，然后合并氯仿液，蒸干，所得殘?jiān)勇确? mL，使之溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材lg，同法，制成溶液，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2005版一部附錄ⅥB）開展試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各10 μL，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板上，以正已烷-氯仿-甲醇（10∶6∶1）作為展開劑，置于以展開劑預(yù)飽和過的層析缸內(nèi)，展開，取出，晾干，后噴以碘化鉍鉀試液，放置片刻。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)果見圖3。

圖3 延胡索TLC鑒別圖

2.2 芍藥苷的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜條件：色譜柱為YMC-AQ C18（6.0×150 mm）；0.1%磷酸水溶液－乙腈（87∶13）為流動(dòng)相；檢測波長為230 nm，理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算，應(yīng)不低于4 000。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對照品適量，加入甲醇，制成每1 mL含46 μg的溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 取本品顆粒適量，研細(xì)，稱取0.5 g，精密稱定，置于50 mL量瓶中，加入稀乙醇45 mL，超聲提取30 min，取出，放至室溫，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別取對照品溶液、供試品溶液以及陰性對照溶液， 按上述色譜條件測定。結(jié)果供試品芍藥苷主峰與樣品中其他組分色譜峰達(dá)到基線分離，見圖4。

圖4 理氣暖胃顆粒中芍藥苷的HPLC圖

2.2.5 方法學(xué)考察

2.2.5.1 線性關(guān)系考察 精密稱取對照品適量制成含量為206.80 μg/mL的對照品母液，分別精密吸取適量，稀釋成含量為8.272、20.68、41.36、82.72 μg/mL的對照品溶液，分別吸取上述對照品溶液及母液10 μL，注入液相色譜儀，進(jìn)行測定。以質(zhì)量濃度（μg/mL）作為橫坐標(biāo)，以色譜峰峰面積作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，為Y=11.34166X-13.28180（r=0.9999），表明芍藥苷濃度在8.272～206.8 μg/mL的范圍內(nèi)，呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.2.5.2 精密度試驗(yàn) 吸取芍藥苷對照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，采用HPLC法進(jìn)行測定，結(jié)果芍藥苷峰面積的RSD為0.32%，表明所用儀器的精密度較好。

2.2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批樣品（批號：20030501），按供試品溶液制備方法制備后，分別在0、4、8、12、24 h測定，記錄峰面積，結(jié)果其RSD為1.9%，表明供試品在16 h之內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一樣品（批號：20030501）6份，按照供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，采用高效液相色譜法進(jìn)行測定，記錄芍藥苷峰面積，結(jié)果該批樣品的芍藥苷平均含量為4.55 mg/g，RSD為0.32%，表明本試驗(yàn)的方法重復(fù)性較好。

2.2.5.5 回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法進(jìn)行試驗(yàn)，精密稱取已知含量的同一批號樣品（批號：20030501）6份，分別精密加入芍藥苷對照品溶液，配制成同一濃度的6份，按供試品溶液的制備方法制備后，進(jìn)行高效液相色譜測定，結(jié)果見表1。結(jié)果顯示平均加樣回收率為100.1%，RSD%為0.2%，表明本方法回收率較好。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.5.6 樣品含量測定 精密稱取3批樣品，每批各0.5g，按上述方法進(jìn)行測定，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品含量測定 mg/袋

3 討論

本品方中共9味藥，藥材的成分復(fù)雜，有芍藥苷、生物堿、黃酮類化合物、萜類化合物、姜黃素、橙皮甙、柚皮甙、柴胡皂甙、旋復(fù)花內(nèi)酯、槲皮素等，部分藥材還含有揮發(fā)油。通過摸索了多種前處理及薄層色譜的條件，再結(jié)合其藥味的藥理作用，從中選取了白芍、延胡索、枳殼三種藥味作為鑒別項(xiàng)。白芍作為方中臣藥，入肝、脾、肺三經(jīng)，養(yǎng)血柔肝，緩急止痛；延胡索入心包、肝、脾、肺經(jīng)，能夠活血理氣止痛；枳殼入脾、胃二經(jīng)，疏利氣機(jī)。所選取的藥味在功效上的作用顯著，且具有明顯的特征，薄層色譜的展開及顯色效果較好，重復(fù)性好，穩(wěn)定性好，能夠有效的進(jìn)行本品的質(zhì)量控制。

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白芍中所含的有效成分白芍總苷，具有明顯的抗炎作用、鎮(zhèn)痛作用、保肝作用［3］，與本品的功能主治針對肝胃不和挾寒型慢性淺表性胃炎具有極強(qiáng)的相關(guān)性。白芍作為方中臣藥，又作為用量最大的藥味之一，故選取其所含的芍藥苷作為指標(biāo)化學(xué)成分，進(jìn)行含量測定。根據(jù)選取指標(biāo)化學(xué)成分芍藥苷的性質(zhì)，在供試品提取溶媒選擇上，本實(shí)驗(yàn)在參考了2005版《中國藥典》中白芍“含量測定”項(xiàng)下供試品溶液制備方法基礎(chǔ)上［4］，又比較了不同溶劑的超聲提?。状?、無水乙醇、稀乙醇），結(jié)果發(fā)現(xiàn)稀乙醇的提取效果好。確定采用高效液相色譜法進(jìn)行檢測，經(jīng)過方法學(xué)驗(yàn)證，該方法操作便捷，準(zhǔn)確度高，穩(wěn)定性好。采用該法對三批樣品中的芍藥苷進(jìn)行含量測定，結(jié)果表明其含量差異不大，表明了本制劑質(zhì)量穩(wěn)定可控。本研究所建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)方法，準(zhǔn)確可靠、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好，能夠用于理氣暖胃顆粒的質(zhì)量控制。