術(shù)前MRI影像學(xué)檢查與乳腺癌KI-67表達(dá)的相關(guān)性

1.漢中三二〇一醫(yī)院影像科(陜西 漢中 723000)2.漢中三二〇一醫(yī)院普外科(陜西 漢中 723000)

許 華1 陳士新1 付 偉1劉 海1 楊曉曄2 豆發(fā)福2

乳腺癌是一種高發(fā)性的惡性腫瘤，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)且居女性惡性腫瘤的第一位[1-2]。WHO研究報(bào)告指出每年約120萬(wàn)人確診乳腺癌，約50萬(wàn)人死于乳腺癌[3]。目前醫(yī)院主要通過(guò)活檢穿刺進(jìn)行病理檢查以確診，但活檢穿刺屬于侵入式操作，無(wú)法多次活檢對(duì)腫瘤內(nèi)部異質(zhì)性進(jìn)行描述[4]。隨著醫(yī)學(xué)影像學(xué)技術(shù)不斷發(fā)展，動(dòng)態(tài)增強(qiáng)磁共振成像(Dynamic Contrast-Enhanced Magnetic Resonance Imaging，DCEMRI)掃描技術(shù)因其軟組織高分辨率和動(dòng)力學(xué)信息豐富被廣泛應(yīng)用于臨床，對(duì)指導(dǎo)乳腺癌診斷及治療具有十分重要的意義[5]。KI-67是與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的細(xì)胞核抗原，檢測(cè)其在腫瘤組織中的表達(dá)水平有助于了解腫瘤細(xì)胞增殖活性，目前已成為乳腺癌診斷治療和預(yù)后評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一[6]。但目前DCE-MRI相關(guān)參數(shù)與KI-67表達(dá)的關(guān)系及DCE-MRI檢查對(duì)乳腺癌患者KI-67表達(dá)狀態(tài)預(yù)測(cè)價(jià)值的研究較少。因此本研究通過(guò)檢測(cè)乳腺癌患者和乳腺良性腫瘤患者DCE-MRI相關(guān)參數(shù)及KI-67表達(dá)水平，探討DCE-MRI相關(guān)參數(shù)與KI-67表達(dá)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選擇2016年5月至2019年5月我院收治的82例乳腺癌患者為研究組，年齡22～55歲，平均年齡(38.22±5.72)歲。另選同期我院收治的50例乳腺良性腫瘤患者為對(duì)照組，年齡21～57歲，平均年齡(39.41±5.02)歲。兩組一般資料無(wú)顯著差異(P＞0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①乳腺癌診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范》(2017年版)中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]；②無(wú)嚴(yán)重感染性疾??；③無(wú)嚴(yán)重精神疾病；④所有研究對(duì)象簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②合并傳染性疾??；③凝血功能異常；④心肝腎功能不全。

1.2 檢測(cè)方法(1)兩組患者DCE-MRI相關(guān)參數(shù)檢測(cè)：使用GE Signa HDxt 3.0 T磁共振儀進(jìn)行掃描，梯度場(chǎng)強(qiáng)87mT.m-1，最大切換率260T.m-1.s-1。掃描時(shí)序列為平掃T1-spair，使用高壓注射器以2ml.s-1速度注入對(duì)比劑歐乃影，濃度0.5mmol.L-1，劑量0.1mmol.kg-1，20s后連續(xù)掃描5次。DCEMRI參數(shù)包括：SImax、Tpeak、EER、Slope、NTV、ADC。由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的診斷醫(yī)師共同閱片。

(2)兩組患者病變組織中KI-67表達(dá)水平檢測(cè)：采用免疫組化染色法，操作如下：用福爾馬林固定液對(duì)兩組術(shù)中收集的病變組織進(jìn)行固定，脫水，石蠟包埋成塊，采用QP1600組織切片機(jī)將組織切成4μm連續(xù)切片，依次脫蠟、水化、過(guò)氧化物酶阻斷、抗原修復(fù)、PBS漂洗，滴加經(jīng)1:400稀釋的一抗KI-67抗體，4℃孵育過(guò)夜，PBS溶液漂洗，再滴加經(jīng)1:1000稀釋的羊抗鼠IgG，25℃孵育15分鐘，PBS漂洗，經(jīng)顯色、復(fù)染、封片，由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)生在雙盲情況下使用顯微鏡觀察陽(yáng)性細(xì)胞率和著色程度。參照李衛(wèi)東等人[6]研究中的免疫組化評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)以陽(yáng)性細(xì)胞率與著色程度評(píng)分之積作為最終得分，最終得分0～3分判定為陰性，最終得分＞3分判定為陽(yáng)性。

1.3 評(píng)價(jià)項(xiàng)目①兩組患者病變組織中KI-67表達(dá)水平；②兩組患者DCE-MRI相關(guān)參數(shù)；③82例乳腺癌患者不同DCE-MRI形態(tài)學(xué)征象之間KI-67表達(dá)的差異；④乳腺癌患者DCE-MRI參數(shù)與KI-67的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法本研究數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析在spss22.0軟件上進(jìn)行，采用t檢驗(yàn)比較兩組年齡、SImax、Tpeak、EER、Slope、NTV、ADC，采用χ2檢驗(yàn)比較兩組KI-67表達(dá)水平及不同DCE-MRI形態(tài)學(xué)征象之間KI-67表達(dá)差異，采用Spearman相關(guān)分析乳腺癌患者DCE-MRI參數(shù)與KI-67的相關(guān)性。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者病變組織中KI-67表達(dá)水平KI-67定位于細(xì)胞核，呈棕黃色或棕褐色顆粒(圖1)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：KI-67在研究組和對(duì)照組的陽(yáng)表達(dá)率分別為67.07%(55/82)、10.00%(5/50)，研究組KI-67陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)(表1)。

表1 兩組患者病變組織中KI-67表達(dá)水平(例)

2.2 兩組患者DCE-MRI相關(guān)參數(shù)比較研究組SImax、Tpeak、ADC顯著低于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；研究組EER、Slope、NTV顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表2)。

表2 兩組患者DCE-MRI相關(guān)參數(shù)比較(±s)

表2 兩組患者DCE-MRI相關(guān)參數(shù)比較(±s)

組別 n EER(%) Slope(%) SImax Tpeak NTV ADC對(duì)照組 5096.15±12.3065.38±9.21751.03±79.474.80±0.790.81±0.421.45±0.27研究組 82139.45±15.4876.42±11.34618.43±84.172.88±0.372.33±0.490.83±0.12 t / 16.800 5.811 8.965 14.91218.224 14.393 P / ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001

2.382例乳腺癌患者不同DCE-MRI形態(tài)學(xué)征象之間KI-67表達(dá)的差異DCE-MRI顯示腫瘤直徑、腫瘤邊界不同的乳腺癌患者病變組織中KI-67表達(dá)水平無(wú)顯著差異(P＞0.05)；DCE-MRI顯示腫瘤內(nèi)部壞死情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不同的乳腺癌患者病變組織中KI-67表達(dá)水平差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)(表3)。

表3 82例乳腺癌患者不同DCE-MRI形態(tài)學(xué)征象之間KI-67表達(dá)的差異(例)

2.4 乳腺癌患者DCE-MRI參數(shù)與KI-67的相關(guān)性乳腺癌患者Slope、SImax與KI-67無(wú)相關(guān)性(P＞0.05)；乳腺癌患者EER、NTV與KI-67呈正相關(guān)(P＜0.05)；乳腺癌患者Tpeak、ADC與KI-67呈負(fù)相關(guān)(P＜0.05)(表4)。

表4 乳腺癌患者DCE-MRI參數(shù)與KI-67的相關(guān)性

圖1-2 兩組患者病變組織中KI-67表達(dá)水平(×400)。圖1 為KI-67在研究組的陽(yáng)性表達(dá)；圖2 為KI-67在對(duì)照組的陰性表達(dá)。

3 討 論

乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，乳腺上皮細(xì)胞在亞硝胺、砷化物、焦油等致癌因子作用下發(fā)生基因突變，導(dǎo)致細(xì)胞之間連接松散，癌細(xì)胞脫落至淋巴液或血液中形成肺、骨、腦等遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，直接危及患者生命[7]。目前臨床多采用病理活檢穿刺進(jìn)行確診，但由于對(duì)腫瘤不同區(qū)域取樣其診斷結(jié)果可能不同，故易給乳腺癌的診療帶來(lái)誤判[8]。因此尋找有效的乳腺癌篩查方法具有重要的臨床指導(dǎo)意義。

DCE-MRI是一種將血流動(dòng)力學(xué)與形態(tài)學(xué)改變檢查有效結(jié)合的方法，具有極好的軟組織分辨率和無(wú)輻射特點(diǎn)，可彌補(bǔ)乳腺X線和超聲檢查的局限性，其在應(yīng)用過(guò)程中可擴(kuò)大乳腺癌細(xì)胞外間隙，增加腫瘤血管對(duì)大分子對(duì)比劑通透性，更為清晰地暴露病變區(qū)，因此DCE-MRI可從形態(tài)學(xué)及血流動(dòng)力學(xué)方面探索癌灶內(nèi)部生物學(xué)特征，為臨床診斷乳腺癌提供豐富的立體影像信息[9-11]。本研究結(jié)果顯示研究組SImax、Tpeak、ADC顯著低于對(duì)照組，研究組EER、Slope、NTV顯著高于對(duì)照組，提示乳腺癌患者乳腺形態(tài)學(xué)及血流動(dòng)力學(xué)方面異常。其原因可能是由于乳腺癌細(xì)胞增殖快，新生血管無(wú)法滿足腫瘤快速生長(zhǎng)時(shí)所需氧氣及能量供應(yīng)，因而乳腺癌患者DCE-MRI掃描檢查的NTV、EER顯著高于乳腺良性腫瘤患者[12]。又因惡性腫瘤血供豐富，存在大量動(dòng)靜脈吻合，對(duì)比劑無(wú)法持續(xù)充盈，因而乳腺癌患者SImax、Tpeak、ADC顯著低于乳腺良性腫瘤患者[13]。KI-67是具有結(jié)合特性的重要結(jié)構(gòu)蛋白，在有絲分裂中可維持DNA規(guī)則結(jié)構(gòu)；同時(shí)KI-67也是與細(xì)胞增殖密切相關(guān)的細(xì)胞核抗原，在細(xì)胞增殖中扮演重要角色，其表達(dá)水平可一定程度反映腫瘤細(xì)胞增殖水平，而增殖活躍的腫瘤更易侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移[14]。本研究結(jié)果顯示研究組KI-67陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于對(duì)照組，這與陳進(jìn)等人[15]研究結(jié)果一致，提示KI-67在乳腺癌患者中處于高表達(dá)狀態(tài)。進(jìn)一步分析乳腺癌患者不同DCE-MRI形態(tài)學(xué)征象之間KI-67表達(dá)差異，發(fā)現(xiàn)DCE-MRI顯示腫瘤內(nèi)部壞死情況、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不同的乳腺癌患者病變組織中KI-67表達(dá)水平差異顯著，提示DCE-MRI影像學(xué)特征中腫瘤內(nèi)部壞死及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移對(duì)判斷腫瘤細(xì)胞增殖活性具有重要指導(dǎo)意義。Spearman相關(guān)分析顯示乳腺癌患者EER、NTV與KI-67呈正相關(guān)，乳腺癌患者Tpeak、ADC與KI-67呈負(fù)相關(guān)，提示乳腺癌患者DCE-MRI掃描各參數(shù)與KI-67表達(dá)水平密切相關(guān)。由于KI-67檢測(cè)對(duì)于患者有一定的創(chuàng)傷，且在乳腺癌術(shù)前、非手術(shù)治療或無(wú)條件做免疫組織化學(xué)染色時(shí)應(yīng)用往往受限，因此在KI-67檢測(cè)無(wú)法進(jìn)行時(shí)DCE-MRI掃描可能為臨床乳腺癌內(nèi)分泌治療和預(yù)后判斷提供一定參考依據(jù)。

綜上所述，KI-67在乳腺癌患者中處于高表達(dá)狀態(tài)，乳腺癌患者DCE-MRI掃描各參數(shù)與KI-67表達(dá)水平密切相關(guān)。但本研究樣本較少，有待擴(kuò)大樣本數(shù)深入研究。