骨保護素/核因子κB受體活化因子配體影響肺癌細胞下頜骨與股骨轉(zhuǎn)移差異的初步研究

付世錦 曾刊 李鑫 楊靜 汪成林 葉玲

口腔疾病研究國家重點實驗室 國家口腔疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心

四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院牙體牙髓病科 成都 610041

頜骨溶骨性病變是口腔診療過程中常見的疾病表現(xiàn)形式，如慢性根尖周炎、頜骨骨髓炎、頜骨腫瘤等。在臨床診療工作中可以發(fā)現(xiàn)，頜骨原發(fā)性腫瘤類型多樣，而頜骨轉(zhuǎn)移性腫瘤卻相對少見。一旦發(fā)生頜骨轉(zhuǎn)移性腫瘤，往往意味著原發(fā)灶的播散或復(fù)發(fā)，預(yù)后較差，多數(shù)患者在確診后數(shù)月死亡[1]。在頜骨轉(zhuǎn)移性腫瘤中，又以下頜骨的后牙區(qū)及下頜升支區(qū)常見[2]，如何正確鑒別診斷腫瘤骨轉(zhuǎn)移導(dǎo)致的下頜骨溶骨性改變，避免誤診及延誤病情，對于口腔醫(yī)生非常重要。

易發(fā)生骨組織轉(zhuǎn)移的惡性腫瘤主要包括肺癌、乳腺癌及前列腺癌等[3]。其中，肺癌是全球范圍內(nèi)發(fā)病率（11.6%）和死亡率（18.4%）最高的惡性腫瘤[4]，且尸檢結(jié)果顯示高達50%的肺癌死者伴有骨轉(zhuǎn)移[5]。肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移的特征之一是呈現(xiàn)明顯的部位特異性差異。有報道顯示，脊柱、股骨、肋骨和胸骨的骨轉(zhuǎn)移發(fā)生率分別為50%、25%、12%[6]，而下頜骨鮮少發(fā)生骨轉(zhuǎn)移[7]。此外，家族性巨頜癥[8]、甲狀旁腺頜骨腫瘤綜合征[9]及雙膦酸鹽相關(guān)性頜骨壞死[10]等骨組織疾病僅見報道于頜骨而未見于其他骨組織，提示局部骨組織微環(huán)境可能參與調(diào)控部位特異性骨疾病的發(fā)生、發(fā)展。

腫瘤骨轉(zhuǎn)移引起骨破壞的實質(zhì)是腫瘤細胞入侵局部骨微環(huán)境并破壞其穩(wěn)態(tài)[11]。在正常狀態(tài)下，骨組織中骨形成和骨吸收之間存在動態(tài)平衡；在發(fā)生腫瘤細胞骨轉(zhuǎn)移時，腫瘤細胞的入侵破壞了局部骨穩(wěn)態(tài)，從而引起骨破壞。腫瘤細胞骨轉(zhuǎn)移的過程受到諸多因素影響，除循環(huán)系統(tǒng)分布差異外[12]，局部骨微環(huán)境至關(guān)重要?；谀[瘤細胞轉(zhuǎn)移經(jīng)典的“種子土壤學(xué)說”[13]，在骨轉(zhuǎn)移過程中轉(zhuǎn)移瘤細胞與骨微環(huán)境相互作用，形成“惡性循環(huán)”，從而引起腫瘤細胞定植與骨破壞[14-15]。腫瘤細胞分泌的生長因子可促進成骨細胞表達核因子κB受體活化因子配體（receptor activator of nuclear factor-κB ligand，RANKL），其與位于破骨細胞表面的核因子кB受體活化因子（receptor activator of nuclear factor-кB，RANK）結(jié)合，激活破骨細胞的分化、成熟，促進骨吸收[16]；同時，產(chǎn)生多種生長因子，促進腫瘤增殖。增殖的腫瘤細胞進一步促進成骨細胞表達RANKL，擴大破骨效應(yīng)，形成腫瘤骨轉(zhuǎn)移的“惡性循環(huán)”[17-18]。骨保護素（osteoprotegerin， OPG）是由成骨細胞表達、分泌的RANKL誘導(dǎo)受體[16]，與RANK競爭性地結(jié)合RANKL，抑制破骨細胞活化，從而起到骨保護作用。作為破骨細胞活化的重要調(diào)節(jié)因素，OPG/RANKL在腫瘤細胞骨轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用[17-20]，而OPG/RANKL是否參與調(diào)控肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移部位差異目前尚不清楚。

基于此，本實驗通過構(gòu)建肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移小鼠模型，選擇下頜骨和股骨作為臨床上骨轉(zhuǎn)移低發(fā)和高發(fā)的代表性骨組織，檢測肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移差異發(fā)生的骨組織中OPG/RANKL表達情況及破骨細胞活化情況，探討其是否參與調(diào)控肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移部位差異，以期為部位特異性骨疾病的發(fā)病機制與防治研究提供新的思路。

1 材料和方法

1.1 主要儀器和試劑

μCT50-MicroCT（SCANCO Medical AG公司，瑞士）；NanoDrop紫外分光光度計（Thermo Fisher Scientific公司，美國）；小鼠Lewis肺癌（Lewis lung cancer cell，LLC）細胞（四川大學(xué)口腔疾病研究國家重點實驗室保存）； Dulbecco改良Eagle培養(yǎng)基（Dulbecco's modified Eagle medium，DMEM；Hyclone公司，美國）；胎牛血清（Gibco公司，美國）；青霉素-鏈霉素混合溶液（penicillin-streptomycin solution，PS；Hyclone公司，美國）；磷酸鹽緩沖液（phosphate buffer solution，PBS；Hyclone公司，美國）；Trizol試劑（Invitrogen公司，美國）；蘇木素-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；組織蛋白酶K（cathepsin K，CTSK）一抗（ab19027；Abcam公司，美國）；山羊抗兔免疫球蛋白H&L（HRP）二抗（ab7090；Abcam公司，美國）；抗兔HRP-3,3'-二氨基聯(lián)苯胺四鹽酸鹽（3,3',4,4'-biphenyltetramine tetrahydrochloride，DAB）免疫組化試劑盒（CTS005，R&D公司，美國）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、定量聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）試劑盒（Takara公司，日本）；乙二胺四乙酸二鈉鹽（ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt，EDTA；分析純，成都市科龍化工試劑廠）；小鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）、OPG、RANKL引物（上海生工生物工程公司）。

1.2 方法

1.2.1 肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移動物模型構(gòu)建 細胞培養(yǎng)：小鼠LLC細胞在5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%胎牛血清和1% PS的DMEM高糖培養(yǎng)基。處于指數(shù)生長期的LLC細胞經(jīng)PBS洗滌2次后，用0.25%的胰蛋白酶消化后離心，稀釋為合適濃度的LLC細胞PBS懸浮液備用。

全身性肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移模型構(gòu)建：40只6～8周齡的C57BL/6小鼠在無特定病原體（specefic pathogen free，SPF）條件下飼養(yǎng)1周適應(yīng)后，隨機分為2組，實驗組尾靜脈注射1×107mL-1LLC細胞PBS懸浮液100 μL，對照組尾靜脈注射等量PBS。建模后第3、5、7、9周時，隨機取3只實驗組小鼠和3只對照組小鼠頸椎脫臼法處死，取雙肺組織及雙側(cè)下頜骨和股骨組織進行后續(xù)分析。

股骨局部肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移模型構(gòu)建：6只6～8周齡C57BL/6小鼠在SPF條件下飼養(yǎng)1周適應(yīng)后，隨機分為2組，實驗組股骨干骺端注射1×106mL-1LLC細胞PBS懸浮液20 μL，對照組為同只小鼠對側(cè)股骨干骺端注射等量PBS。建模2周后頸椎脫臼法處死小鼠，取實驗組股骨組織和對照組股骨組織進行后續(xù)分析。

實驗動物飼養(yǎng)及動物實驗經(jīng)四川大學(xué)華西口腔醫(yī)院倫理委員會批準（WCHSIRB-D-2017-199）。

1.2.2 MicroCT檢測溶骨性損傷 骨組織經(jīng)4%多聚甲醛固定，隔夜后去除多余軟組織，將骨組織固定于掃描管內(nèi)，調(diào)整三維位置，使用μCT50-MicroCT進行掃描（掃描條件：65 kV、80 μA，分辨率為10 μm），檢測骨組織是否有溶骨性損傷。

1.2.3 骨組織HE染色 骨組織經(jīng)10% EDTA脫鈣液脫鈣4周及雙肺組織經(jīng)4%多聚甲醛固定后，用石蠟包埋，制作成5 μm厚石蠟切片，進行HE染色。采用常規(guī)二甲苯脫蠟，乙醇梯度水化，自來水充分沖洗，蒸餾水漂洗2次；蘇木素染色5 min，自來水沖洗；鹽酸乙醇分化30 s；1：400氨水返藍1 min；80%、90%梯度乙醇脫水后，伊紅染色2 min；100%乙醇脫水2次；二甲苯透明處理；中性樹脂封片。

1.2.4 骨組織免疫組織化學(xué)染色 骨組織石蠟切片經(jīng)常規(guī)二甲苯脫蠟、乙醇梯度水化后，PBS洗滌；0.4%胃蛋白酶進行抗原修復(fù)；按照免疫組織化學(xué)試劑盒說明書進行過氧化物酶、山羊血清、生物素、親和素封閉；以抗原稀釋液按1：100稀釋CTSK一抗，4 ℃孵育組織過夜后，室溫復(fù)溫，PBS洗滌；加入生物素二抗37 ℃孵育60 min，PBS漂洗；滴加1～3滴辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase）-鏈親和素結(jié)合物孵育30 min，PBS漂洗；滴加DAB顯色液，顯微鏡觀察孵育至合適顯色強度；蘇木素染色，梯度乙醇脫水后，中性樹脂封片。顯微鏡下采圖、計算單位面積骨組織中CTSK陽性破骨細胞數(shù)目并進行統(tǒng)計分析。

1.2.5 骨組織差異表達基因檢測 骨組織RNA提?。?～8周齡C57BL/6小鼠雌、雄各3只，取下頜骨、股骨組織，體視顯微鏡下去除牙齒、軟組織等附屬組織。在研缽里加入液氮，低溫環(huán)境下研磨骨組織至粉末狀，加入適量Trizol試劑，用酚-氯仿法提取骨組織，NanoDrop紫外分光光度計測定骨組織RNA濃度、純度后備用。

骨組織轉(zhuǎn)錄組測序（RNA sequencing，RNA-seq）分析：一半新鮮下頜骨、股骨組織RNA送北京百邁客生物科技有限公司進行RNA-seq，用生物信息學(xué)方法分析OPG mRNA/RANKL mRNA比值在下頜骨與股骨中的差異。

骨組織實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（real time quantitative polymerase chain reaction，RT-qPCR）檢測：剩余的下頜骨、股骨骨組織RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補DNA（complementary DNA，cDNA）后，加入Takara RT-qPCR反應(yīng)系統(tǒng)，以GAPDH基因作為內(nèi)參物，目的基因mRNA相對表達量按公式2-ΔΔCt進行計算，檢測骨組織中OPG mRNA/RANKL mRNA比值情況。GAPDH引物：上游5'-GCCTTCCGTGTTCCTACC-3'，下游5'-AGAGTGGGAGTTGCTGTTG-3'；OPG引物：上游5'-GTGAGGAAGGGCGTTACC-3'，下游5'-TTTTGCGTGGCTTCTCTG-3'；RANKL引物：上游5'-ATCGGGTTCCCATAAAGT-3'，下游5'-CCAAAGTACGTCGCATCT-3'。

1.2.6 統(tǒng)計學(xué)分析 實驗數(shù)據(jù)采自3次獨立重復(fù)實驗，以平均值±標準差形式表示，采用GraphPad Prism 6.01軟件進行統(tǒng)計分析，組間比較采用獨立樣本t檢驗，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移在小鼠下頜骨與股骨中差異發(fā)生

小鼠尾靜脈注射LLC細胞建模后第3、5、7、9周時，隨機取3只實驗組小鼠和3只對照組小鼠解剖取肺組織，發(fā)現(xiàn)從第3周起，實驗組小鼠開始形成肺部散在黃白色結(jié)節(jié)，隨著觀察周數(shù)延長，肺部結(jié)節(jié)逐漸增多增大，而對照組小鼠肺部表面光滑（圖1A）。對建模小鼠肺組織進行石蠟切片及HE染色觀察，發(fā)現(xiàn)相較于對照組（圖1B～D），實驗組小鼠肺部結(jié)節(jié)內(nèi)細胞核異質(zhì)明顯，隨著觀察周數(shù)延長，小鼠正常肺組織減少，核異質(zhì)細胞明顯增多（圖1E～G），說明小鼠肺轉(zhuǎn)移模型建立成功，為小鼠骨轉(zhuǎn)移提供轉(zhuǎn)移灶基礎(chǔ)。

同時對12只實驗組小鼠下頜骨及股骨進行取樣，發(fā)現(xiàn)在建模第3、5、7周均未見骨轉(zhuǎn)移；在第9周時有2只小鼠發(fā)生長骨（股骨及脛骨）轉(zhuǎn)移而下頜骨未見骨轉(zhuǎn)移，骨轉(zhuǎn)移發(fā)生率為16.67%。進一步對發(fā)生股骨轉(zhuǎn)移的小鼠進行MicroCT三維重建及HE染色分析，結(jié)果顯示下頜骨未見明顯骨破壞，而股骨及脛骨干骺端、生長板附近出現(xiàn)明顯骨破壞（圖2A），且松質(zhì)骨與皮質(zhì)骨均可發(fā)生溶骨性骨破壞（圖2B）。進一步對下頜骨及股骨進行HE染色，實驗組在股骨可觀察到骨質(zhì)破壞區(qū)髓腔內(nèi)存在形態(tài)不一、核異質(zhì)細胞，證實股骨骨質(zhì)破壞區(qū)存在轉(zhuǎn)移瘤細胞定植，而下頜骨未見轉(zhuǎn)移瘤細胞定植（圖2C）。上述結(jié)果表明，在全身性肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移小鼠模型中，相較于股骨，下頜骨不易發(fā)生肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移。

2.2 生理情況下正常下頜骨與股骨破骨細胞活化存在差異

選擇下頜骨和股骨作為癌細胞骨轉(zhuǎn)移低發(fā)和高發(fā)的代表性骨組織，破骨細胞標志物CTSK免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（圖3A～D）顯示，股骨中CTSK陽性細胞主要分布在生長板及股骨頭周圍，較為集中（圖3A、B）；下頜骨中CTSK陽性細胞主要分布在牙槽骨及牙周膜周圍，較為分散（圖3C、D）。CTSK陽性破骨細胞數(shù)目統(tǒng)計分析（圖3E）發(fā)現(xiàn)，下頜骨中單位骨面積破骨細胞數(shù)目顯著低于股骨，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

圖1 尾靜脈注射LLC細胞后小鼠肺轉(zhuǎn)移灶形成Fig 1 Lung metastasis in mice by injection of LLC cells through tail vein

圖2 全身性肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移小鼠模型中下頜骨與股骨中腫瘤細胞定植與骨破壞情況Fig 2 Tumor colonization and bone destruction occurred in mandible and femur in mouse model of systemic lung cancer cells bone metastasis

2.3 生理情況下正常下頜骨與股骨OPG mRNA/RANKL

mRNA比值存在差異

在生理情況下，正常小鼠下頜骨與股骨組織的RNA-seq數(shù)據(jù)（圖4A）及統(tǒng)計分析結(jié)果（圖4B）顯示，下頜骨組織OPG mRNA/RANKL mRNA比值高于股骨（P＜0.01）。RT-qPCR分析（圖4C）進一步驗證，生理情況下正常下頜骨與股骨OPG mRNA/RANKL mRNA比值存在差異，下頜骨OPG mRNA/RANKL mRNA比值高于股骨（P＜0.05）。

2.4 發(fā)生肺癌細胞轉(zhuǎn)移的骨組織中破骨細胞及OPG

mRNA/RANKL mRNA比值發(fā)生變化

股骨局部肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移模型的HE染色及MicroCT結(jié)果（圖5A）顯示，建模2周后，髓腔內(nèi)出現(xiàn)腫瘤細胞定植，轉(zhuǎn)移骨組織松質(zhì)骨與皮質(zhì)骨出現(xiàn)明顯的溶骨性破壞。CTSK免疫組織化學(xué)染色結(jié)果（圖5B～E）顯示，發(fā)生溶骨性骨破壞的區(qū)域主要是CTSK陽性破骨細胞集中分布的股骨生長板及干骺端區(qū)域（圖5D、E）。統(tǒng)計結(jié)果顯示，發(fā)生肺癌細胞轉(zhuǎn)移的骨組織區(qū)域破骨細胞數(shù)目明顯多于對照組骨組織同一區(qū)域（圖5F），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。骨轉(zhuǎn)移組骨組織OPG mRNA/RANKL mRNA比值顯著低于對照組骨組織（圖5G），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.000 1）。

圖3 正常生理情況下頜骨與股骨CTSK陽性破骨細胞分析Fig 3 Analysis of cathepsin K-positive osteoclasts in normal physiological mandible and femur

圖4 正常生理情況下頜骨與股骨組織OPG mRNA/RANKL mRNA水平分析Fig 4 Analysis of OPG mRNA/RANKL mRNA ratios in normal physiological mandible and femur

3 討論

部位特異性骨疾病在臨床上多有報道[6-10]，而其發(fā)病機制目前仍不明確。下頜骨是研究部位特異性骨疾病發(fā)生機制的理想骨組織。按形態(tài)分類，骨骼可分為長骨（如股骨）、短骨、不規(guī)則骨（如下頜骨）、扁平骨及圓骨等[21]；骨骼的成骨方式可分為2種，即軟骨內(nèi)成骨（股骨類長骨）和膜內(nèi)成骨（顱骨、椎體等扁骨及不規(guī)則骨）。下頜骨發(fā)育兼具軟骨內(nèi)成骨及膜內(nèi)成骨方式。然而骨骼的形態(tài)分類和成骨方式差異均不能較好匹配臨床上肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移部位差異性（脊柱轉(zhuǎn)移率最高，股骨等長骨次之，下頜骨鮮少發(fā)生骨轉(zhuǎn)移[6-7]）。進一步從胚胎起源上看，骨骼的胚胎起源包括3類，神經(jīng)嵴（外胚層）、體壁中胚層、軸旁中胚層[22]。其中，下頜骨發(fā)生于顱神經(jīng)嵴，股骨等長骨發(fā)生于側(cè)板中胚層，脊柱等軀干骨發(fā)生于軸旁中胚層[23-24]，這與臨床上各部位骨組織肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移發(fā)生率高低較契合。不同胚胎起源骨骼的基因表達差異可能引起骨微環(huán)境差異，從而影響腫瘤骨轉(zhuǎn)移部位差異。因此，本研究選取下頜骨和股骨作為不同胚胎來源的骨組織代表，探討骨組織微環(huán)境差異是否參與肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移部位差異。

圖5 對照組與實驗組骨組織中破骨細胞活化情況及OPG mRNA/RANKL mRNA比值分析Fig 5 Osteoclasts activation and OPG mRNA/RANKL mRNA ratios in bone tissues of the experimental and conrtrol groups

在正常狀態(tài)下，骨組織中骨形成與骨吸收存在動態(tài)平衡；在發(fā)生腫瘤細胞骨轉(zhuǎn)移時，腫瘤細胞的入侵破壞了局部骨環(huán)境穩(wěn)態(tài)，引起骨破壞。作為調(diào)控骨改建過程的重要功能細胞，破骨細胞也是參與轉(zhuǎn)移瘤細胞與骨微環(huán)境惡性循環(huán)的關(guān)鍵細胞。OPG/RANKL是骨微環(huán)境的重要調(diào)控因子，也是破骨細胞活化成熟的重要調(diào)控因素[16-20]。在本研究中，筆者發(fā)現(xiàn)，相較于肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移高發(fā)的股骨，骨轉(zhuǎn)移低發(fā)的下頜骨組織中CTSK陽性破骨細胞較為分散且數(shù)目更少（圖3），且OPG mRNA/RANKL mRNA比值顯著偏高（圖4）。局部肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移模型的研究結(jié)果表明，在發(fā)生肺癌細胞轉(zhuǎn)移的骨組織中，破骨細胞活化增強（圖5D～F），且OPG mRNA/RANKL mRNA比值明顯下調(diào)（圖5G）。以上結(jié)果提示，骨組織微環(huán)境可能通過OPG/RANKL影響破骨細胞活化進而參與調(diào)控肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移部位差異。

許多學(xué)者[6-7,25]在對臨床病例資料統(tǒng)計分析后，對下頜骨腫瘤轉(zhuǎn)移率很低達成了共識。本研究采用尾靜脈注射腫瘤細胞的方式構(gòu)建全身性肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移模型，提高了骨轉(zhuǎn)移建模的生存率且建模周期適中，并可模擬骨轉(zhuǎn)移發(fā)生過程中腫瘤細胞經(jīng)血運到達靶器官的過程。MicroCT三維重建、HE染色分析發(fā)現(xiàn)，與臨床報道相一致，相較于股骨，下頜骨不易發(fā)生肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移（圖2）。本研究采用股骨組織注射肺癌細胞的方法構(gòu)建局部肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移模型，建模成功率高、周期短，且可排除血液循環(huán)、腫瘤定植等因素的影響，適用于研究局部骨微環(huán)境對肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移部位差異的影響。通過實驗發(fā)現(xiàn)，發(fā)生肺癌細胞轉(zhuǎn)移的骨組織中破骨細胞活化增強，OPG mRNA/RANKL mRNA比值明顯下調(diào)（圖5）。印證了骨轉(zhuǎn)移高發(fā)的股骨組織中破骨數(shù)目多，OPG mRNA/RANKL mRNA比值較低，而下頜骨與此相反（圖3，圖4）。該種差異可能影響肺癌細胞轉(zhuǎn)移至下頜骨的概率較低。由此，筆者認為在口腔疾病的診治過程中，面對下頜骨溶骨性疾病，臨床醫(yī)生應(yīng)建立正確的診斷思路，在臨床思辨過程中，按照癥狀和影像學(xué)表現(xiàn)可能涉及疾病的發(fā)病率進行一一排除，從最常見的疾?。ㄈ绺庵苎?、牙周炎等）入手，再逐步擴大直至發(fā)病率較低的病癥（如下頜骨轉(zhuǎn)移瘤）。

綜上，本文通過構(gòu)建全身性肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移小鼠模型，明確肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移在小鼠下頜骨與股骨中差異發(fā)生，并以下頜骨與股骨作為肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移低發(fā)和高發(fā)的代表性骨組織，采用骨組織注射構(gòu)建局部肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移小鼠模型，模擬腫瘤細胞到達骨組織后與骨組織微環(huán)境之間的相互作用。從骨組織微環(huán)境角度出發(fā)，初步揭示了肺癌細胞骨轉(zhuǎn)移部位差異可能與骨組織微環(huán)境中破骨細胞活化情況及OPG/RANKL有關(guān)，可能為從骨組織微環(huán)境角度研究部位特異性骨疾病的發(fā)病機制與防治提供參考。