姜黃素對(duì)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后平滑肌細(xì)胞IL-18表達(dá)的影響

朱政　李文遠(yuǎn)　張玉芳　王惠珍　劉永斌　朱苗蕊　張曉惠

【摘要】目的：研究分析姜黃素對(duì)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后平滑肌細(xì)胞IL-18表達(dá)的影響。方法：選取正常SD雄性大鼠60只，采用隨機(jī)分組的方式分為兩組，30例作為對(duì)照組球囊損傷組，30例作為實(shí)驗(yàn)組姜黃素治療組，隨后建立大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型，對(duì)照組采用生理鹽水灌胃，而實(shí)驗(yàn)組采用姜黃素灌胃，在損傷后大鼠頸動(dòng)脈分別在第3/7/14d內(nèi)取材，采用酶聯(lián)免疫吸附辦法監(jiān)測(cè)反應(yīng)不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)大鼠平滑肌細(xì)胞IL-18的表達(dá)情況，對(duì)比兩組患者的IL-18表達(dá)水平。結(jié)果：經(jīng)過損傷后不同方式進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)IL-18表達(dá)的水平均低于對(duì)照組，同時(shí)相較于對(duì)照組平滑肌細(xì)胞增值受抑制明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：姜黃素對(duì)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后進(jìn)行治療能夠明顯抑制炎癥因子IL-18在的表達(dá)，具有明顯抑制炎癥的作用，在臨床實(shí)驗(yàn)中抗炎明顯，具有繼續(xù)研究?jī)r(jià)值。

【關(guān)鍵詞】大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷;姜黃素;平滑肌細(xì)胞IL-18表達(dá)

[中圖分類號(hào)]R [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2096-5249（2020）16-000-02

近年來研究人員發(fā)現(xiàn)血管在損傷之后的修復(fù)可能會(huì)出現(xiàn)平滑肌細(xì)胞增值與基質(zhì)合成導(dǎo)致血管狹窄的情況發(fā)生，嚴(yán)重影響患者預(yù)后，在該過程中炎性因子可能發(fā)揮了不同的作用，經(jīng)過新研究發(fā)現(xiàn)，IL-18是一種具有多項(xiàng)性效應(yīng)的促炎癥因子，該因子在血管狹窄事件中可通過基質(zhì)金屬蛋白酶-9達(dá)到有道人體冠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移的目的，從而導(dǎo)致血管狹窄情況的發(fā)生[1]。本文以正常SD雄性大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，探究姜黃素對(duì)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后平滑肌細(xì)胞IL-18表達(dá)的影響效果，分析使用可行性，研究?jī)?nèi)容如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選用雄性SD大鼠60只，所有大鼠均由標(biāo)準(zhǔn)化SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室所提供，提質(zhì)量為300～350g，平均為（323.4±11.1）g，均為12月齡。

1.2方法

1.2.1材料及模型、組織工作 （1）材料：球囊導(dǎo)管選用美國ME公司標(biāo)準(zhǔn)為長20mm，半徑1.0mm的導(dǎo)管，而IL-18試劑盒選擇美國ADL公司的IL-18試劑盒，姜黃素（陜西森弗生物有限公司，國藥準(zhǔn)字JGS081011）的純度為98%的藥物。（2）動(dòng)物模型與組織處理：首先使用濃度為3%的戊巴比妥鈉進(jìn)行大鼠腹腔麻醉，隨后暴露出左側(cè)頸動(dòng)脈，長度約為2.5cm，外動(dòng)脈行切口，將導(dǎo)管插入總動(dòng)脈，隨后注入生理鹽水約0.15l，來回牽拉導(dǎo)管3～4次，隨后拔出，之后結(jié)扎外動(dòng)脈后縫合，術(shù)后給予抗感染治療，術(shù)后14d采用大出血辦法處死，收集全血。

1.2.2 分組處理 兩組大鼠中，球囊損傷組進(jìn)行生理鹽水灌胃，而實(shí)驗(yàn)組則采用姜黃素100mg·kg-1·d-1灌胃，在光鏡下觀察血管內(nèi)膜與中膜的增生情況。

1.2.3 IL-18監(jiān)測(cè) 采用美聯(lián)免疫吸附法（ELISA）進(jìn)行檢測(cè)，將全血收集后規(guī)范保管，隨后進(jìn)行全血離心后取血清等步驟嚴(yán)格按照說明書規(guī)范進(jìn)行，操作完成時(shí)候?qū)⒚笜?biāo)板至于酶標(biāo)儀上讀取OD數(shù)值，根據(jù)OD數(shù)值計(jì)算樣本中IL-18的濃度。

1.3 觀察指標(biāo) （1）IL-18表達(dá)水平：3/7/14d內(nèi)兩組大鼠的IL-18表達(dá)情況。（2）動(dòng)脈平滑肌增生情況：顯著（光鏡下血管內(nèi)平滑肌增生明顯，血管狹窄情況明顯可見）;可見（光鏡下能夠見到血管內(nèi)平滑肌增生，但是并未形成血管狹窄）;未增生（光鏡下平滑肌未增生，無血管狹窄情況出現(xiàn)）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 將數(shù)據(jù)納入SPSS17.0軟件中分析，計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，并以（_x±s）表示，率計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，并以率（%）表示，（P<0.05）為差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

經(jīng)過損傷后不同方式進(jìn)行處理，實(shí)驗(yàn)組大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)內(nèi)IL-18表達(dá)的水平均低于對(duì)照組，同時(shí)相較于對(duì)照組平滑肌細(xì)胞增值受抑制明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），數(shù)據(jù)對(duì)比如表1。

3 討論

人體主動(dòng)脈發(fā)生疾病會(huì)累及全身出現(xiàn)并發(fā)癥，患者生存質(zhì)量受到明顯影響，血管造影顯示再狹窄率極高，當(dāng)前認(rèn)為再狹窄主要機(jī)制之一則是血管壁局部損傷觸發(fā)過度的平滑肌細(xì)胞增殖與基質(zhì)的合成[2]。在該過程中IL-18起到明顯的作用，機(jī)制具體位置IL-18過度參與到AP-1和NF-KB介導(dǎo)物質(zhì)的激活過程當(dāng)中，被激活的兩種介導(dǎo)出現(xiàn)異位表達(dá)的情況，從而導(dǎo)致基質(zhì)金屬蛋白酶啟動(dòng)因子（MMPS）活性不斷增強(qiáng)，MMPs能夠有效降解細(xì)胞外基質(zhì)從而促進(jìn)動(dòng)脈內(nèi)平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)遷移并且新生內(nèi)膜的過度增生[3]。大鼠在頸動(dòng)脈球囊受到損傷之后，如果沒有發(fā)生感染等情況，自身的調(diào)節(jié)作用會(huì)促進(jìn)動(dòng)脈血管的自我修復(fù)，而在該過程中除了血管的修復(fù)，則可能出現(xiàn)平滑肌細(xì)胞增生出現(xiàn)血管再狹窄等的情況，動(dòng)脈血流出現(xiàn)異常，如果發(fā)生在人體身上將十分危險(xiǎn)。

球囊損傷后的第三天，血管修復(fù)促使新生內(nèi)皮細(xì)胞出現(xiàn)，此時(shí)IL-18水平一般，在7d可以明確觀察到管腔內(nèi)部分可見內(nèi)皮細(xì)胞，新生內(nèi)膜增厚，此時(shí)IL-18的分泌水平達(dá)到頂點(diǎn)，平滑肌細(xì)胞增殖十分明顯[4]。要實(shí)現(xiàn)平滑肌增殖則需要預(yù)防介入，在平滑肌細(xì)胞實(shí)現(xiàn)增殖之前有效的遏制和截?cái)嘣撨^程的發(fā)生，本研究選擇姜黃素作為抗炎藥物，該藥物是姜黃的提取物，姜黃素抗炎主要是通過減弱PDGF介導(dǎo)的信號(hào)途徑的傳導(dǎo)、抑制增殖以及細(xì)胞外膠原的合成，具有明顯的下調(diào)生存素表達(dá)、抑制新生內(nèi)膜增厚的作用，同時(shí)經(jīng)過藥物的使用，IL-18的表達(dá)水平受到明顯抑制，藥物具有明顯抑制炎癥的作用[5]。

綜上所述，姜黃素對(duì)大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷后進(jìn)行治療能夠明顯抑制炎癥因子IL-18在的表達(dá)，具有明顯抑制炎癥的作用，在臨床實(shí)驗(yàn)中抗炎明顯，具有繼續(xù)研究?jī)r(jià)值。

參考文獻(xiàn)

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通信作者：張曉惠，主治醫(yī)師，E-mail：qujianbo@163.com