高效液相色譜法測定化妝品中的氨甲環(huán)酸分析

鐘紅霞 張梟雄

摘 要：為滿足化妝品中氨甲環(huán)酸的分析要求，本文選擇了高效液相色譜測定法，經(jīng)甲醇處理樣品、優(yōu)化色譜條件、確定檢測波長、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線、穩(wěn)定性試驗等操作獲得檢出限、回收率以及精密度，最后用于樣品測定得到準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果，可為化妝品中氨甲環(huán)酸的測定提供參考。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜法;測定;氨甲環(huán)酸

近年來，美白類化妝品發(fā)展迅速，其中氨甲環(huán)酸因美白褪斑效果顯著成為其原料之一，但目前對其檢測尚無明確標(biāo)準(zhǔn)。因此為保證化妝品安全使用，本文提出了高效液相色譜法用于化妝品中氨甲環(huán)酸的測定，下面就其測定要點加以分析。

1 氨甲環(huán)酸概述

之所以在化妝品中應(yīng)用氨甲環(huán)酸，是因為氨甲環(huán)酸屬于蛋白酶抑制劑，可通過抑制蛋白酶對肽鍵水解的催化作用，阻止酶活性，進而對黑斑部位表皮細胞機能的混亂以及黑色素增強因子群起到抑制作用，并徹底斷絕因紫外線照射而形成黑色素的形成途徑，因此美白褪斑功能顯著，逐漸成為化妝品中最重要的一種美白成分。如果濫用則會產(chǎn)生一系列的副作用，如頭疼頭暈、視力模糊等癥狀，過量還可能引發(fā)腹瀉、嘔吐、顱內(nèi)出血等，故為防止氨甲環(huán)酸濫用，保證化妝品使用安全，十分有必要對其進行測定[1]。具體有離子色譜法、液質(zhì)聯(lián)用法、高效液相色譜法等測定途徑，其中高效液相色譜法相對而言操作簡單、靈敏高效，對此，本文構(gòu)建了化妝品中氨甲環(huán)酸的測定方法。

2 氨甲環(huán)酸的測定要點

2.1 準(zhǔn)備試劑與儀器

實驗所用試劑包括：購自網(wǎng)上商城的面霜、乳液、爽膚水、凝膠、面膜等不同劑型的12批化妝品樣品;加拿大TCR公司生產(chǎn)的w=98%的氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)品;國藥集團化學(xué)試劑公司生產(chǎn)的磷酸二氫鉀、分析純，美國Fisher公司生產(chǎn)的甲醇、色譜純。所用儀器包括帶有二極管陣列檢測器的Ultimate3000型高效液相色譜儀;精度為萬分之一的AL204電子分析天平和精度為十萬分之一的XP205電子分析天平;以及高速冷凍離心機和VORTEX-5型渦旋混合器。

2.2 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液以及樣品前處理

標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制需要先精確稱量氨甲環(huán)酸標(biāo)準(zhǔn)品20mg，將其置于規(guī)格為10mL的容量瓶后加入超純水加以溶解和定容，形成2g/L濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

樣品的前處理首先需要以0.0001g的精度準(zhǔn)確稱取0.5g的化妝品試樣，將其置于離心管（15mL）后加入5%的甲醇溶液，此時離心管內(nèi)溶液體積在9mL左右，利用渦旋振蕩作用充分而均勻的混合試樣與提取液溶劑，經(jīng)10min超聲提取后加以冷卻至室溫。然后在10mL的容量瓶中轉(zhuǎn)移上述溶液，加入5%甲醇定容后達到容器刻度，待均勻混合后再轉(zhuǎn)移到離心管，并用高速冷凍離心機離心處理10min，轉(zhuǎn)速可控制在12000r/min。最后，在0.22μm孔徑濾膜的作用下對上清液進行過濾后經(jīng)高效液相色譜儀開始測定[2]。

其中5%甲醇的選用是基于一定實驗結(jié)果確定的。因為氨甲環(huán)酸易在水中溶解而幾乎不溶于甲醇，故將水作為提取溶劑，但部分霜劑或乳劑因含有較多的油脂成分使得氨甲環(huán)酸難以在水中分散，進而限制其提取效率，決定加入少量的甲醇于水中，同時提取溶劑分別為純水、5%甲醇、10%甲醇的條件下考察氨甲環(huán)酸的提取效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)5%甲醇在不同基質(zhì)下均具有最高的提取效率，因此為更好的分散化妝品基質(zhì)，本文在樣品前處理環(huán)節(jié)選用了5%甲醇作為提取劑。

2.3 優(yōu)化色譜條件，確定檢測波長

為獲得良好的分離效果，本文選取了三個不同品牌的C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）進行實驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Shiseido CAPCELL PAK C18 UG120色譜柱的氨甲環(huán)酸不僅具有對稱的色譜峰，還有更好的峰型，與化妝品雜質(zhì)分離有效，故將其作為色譜條件。再者因氨甲環(huán)酸中的氨基和羧基主要以離子形式出現(xiàn)在溶液中，容易受到pH值和流動相離子強度的影響，故在選擇流動相時首先考慮了KH2PO4溶液，并就0.01mol/L、0.02 mol/L和0.05 mol/L濃度的該溶液作了比較分析，證明色譜柱上的氨甲環(huán)酸無論是保留效果、出峰時間還是化妝品雜質(zhì)的分離效果均隨著溶液濃度的增大而顯著，不過峰型不佳且前延，所以為改善峰型、增強保留效果加入了0.2%的H3PO4對溶液pH進行調(diào)節(jié)，即流動相體系為0.05 mol/L濃度的KH2PO4溶液+0.2%的H3PO4溶液[3]。

在確定檢測波長時經(jīng)DAD對氨甲環(huán)酸作了全掃描，分析紫外光譜圖得知在207nm左右出現(xiàn)了最大吸收波長，考慮到其波長吸收實際情況，最終將210nm設(shè)為檢測波長。

2.4 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進行穩(wěn)定性試驗

稱量1mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液，經(jīng)稀釋處理達到10mL，隨后用水將其逐級稀釋成濃度分別為100mg/L、50mg/L、25mg/L、10mg/L、5mg/L的溶液，根據(jù)測定結(jié)果繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，考察線性范圍，最終得到y(tǒng)=0.008 9x+0.012 7的回歸方程和R2=1的相關(guān)系數(shù)，由此說明5-100mg/L范圍內(nèi)的氨甲環(huán)酸與峰面積響應(yīng)值之間具有良好的線性關(guān)系。接著進行穩(wěn)定性試驗，即以樣品前處理操作提取加標(biāo)量為20mg/L乳液樣品，分別置于室溫環(huán)境中0、1h、2h、4h、8h、12h和24 h，然后基于設(shè)定的色譜條件下對其峰面積進行測定，結(jié)果得到0.026%的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，說明樣品前處理下制備的樣品在24h內(nèi)性質(zhì)穩(wěn)定。

2.5 獲得檢出限與定量限

取空白樣品加入適量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液后進行渦旋混勻得到加標(biāo)樣品，經(jīng)前處理提取后測定信噪比，并分別以S/N=3和S/N=10對應(yīng)的被測化合物含量作為方法的檢出限和定量限，最終得到檢出限LOD=10.7μg/g-22.2μg/g，定量限LOQ=28.9μg/g-48.0μg/g。

2.6 計算回收率與精密度

選取當(dāng)下市場上普遍添加氨基環(huán)酸的面霜、乳液、爽膚水、面膜、凝膠5種基質(zhì)作為空白基質(zhì)用于加標(biāo)回收實驗，并在線性范圍內(nèi)設(shè)定10mg/L、50mg/L和100mg/L分別作為低、中、高三個水平的加標(biāo)量進行計算，得到氨甲環(huán)酸的平均加標(biāo)回收率與RSD值（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）分別為95.23%-110.40%和1.24%-3.59%。

3 測定樣品及其結(jié)果分析

基于以上測定方法對購自網(wǎng)上商城的面霜、乳液、爽膚水、凝膠、面膜等不同劑型的12批化妝品樣品中的氨甲環(huán)酸進行檢測，其中2批樣品未達到檢出限，10批化妝品樣品中所含氨甲環(huán)酸在0.48%-3.12%之間。故本文提出的高效液相色譜測定法重現(xiàn)性良好，測定準(zhǔn)確可靠，可為相關(guān)部門監(jiān)測美白祛斑類化妝品提供一定的技術(shù)支持。

4 結(jié)束語

綜上所述，基于高效液相色譜法測定化妝品中的氨甲環(huán)酸時，先用5%甲醇溶液提取氨甲環(huán)酸，經(jīng)Shiseido CAPCELL PAK C18 UG120色譜柱分離，以體積比為5：95的KH2PO4溶液+0.2%的H3PO4溶液為流動相體系，設(shè)定檢測波長為210nm，在此條件下獲得了5-100mg/L內(nèi)良好的線性關(guān)系和大于0.999的相關(guān)系數(shù)，以及LOD=10.7μg/g-22.2μg/g、LOQ=28.9μg/g-48.0μg/g、回收率=95.23%-110.40%和RSD=1.24%-3.59%，且24h內(nèi)制備的樣品性質(zhì)穩(wěn)定。經(jīng)樣品測定后進一步說明該法簡單可靠，適用于化妝品中氨甲環(huán)酸的測定。

參考文獻：

[1]代靜，高家敏，曹進，王鋼力.高效液相色譜法測定化妝品中的氨甲環(huán)酸[J].日用化學(xué)工業(yè)，2019，49（11）：760-763.

[2]朱惠斌，王雪平.高效液相色譜法測定美白祛斑化妝品中氨甲環(huán)酸[J].理化檢驗（化學(xué)分冊），2018，54（11）：1255-1259.

[3]唐毓萍，唐欣，孫培文，林藝青，李征.高效液相色譜法測定化妝品中氨甲環(huán)酸的含量[J].日用化學(xué)工業(yè)，2018， 48（01）：57-60.