不同地區(qū)淫羊藿藥材質(zhì)量分析

黃世瓊，張永東，鄭浩文，彭 婭，銀 政

(1.太極集團(tuán)重慶涪陵制藥廠有限公司，重慶 408099；2.西藏藏醫(yī)學(xué)院藏藥有限公司，西藏 拉薩 850000)

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicomuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。夏、秋季莖葉茂盛時(shí)采收，曬干或陰干，具有補(bǔ)腎陽(yáng)、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效，用于腎陽(yáng)虛衰、陽(yáng)痿遺精、筋骨痿軟、風(fēng)濕痹痛、麻木拘攣[1]。淫羊藿主要產(chǎn)于陜西、甘肅、山西、河南、青海、湖北、四川等地，生于林下、溝邊灌叢中或山坡陰濕處[2]。作為傳統(tǒng)的滋補(bǔ)類中藥，淫羊藿始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，已有2 000多年的歷史，是中國(guó)應(yīng)用最為廣泛、最為悠久的中藥之一[3]。2015年版《中國(guó)藥典》[1]收載淫羊藿藥材條下有淫羊藿、箭葉淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鮮淫羊藿4個(gè)種。淫羊藿屬品種較多且復(fù)雜，中國(guó)有淫羊藿屬植物43種，是該屬的現(xiàn)代地理分布中心，而本屬在全世界范圍內(nèi)約56種[4]。

2015年版《中國(guó)藥典》[1]規(guī)定了淫羊藿的含量標(biāo)準(zhǔn)，要求本品按干燥品計(jì)算，含淫羊藿苷(C33H40O15)不得少于0.50%，為評(píng)價(jià)淫羊藿質(zhì)量的重要指標(biāo)之一。淫羊藿苷對(duì)于改善心血管系統(tǒng)功能、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌、增強(qiáng)免疫、抗腫瘤等均表現(xiàn)出生理活性，還具有延緩衰老、抗疲勞和耐缺氧等作用[5]。吳文輝等[6]研究測(cè)定的14個(gè)地區(qū)淫羊藿的淫羊藿苷僅有6個(gè)產(chǎn)地的淫羊藿符合2015年版《中國(guó)藥典》0.50%的含量標(biāo)準(zhǔn)，合格率為4.29%。朱升等[7]建立新的HPLC檢測(cè)方法測(cè)定不同地區(qū)淫羊藿的淫羊藿苷含量，對(duì)淫羊藿藥材中的各種物質(zhì)分離效果良好。本文采用2015年版《中國(guó)藥典》淫羊藿條下含量測(cè)定方法，測(cè)定重慶、四川、甘肅、吉林、貴州、陜西6個(gè)地區(qū)的60個(gè)樣品中的淫羊藿苷含量，可以為規(guī)范淫羊藿產(chǎn)地質(zhì)量、提高臨床使用單位和藥品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)企業(yè)的產(chǎn)品質(zhì)量提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 材料 60個(gè)樣品淫羊藿來(lái)自重慶、四川、陜西、甘肅、貴州、吉林地區(qū)，經(jīng)重慶醫(yī)科大學(xué)楊軍宣副研究員鑒定為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicomuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉，性狀均符合2015年版《中國(guó)藥典》有關(guān)規(guī)定。淫羊藿苷對(duì)照品(批號(hào)：110737-201516，供含量測(cè)定用，中國(guó)食品藥品檢定研究院)，乙腈(色譜純)，甲醇(色譜純)，水為純化水，其余試劑均為分析純。

1.1.2 儀器 Agilengt 1260高效液相色譜儀(含自動(dòng)進(jìn)樣器、四元泵、二極管陣列檢測(cè)器 DAD、柱溫箱)，XSE204電子分析天平(梅特勒-托利多)，YQ-620C超聲波清洗器(上海易凈超聲波儀器有限公司)，DLF-50多功能粉碎機(jī)(溫州頂歷醫(yī)療器械有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性 色譜柱：YF19007-JADE-PAR-5um C18色譜柱(4.6 mm×250 mm)，以乙腈-水(30∶70)為流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，柱溫30 ℃。在上述色譜條件下，淫羊藿苷和樣品中其他組分色譜峰可基線分離，淫羊藿苷與相鄰色譜峰的分離度R>1.50。理論塔板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1 500。

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取淫羊藿苷對(duì)照品0.012 24 g至100 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成每1 mL含0.122 4 mg的淫羊藿苷對(duì)照品溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20 mL，稱定重量，超聲處理1 h，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得[8-10]。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察

按照上述色譜條件，配制不同濃度的淫羊藿苷對(duì)照品溶液。精密量取“1.2.2”項(xiàng)中對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL分別置10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，得到濃度分別是6.12、12.24、24.48、48.96、73.44、97.92 μg/mL的系列對(duì)照品溶液。分別吸取10 μL注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積。以色譜峰面積(Y)對(duì)淫羊藿苷進(jìn)樣質(zhì)量(X)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程Y= 13 372X-10 572，r=0.999 8，表明淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.061 2～0.979 2 μg時(shí)，與峰面積值有良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度試驗(yàn)

精密吸取上述淫羊藿苷對(duì)照品溶液10 μL，按照“1.2.1”項(xiàng)的色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定淫羊苷的峰面積，計(jì)算淫羊藿苷的峰面積RSD為1.23%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一箭葉淫羊藿樣品6份，按照供試品溶液制備方法進(jìn)行制備，分別吸取10 μL，按照上述色譜條件測(cè)定淫羊藿苷含量。結(jié)果測(cè)得淫羊藿苷含量的RSD為1.02%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10、12 h后進(jìn)樣10 μL，測(cè)定峰面積，計(jì)算淫羊藿苷含量，結(jié)果淫羊藿苷含量的平均值為0.93%，RSD為1.34%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量為0.92%的箭葉淫羊藿樣品0.1 g，分別加入淫羊藿苷對(duì)照品溶液(0.122 4 mg/mL)10 mL，即加入的淫羊藿苷量為1.836 mg。按照“1.2.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，測(cè)定其含量，計(jì)算回收率，平均值為99.28%。其結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收率測(cè)定結(jié)果

2.6 樣品含量測(cè)定

取重慶、四川、甘肅、吉林、貴州、陜西地區(qū)收集到的60個(gè)批次淫羊藿樣品，按照上述制備供試品溶液的方法進(jìn)行制備，用上述色譜條件檢測(cè)，進(jìn)樣10 μL，測(cè)定淫羊藿苷峰面積，計(jì)算淫羊藿苷的平均含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 重慶、四川、陜西、甘肅、貴州、吉林淫羊藿苷含量 (%)

3 討論

本研究采用2015年版《中國(guó)藥典》[1]淫羊藿條下的含量測(cè)定項(xiàng)下HPLC法測(cè)定淫羊藿苷的含量，規(guī)定樣品按干燥品計(jì)算，含淫羊藿苷(C33H40O15)不得少于0.50%。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地、不同品種、不同采收加工方式(陰干或烘干)及不同生長(zhǎng)年限(1年生或3年生)樣品中淫羊藿苷含量差異較大，60個(gè)樣品中，41個(gè)樣品符合2015年版《中國(guó)藥典》的含量標(biāo)準(zhǔn)，合格率為68%。甘肅、陜西產(chǎn)的淫羊藿含量普遍較高，淫羊藿苷含量為0.78%～1.32%；吉林地區(qū)主產(chǎn)朝鮮淫羊藿，淫羊藿苷含量為0.53%～0.65%。檢測(cè)的17個(gè)淫羊藿和朝鮮淫羊藿樣品中淫羊藿苷的含量均符合2015年版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。柔毛淫羊藿在四川、陜西均有分布，淫羊藿苷含量為0.18%～0.68%，含量較低，9批樣品中只有3批合格。重慶地區(qū)以箭葉淫羊藿為主，淫羊藿苷含量為0.28%～1.80%，所測(cè)樣品中最高含量為最低含量的6倍，差異較大；對(duì)重慶涪陵和重慶長(zhǎng)壽的12個(gè)樣品檢測(cè)的含量進(jìn)行分析，烘干品含量高于陰干品含量，3年生樣品含量低于1年生樣品。

以上收集到的60個(gè)樣品，均來(lái)自淫羊藿的主要產(chǎn)區(qū)，基本具有代表性。分析發(fā)現(xiàn)含量差異較大，主要因?yàn)槠贩N、產(chǎn)地氣候土壤、采收加工及生長(zhǎng)年限的影響。因此，臨床選用淫羊藿藥材時(shí)，為保證臨床療效，盡可能選用淫羊藿和朝鮮淫羊藿2個(gè)品種，生長(zhǎng)期3年以下的產(chǎn)品，采取烘干方式進(jìn)行干燥。淫羊藿含量控制的研究較多[11-12]，方法較為豐富，馬文娟等[13]采用超高效液相色譜-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對(duì)淫羊藿中的淫羊藿苷等化學(xué)成分進(jìn)行定性分析，方法準(zhǔn)確、快速、靈敏。同時(shí)，有關(guān)學(xué)者對(duì)《中國(guó)藥典》收載的淫羊藿品種研究的說(shuō)法也不盡相同，董河等[14]認(rèn)為箭葉淫羊藿難以符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，建議修改定量指標(biāo)或單列。本研究認(rèn)為采用《中國(guó)藥典》方法研究淫羊藿中淫羊藿苷的含量測(cè)定，條件成熟，誤差小，可以為藥材臨床使用單位及藥品生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)企業(yè)提供質(zhì)量依據(jù)。