高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸

【摘 ?要】建立一種高效液相色譜同時(shí)測(cè)定食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸的方法，實(shí)驗(yàn)選擇條件是賽默飛ACES C18 Plus反相色譜柱（250*4.6 *5um），柱溫30℃，甲醇與0.02mol/L乙酸銨水溶液比例為5：95，流速為1.00mL/min，PDA檢測(cè)器，在波長(zhǎng)為230nm下檢測(cè)，該方法樣品前處理簡(jiǎn)單，回收率、精密度和準(zhǔn)確度良好，在常規(guī)檢測(cè)中非常實(shí)用。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉

脫氫乙酸

食品添加劑是添加到食品中以保持風(fēng)味或增強(qiáng)口感，改善外觀或其他品質(zhì)的物質(zhì)。食品添加劑用途可以分為防腐劑、甜味劑、著色劑，增稠劑等。食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)GB 2760-2014》規(guī)定了不同食品中可以使用的食品添加劑的種類和限量，按照標(biāo)準(zhǔn)要求，使用添加劑對(duì)食品工業(yè)發(fā)展、食品安全、延長(zhǎng)食品保質(zhì)期有重要的作用，但是違規(guī)使用或超量使用添加劑就會(huì)給人體帶來(lái)危害。目前測(cè)定食品添加劑的方法主要有氣相色譜法，液相色譜法，氣相色譜質(zhì)譜連用法，液相色譜質(zhì)譜連用法等。本文涉及的五種食品添加劑主要是運(yùn)用高效液相色譜法，根據(jù)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的測(cè)定（GB 5009.28-2016）、食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脫氫乙酸的測(cè)定（GB 5009.121-2016）、飲料中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定（GB/T 5009.140-2003），對(duì)于同一食品樣品，需要多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行多次檢驗(yàn)，效率較低，給基層工作者帶來(lái)很大的工作難度。需建立一種簡(jiǎn)單、通用的方法，能同時(shí)測(cè)定多種食品添加劑。對(duì)比國(guó)標(biāo)方法本法案具有，前處理步驟簡(jiǎn)單、回收率高、方法穩(wěn)定性好、靈敏度和準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。

1材料與方法：

1.1儀器設(shè)備

1、高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測(cè)器，Thermo scientific ultiMate 3000）2、KQ3200DE型數(shù)控超聲波清洗器3、METTLER TOLEDO酸度計(jì)4、ELITIST 21K-R 高速冷凍離心機(jī)5、天津天馬衡基萬(wàn)分之一的天平。

1.2材料與試劑

1、安賽蜜：濃度1.00mg/mL（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院;2、苯甲酸：濃度1.00mg/mL（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院;3、山梨酸：濃度1.00mg/mL（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院4、糖精鈉;濃度1.00mg/mL（中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院5、脫氫乙酸（Dehydroacetic Acid，25G，CAS：520-45-6）（純度98%）6、甲醇：（色譜純，美國(guó)Fisher公司7、氨水（優(yōu)級(jí)純）8、無(wú)水乙醇（分析純）9、正己烷（分析純）9、超純水

（1）脫氫乙酸（98.0%）儲(chǔ)備液。用10mL 20g/L的氫氧化鈉溶液溶解，加水配置成1.00mg/mL的儲(chǔ)備液。

（2）0.02mol/L乙酸銨溶液。稱取1.54g優(yōu)級(jí)純的乙酸銨用水溶解后定容至1000mL，經(jīng)0.22um濾膜過(guò)濾超聲后備用。

（3）220g/L乙酸鋅溶液，稱取220g分析純乙酸鋅溶于少量水中，加入30mL冰乙酸，用水定容至1000mL.

（4）106g/L亞鐵氰化鉀溶液。稱取106g亞鐵氰化鉀用水定容至1000mL.

（5）20g/L氫氧化鈉溶液。稱取20g分析純氫氧化鈉用水溶解后定容至1000mL.

（6）氨水溶液（1+99）.取氨水1mL，加99mL水中，混勻。

實(shí)驗(yàn)方案：

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1色譜柱：（ACES C18Plus 250*4.6 SN：4F30809），流動(dòng)相：甲醇：乙酸銨=5：95，總流速：1.00mL/min，柱壓：69MPa，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm，進(jìn)樣體積：10uL，采集時(shí)間：25min.

1.3.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制：

分別準(zhǔn)確吸取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1000mg/L）各10mL于100mL容量瓶中，用水定容成混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（100mg/L）.分別準(zhǔn)確吸取混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0.0、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00于10mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成質(zhì)量濃度為：0.00、1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、100mg/L，經(jīng)0.22um水系濾頭過(guò)濾后上機(jī)檢測(cè)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品前處理：

（1）液體樣品：碳酸飲料、配制酒、醬油、醋等液體樣品，稱取混勻樣品2-5g（精確至0.0001g），放入50mL的比色管中，用水定容至刻度，混勻，過(guò)0.22um微孔濾膜過(guò)濾，濾液待機(jī)分析，含蛋白較多的液體樣品各加5mL的亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白。

（2）固體樣品：含油脂較多的試樣，精確稱取2-5g試樣于100mL比色管中，加10mL正己烷，于60水浴加熱5min，輕搖以溶解脂肪，然后加氨水溶液（1+99）50mL，無(wú)水乙醇2mL，棄去有機(jī)相，水相轉(zhuǎn)移至100mL比色管中。一般固體試樣精確稱取2-5g樣品于100mL的比色管中，加入50mL的水，搖勻浸泡30min.分別在上述樣液中各加5mL的亞鐵氰化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白，最后定容、靜置，取上層液經(jīng)0.22um水系濾頭過(guò)濾后上機(jī)。采用外標(biāo)準(zhǔn)與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。待測(cè)樣液待測(cè)組分濃度應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)，超出曲線應(yīng)將樣液稀釋后再進(jìn)行分析。

結(jié)果計(jì)算：樣中待測(cè)組分含量的計(jì)算公式如（1）所示。

式（1）中，X為試樣中待測(cè)組分含量，g/kg。

c為由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的試樣中待測(cè)物的質(zhì)量濃度，mg/L.

v為試樣定容體積，mL.

1000為mg/kg轉(zhuǎn)換為g/kg的換算因子。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析：

2.1波長(zhǎng)選擇

實(shí)驗(yàn)中對(duì)安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸5種添加劑進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，發(fā)現(xiàn)最大吸收波長(zhǎng)分別在：225.4nm、219.2nm、228.7nm、255.0nm、310.8nm處（其中脫氫乙酸的最大吸收波長(zhǎng)310.8nm處有干擾，而次級(jí)波長(zhǎng)為230.2nm），綜合考慮各組分的靈敏度，本實(shí)驗(yàn)選擇的波長(zhǎng)為230nm.

2.2流動(dòng)相選擇

如果選乙腈和0.02mol/L乙酸銨水溶液為流動(dòng)相時(shí)，由于乙腈洗脫能力強(qiáng)，還沒(méi)分離就被沖了下來(lái)。無(wú)法達(dá)到分離效果。如果提高甲醇比例，會(huì)使糖精鈉和脫氫乙酸疊加在一起。實(shí)驗(yàn)中采用甲醇與0.02mol/L乙酸銨水溶液做流動(dòng)相，流速為1.0mL/min.甲醇與乙酸氨水溶液流動(dòng)相比例為5：95時(shí)，分離效果最好。

2.3 線性回歸方程、檢出限和回收率

將配制好的標(biāo)準(zhǔn)曲線上機(jī)分析，得到每種物質(zhì)線性方程，在線性范圍內(nèi)較好，相關(guān)系數(shù)R均大于0.998，以3倍噪聲為檢出限，以飲料為代表樣品，添加低水平的5種混標(biāo)，每個(gè)水平重復(fù)測(cè)定6次，計(jì)算平均回收率和精密度，結(jié)果見(jiàn)表1。5種添加劑的加標(biāo)回收率為96.4%-98.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.02%-1.89%。

3 結(jié)論：

本文建立一種同時(shí)測(cè)定食品中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸5種食品添加劑的液相色譜法，解決了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)不能同時(shí)檢測(cè)的弊端，適用范圍基本上覆蓋了所有食品類別，通過(guò)二極管檢測(cè)器對(duì)定性結(jié)果做了進(jìn)一步論證，提高了檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，該方法耗時(shí)短，操作簡(jiǎn)單，適用于樣品的快速檢驗(yàn)，可作為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的補(bǔ)充進(jìn)行推廣。

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作者簡(jiǎn)介：

劉曉霞（1981年-），女，山西臨汾人，臨汾市綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心工程師，大學(xué)本科。