HPLC法同時檢測食品中四種添加劑含量研究

湯振華++周紅霞

摘要：采用高效液相色譜法同時測定液體食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精鈉、安賽蜜。樣品經(jīng)鹽酸酸化，乙醚提取，甲醇和水溶解后過HLB固相萃取小柱凈化，以TC-C18（4.6×250毫米，5微米）色譜柱分離。結(jié)果顯示苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜在1.0微克/毫升～100.0微克/毫克范圍內(nèi)呈線性關(guān)系，回收率在84.24%～96.34%之間，相對標準偏差在2.03%～4.78%之間，最低檢限0.5毫克/千克，適用于同時檢測液體食品中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的含量。

關(guān)鍵詞：苯甲酸；山梨酸；糖精鈉；安賽蜜；高效液相色譜

中圖分類號： TS214 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2014）-06-30-2

1食品添加劑

苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸是我國目前常用的食品有機防腐劑；糖精鈉作為甜味劑也廣泛應(yīng)用于食品中，但過量使用會對人體產(chǎn)生毒副作用，甚至引發(fā)癌癥。因而對各類食品進行安全質(zhì)量控制尤為重要[1-3]?，F(xiàn)有的國家標準方法中，很少有同時測定幾種添加劑的方法。但在日常工作中，為節(jié)約時間提高分析效率，就要求檢測工作者研究出適合多種類型食品中多種添加劑同時測定的檢測[4-6]。不同類型食品中蛋白質(zhì)和脂肪含量的高低直接影響著檢測結(jié)果的可靠性，針對不同樣品應(yīng)用不同的前處理及檢測方法，無疑增加了檢測工作的難度及強度[7-8]。本文研究了常見液體食品中如果汁、醬油、醋等其中的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜這四種添加劑的液相色譜檢測方法。該法操作簡單快速，測定結(jié)果滿意，適合大批量樣品的快速檢測。

2 材料與方法

2.1 儀器與試劑

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 Heidolph G3；固相萃取裝置 美國Supelco；氮吹儀 Turbo Vap LV Caliper；高效液相色譜儀 AGILENT-1100。

乙醚（分析純）； 鹽酸（分析純）； 氫氧化鈉 （分析純）；甲醇（色譜純 美國TEDIA ）；醋酸銨（色譜純 美國TEDIA ）；冰乙酸（色譜純 美國TEDIA ）；HLB固相萃取小柱（30微米，Oasis公司）；MAX固相萃取小柱（30微米，Oasis公司）；C18固相萃取小柱（SP7756B，SUPELCO）

2.2 樣品的預(yù)處理

精確稱取5克樣品至50毫升離心管中，加0.5毫升 6摩爾/升鹽酸，加蓋渦旋30秒使樣品酸化，加20毫升乙醚，渦旋20秒提取，8000轉(zhuǎn)/分離心3分，取乙醚層至圓底燒瓶中旋干，加1毫升甲醇混勻，再加9毫升水渦旋混勻，加200微升6摩爾/升鹽酸混勻[2.8]，待過HLB固相萃取小柱。

2.3 樣品的凈化

用滴管將上述處理過的樣品加到HLB柱子中，用3毫升 0.6摩爾/升鹽酸淋洗， 4毫升甲醇洗脫，用氮吹管接洗脫液。將樣品氮吹干后，用1毫升3∶7甲醇∶水定容，過直徑為0.45納米的水相膜后，待測。

2.4 色譜條件

3 結(jié)果與分析

3.1 流動相的選擇

將10毫摩爾/升醋酸銨+0.05%冰乙酸的混合液與甲醇按不同比例配成流動相。實驗發(fā)現(xiàn)甲醇體積分數(shù)為25%時出峰時間太快，安賽蜜出峰時間大約在1.2分、糖精鈉出峰時間大約在2.1分，此時極性雜質(zhì)很難分開，干擾較大。甲醇體積分數(shù)15%時，糖精鈉出峰時間晚，峰展寬現(xiàn)象嚴重。也嘗試過梯度洗脫，但是梯度洗脫有時基線飄的較嚴重，而且平衡時間較長。甲醇體積分數(shù)20%時，出峰時間較合理、分離效果較好，結(jié)果見圖1，從圖1中可以看出糖精鈉的出峰時間為4.150分，安賽蜜的出峰時間為6.107分，苯甲酸的出峰時間為15.205分，山梨酸的出峰時間為24.796分，峰形和分離效果都比較好。綜合考慮，本實驗選擇甲醇的體積分數(shù)20%的流動相[4，7，8]。

圖1 100.0微克/毫升濃度混合標準品的色譜圖

Fig. 1 Chromatogram of 100.0μg/ml mixed standard substance

3.2固相萃取小柱類型的選擇

適合極性或非極性化合物的提取、富集和凈化的固相萃取小柱有C18固相萃取小柱、MAX固相萃取小柱、HLB固相萃取小柱這三種。實驗發(fā)現(xiàn)C18柱無法保留糖精鈉和安賽蜜，在上樣和水洗的過程中，糖精鈉和安賽蜜大量流出。MAX柱無法保留糖精鈉、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸，在上樣、5%氨水淋洗、甲醇淋洗的過程中，糖精鈉、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸大量流出，這有可能的原因是當pH為8～9時，這四種物質(zhì)的分子狀態(tài)不穩(wěn)定，無法保留在MAX柱上[7，8]。而HLB柱可以保留安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸這四種物質(zhì)，結(jié)果見圖2，但是在水淋洗水性雜質(zhì)的過程中一部分安賽蜜被水帶出。

3.3 HLB固相萃取小柱淋洗溶液的選擇

HLB固相萃取小柱在水淋洗的過程中有部分安賽蜜被帶出，這可能是水洗過程中使得pH值上升后安賽蜜與HLB柱結(jié)合不是很牢，因此嘗試用酸淋洗[8，9]。實驗分別用0.6摩爾/升和1.2摩爾/升L鹽酸淋洗，接廢液進樣，結(jié)果見圖3，由圖3可以發(fā)現(xiàn)0.6摩爾/升鹽酸淋洗效果最好， 安賽蜜基本無損失。

3.4線性范圍與最低檢出限

3.5 回收率和精密度

選取不含有苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的果汁、啤酒、醋為樣品，加入不同量的標準品進行加標回收實驗，結(jié)果見表 2。從表2 可以看出，該方法的回收率在84.24%～96.34%之間，RSD在2.03%～4.78%之間，回收率和精確度都在可接受范圍內(nèi)。加標量越大，RSD值越低，精密度越高[9，10]。

x

3.6 樣品檢測

實驗選取了市售的5種不同的液體樣品進行苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜含量的檢測，結(jié)果如表3所示。從表3中可以看出這5種樣品的回收率在82.31%～97.06%之間，回收率都在可接受范圍內(nèi)。這5種樣品中有4種添加了一種或一種以上的這四種添加劑。根據(jù)GB2760-2011[2]判斷，這5種產(chǎn)品都符合國標的限量要求。

4 結(jié)語

本文研究了液體類食品中同時測定苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑的方法。方法的相關(guān)性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之間，相對標準偏差在2.03%～4.78%之間，最低檢出限0.5 毫克/公斤，準確度好。運用本方法對液體食品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑進行了檢測，方法操作簡便、快捷，實用性強。

參考文獻

[1] 高彥祥.食品添加劑基礎(chǔ)[M].北京：中國輕工業(yè)社，2012（5）：45-46，168-169.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部.中國國家標準化委員會.《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》GB2760-2011.2011（4）.

[3] 蘇建國，彭進.UPLC同時測定風(fēng)味飲料中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸方法研究[J].中國食品添加劑分析測試，2011，21（5）：243-245.

[4] 陳春梅，董劉敏，師邱毅，等.超高效液相色譜法檢測飲料中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：282-283.

[5] 陳丹萍，楊富春，張寶元.超高效液相色譜法快速測定飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉[J].現(xiàn)代食品科技，2011，27（5）：601-603.

[6] 中華人民共和國衛(wèi)生部.中國國家標準化委員會.《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》GB/T 5009.29-2003.2003（8）.

[7] 劉洋，陳枚.液相色譜法可同時檢測安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸[J].食品質(zhì)量安全與檢測，2007，7 （3）：30-31.

[8] 程春梅， 李歆， 董劉敏，等.月餅中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸檢測方法的研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，21（11）：102-103.

[9] Aram Kalhori . Optimized Dispersive Liquid-Liquid Microextraction and Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid in Beverage Samples by Gas Chromatography[J] . Food Analytical Methods . 2011， Vol.5 （3）：98-100.

[10] Silva B M ， Andrade P B ， Mendes G C ， et al . Analysis of phenolic compounds in the evaluation of commercial quince jam authenticity [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry.2000，48（7）：2853-2857.

作者簡介：湯振華，昆山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，工程師，研究方向：食品安全檢測；周紅霞，南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，研究方向：食品安全檢測。

4 結(jié)語

本文研究了液體類食品中同時測定苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑的方法。方法的相關(guān)性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之間，相對標準偏差在2.03%～4.78%之間，最低檢出限0.5 毫克/公斤，準確度好。運用本方法對液體食品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑進行了檢測，方法操作簡便、快捷，實用性強。

參考文獻

[1] 高彥祥.食品添加劑基礎(chǔ)[M].北京：中國輕工業(yè)社，2012（5）：45-46，168-169.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部.中國國家標準化委員會.《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》GB2760-2011.2011（4）.

[3] 蘇建國，彭進.UPLC同時測定風(fēng)味飲料中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸方法研究[J].中國食品添加劑分析測試，2011，21（5）：243-245.

[4] 陳春梅，董劉敏，師邱毅，等.超高效液相色譜法檢測飲料中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：282-283.

[5] 陳丹萍，楊富春，張寶元.超高效液相色譜法快速測定飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉[J].現(xiàn)代食品科技，2011，27（5）：601-603.

[6] 中華人民共和國衛(wèi)生部.中國國家標準化委員會.《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》GB/T 5009.29-2003.2003（8）.

[7] 劉洋，陳枚.液相色譜法可同時檢測安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸[J].食品質(zhì)量安全與檢測，2007，7 （3）：30-31.

[8] 程春梅， 李歆， 董劉敏，等.月餅中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸檢測方法的研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，21（11）：102-103.

[9] Aram Kalhori . Optimized Dispersive Liquid-Liquid Microextraction and Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid in Beverage Samples by Gas Chromatography[J] . Food Analytical Methods . 2011， Vol.5 （3）：98-100.

[10] Silva B M ， Andrade P B ， Mendes G C ， et al . Analysis of phenolic compounds in the evaluation of commercial quince jam authenticity [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry.2000，48（7）：2853-2857.

作者簡介：湯振華，昆山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，工程師，研究方向：食品安全檢測；周紅霞，南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，研究方向：食品安全檢測。

4 結(jié)語

本文研究了液體類食品中同時測定苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑的方法。方法的相關(guān)性均在0.999以上， 回收率在84.24%～96.34%之間，相對標準偏差在2.03%～4.78%之間，最低檢出限0.5 毫克/公斤，準確度好。運用本方法對液體食品中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜、糖精鈉四種添加劑進行了檢測，方法操作簡便、快捷，實用性強。

參考文獻

[1] 高彥祥.食品添加劑基礎(chǔ)[M].北京：中國輕工業(yè)社，2012（5）：45-46，168-169.

[2] 中華人民共和國衛(wèi)生部.中國國家標準化委員會.《食品添加劑使用衛(wèi)生標準》GB2760-2011.2011（4）.

[3] 蘇建國，彭進.UPLC同時測定風(fēng)味飲料中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸方法研究[J].中國食品添加劑分析測試，2011，21（5）：243-245.

[4] 陳春梅，董劉敏，師邱毅，等.超高效液相色譜法檢測飲料中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸含量[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（5）：282-283.

[5] 陳丹萍，楊富春，張寶元.超高效液相色譜法快速測定飲料中的安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉[J].現(xiàn)代食品科技，2011，27（5）：601-603.

[6] 中華人民共和國衛(wèi)生部.中國國家標準化委員會.《食品中山梨酸、苯甲酸的測定》GB/T 5009.29-2003.2003（8）.

[7] 劉洋，陳枚.液相色譜法可同時檢測安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸[J].食品質(zhì)量安全與檢測，2007，7 （3）：30-31.

[8] 程春梅， 李歆， 董劉敏，等.月餅中安賽蜜、糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸檢測方法的研究[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報，2009，21（11）：102-103.

[9] Aram Kalhori . Optimized Dispersive Liquid-Liquid Microextraction and Determination of Sorbic Acid and Benzoic Acid in Beverage Samples by Gas Chromatography[J] . Food Analytical Methods . 2011， Vol.5 （3）：98-100.

[10] Silva B M ， Andrade P B ， Mendes G C ， et al . Analysis of phenolic compounds in the evaluation of commercial quince jam authenticity [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry.2000，48（7）：2853-2857.

作者簡介：湯振華，昆山市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，工程師，研究方向：食品安全檢測；周紅霞，南京曉莊學(xué)院生物化工與環(huán)境工程學(xué)院，研究方向：食品安全檢測。