離子束誘變選育高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥菌株

彭軼楠 鞏曉芳 祝 英 季 彬 陸 棟 楊 暉 王治業(yè)

1（甘肅科學(xué)院生物研究所 甘肅省微生物資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 蘭州730000）

2（中國科學(xué)院近代物理研究所 蘭州730000）

由于有機(jī)磷農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的廣泛使用，造成了嚴(yán)重的環(huán)境問題，直接或間接地危害人類健康［1］。我國是一個(gè)農(nóng)業(yè)大國，目前各地仍在大量施用有機(jī)磷農(nóng)藥。如何消除有機(jī)磷農(nóng)藥對環(huán)境和人類的危害，己成為事關(guān)人類健康和國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展的重大問題。利用生物或生物產(chǎn)品來降解有機(jī)磷農(nóng)藥的生物修復(fù)方法具有無毒、無殘留、無二次污染等優(yōu)點(diǎn)，是消除和降解農(nóng)藥殘留的一種安全、有效、廉價(jià)的方法，己經(jīng)成為研究農(nóng)藥降解的首選方法［2-3］。

離子束輻照是20世紀(jì)80年代初興起的一種高效誘變技術(shù)［4］。離子束輻照在生命科學(xué)研究中具有重要的獨(dú)特地位，因?yàn)樗哂谐Ｒ?guī)輻射源所沒有的優(yōu)勢：（1） 傳能線密度（Linear energy transfer，LET）大；（2）相對生物效率（Relative biological effectiveness，RBE）高；（3）損傷后修復(fù)效應(yīng)?。唬?）能量沉積的空間分辨性好；（5）氧效應(yīng)小；（6）細(xì)胞在不同時(shí)相內(nèi)對重離子束敏感性的差異小［5-7］。陳宇等［8］用40～60 keV、劑量1×1011～5×1014cm-2的N+離子注入紅霉素產(chǎn)生菌，經(jīng)篩選得到了高產(chǎn)突變菌株，搖瓶發(fā)酵后表明其產(chǎn)量提高20%；向砥等［9］用離子注入選育高產(chǎn)壯觀鏈霉菌，初步試驗(yàn)結(jié)果表明其效價(jià)較出發(fā)菌株提高了102.3%；賈國軍等［10］用離子束對北冬蟲夏草出發(fā)菌懸液進(jìn)行輻照誘變處理后，其子實(shí)體較出發(fā)菌的子實(shí)體產(chǎn)量提高了52.47%～56.08%。離子束輻照處理微生物菌種，在為食品工業(yè)、醫(yī)藥行業(yè)提供高轉(zhuǎn)化率的發(fā)酵新菌種并使之產(chǎn)業(yè)化當(dāng)中顯示出了極大的優(yōu)勢和先進(jìn)性，開創(chuàng)了微生物育種應(yīng)用的新局面［11］。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高 效 液 相 色 譜 儀 （HP1100， Agilent Technologies Co.Ltd.，USA）；配有紫外-可見光度檢測器（HP1100，Agilent Technologies Co. Ltd.，USA）；紫外-可見分光光度計(jì)（北京普析）；震蕩培養(yǎng)箱（上海一恒）。辛硫磷標(biāo)準(zhǔn)品、氧樂果標(biāo)準(zhǔn)品（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測所研制生產(chǎn)）；40%辛硫磷乳油、40%氧樂果乳油（重慶農(nóng)藥化工有限公司），其余試劑均為分析純。

1.2 菌種來源及培養(yǎng)基

枯草芽孢桿菌菌株LA來源于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心甘肅分中心。發(fā)酵培養(yǎng)基：胰蛋白胨10 g，酵母提取物5 g，NaCl 10 g，蒸餾水1 000 mL，pH=7.0。蒙金娜有機(jī)磷培養(yǎng)基：葡萄糖10 g，(NH4)2SO40.5 g，NaCl 3 g，KCl 0.3 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.03 g，MnSO4·H2O 0.03 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，CaCO35 g，酵母膏0.4 g，蒸餾水1 000 mL，pH=7.0～7.5。100 mL 的蒙金娜培養(yǎng)基加入2 g瓊脂粉，包裝，滅菌。用酒精擦凈新鮮雞蛋外殼，用解剖刀切破雞蛋兩端，溜去蛋清后將蛋黃流入已滅菌的錐形瓶中，加入約等量的無菌水，搖勻。待滅菌后的蒙金娜培養(yǎng)基冷卻至50 ℃后立即加入卵黃液，每100 mL的蒙金娜培養(yǎng)基加卵黃稀釋液1 mL 作為有機(jī)磷源，混勻后分裝于培養(yǎng)皿內(nèi)凝成平板；無機(jī)鹽培養(yǎng)基：NaCl 0.2 g，MgSO40.5 g，K2SO40.5 g，CaCO30.2 g，F(xiàn)eSO4·7H2O 0.001 g，蒸餾水1 000 mL。

1.3 12C6+離子束輻照誘變

將枯草芽孢桿菌LA在發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)期，在無菌條件下，取1.5 mL 菌液置于輻照專用皿中。輻照在中國科學(xué)院近代物理研究所重離子加速器研究裝置（Heavy ion research facility at Lanzhou，HIRFL）上 進(jìn) 行，LET 為60 keV/μm，吸收劑量分別為50 Gy、80 Gy、120 Gy、150 Gy、210 Gy、270 Gy，每個(gè)劑量分別重復(fù)3次。將輻照盒置于輻照盤上，按照不同的吸收劑量依次對菌株進(jìn)行輻照，輻照結(jié)束后，取下培養(yǎng)皿將菌液轉(zhuǎn)移至離心管中，加入甘油置于-20 ℃冰箱保存。

1.4 存活率測定

通過梯度稀釋法，將不同劑量輻照后的菌液用無菌水稀釋，取梯度稀釋濃度為10-5～l0-7的菌液100 μL 涂布于平板，每個(gè)梯度濃度重復(fù)3 次，30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48 h，統(tǒng)計(jì)平板上長出的菌落數(shù)，計(jì)算存活率。

存活率=（輻照處理平板上的活菌落數(shù)/未輻照平板上的活菌落數(shù)）×100%

1.5 解磷細(xì)菌的初篩和復(fù)篩

將不同劑量離子束輻照處理過的菌液，梯度稀釋至10-5～l0-7后，分別涂布在蒙金娜有機(jī)磷固體培養(yǎng)基平板上，倒置平放于恒溫培養(yǎng)箱中，30 ℃恒溫培養(yǎng)48～72 h。以原始菌株涂布在培養(yǎng)基為對照。選擇透明圈大于對照的菌落，純培養(yǎng)后保存。

將初篩的菌株和原始菌株活化后，接種于蒙金娜有機(jī)磷液體培養(yǎng)基中，搖床轉(zhuǎn)速200 r/min，30 ℃培養(yǎng)48 h 后結(jié)束發(fā)酵，采用農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY412-2000 規(guī)定的鉬銻鈧分光光度法測定有機(jī)磷降解量。

1.6 解磷細(xì)菌對有機(jī)磷農(nóng)藥降解的檢測

采用高效液相色譜測定有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷的殘留量［12］。吸取解磷細(xì)菌的發(fā)酵液1 mL，置于具塞刻度試管中，加入5 mL 二氯甲烷，震蕩后靜置分離，將下層有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉脫水后，取1 mL加入離心管中，氮?dú)獯蹈珊笥眉状既芤憾ㄈ葜? mL，用0.22 μm的濾膜過濾后待測［13］。色譜條件：色譜柱為150 mm×4.6 mm、5 μm的SB-C18柱；流動(dòng)相為甲醇-水（體積比7∶3）；流速為：0.4 mL/min；進(jìn)樣量為10μL；柱溫為30℃；檢測波長為254nm。

采用高效液相色譜測定有機(jī)磷農(nóng)藥氧樂果的殘留量［14］。吸取解磷細(xì)菌的發(fā)酵液5 mL于離心管中，與等體積乙酸乙酯混勻并劇烈震蕩20 min 萃?。混o置30 min 待萃取劑與水相分層后，吸取上層有機(jī)相；用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干后，加入等體積甲醇-水（體積比1∶9）溶解，用孔徑為0.22 μm的濾膜過濾后待測。色譜條件：色譜柱為3.0 mm×150 mm、3.5 μm 的ZORBAX Eclipse PlusC18 柱；流動(dòng)相為甲醇-水（體積比9∶1）；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為10 μL；柱溫為30 ℃；檢測波長為200 nm。

1.7 解磷細(xì)菌對有機(jī)磷農(nóng)藥的降解特性

制備含有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷和氧樂果濃度分別為100 μg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、600 μg/mL、800 μg/mL 和1 000 μg/mL 的 無 機(jī) 鹽 培 養(yǎng) 基，在30 ℃、200 r/min 震蕩培養(yǎng)48 h 后，測定辛硫磷和氧樂果的降解率，以確定解磷細(xì)菌對有機(jī)磷農(nóng)藥的最適降解濃度。

制備含有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷濃度為800 μg/mL和氧樂果濃度為400 μg/mL 的無機(jī)鹽培養(yǎng)基。在20 ℃、25 ℃、30 ℃、35 ℃和40 ℃下，200 r/min震蕩培養(yǎng)48 h后，測定辛硫磷和氧樂果的降解率，確定最適溫度。在培養(yǎng)基初始pH分別為4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，在30 ℃、200 r/min 震蕩培養(yǎng)48 h后，測定辛硫磷和氧樂果的降解率，確定最適初始pH。在30 ℃下分別在100 r/min、120 r/min、140 r/min、160 r/min、180 r/min、200 r/min震蕩培養(yǎng)48 h 后，測定辛硫磷和氧樂果的降解率，確定最適轉(zhuǎn)速。以2%、4%、6%、8%、10%的接種量將解磷細(xì)菌接種至培養(yǎng)基中，在30 ℃、200 r/min震蕩培養(yǎng)48 h后，測定辛硫磷和氧樂果的降解率，確定最適接種量。在30 ℃下200 r/min 震蕩培養(yǎng)，分別在發(fā)酵后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h結(jié)束發(fā)酵，測定辛硫磷和氧樂果的降解率，確定最佳降解時(shí)間。

1.8 解磷細(xì)菌突變株的遺傳穩(wěn)定性試驗(yàn)

將突變株接種于蒙金娜有機(jī)磷培養(yǎng)基中，連續(xù)傳代培養(yǎng)8 次后進(jìn)行發(fā)酵，分別測定有機(jī)磷降解量。

2 結(jié)果與分析

2.1 吸收劑量與解磷細(xì)菌存活率的關(guān)系

將輻照后的菌液梯度稀釋后涂布在平板培養(yǎng)基上，得到存活率曲線如圖1 所示。由圖1 可知，輻照至吸收劑量50 Gy 后，菌株存活率迅速降低，僅為55.2%；當(dāng)吸收劑量增加至80 Gy 時(shí)，存活率有所回升，達(dá)到70.3%；吸收劑量在150 Gy時(shí)，大量菌體致死，存活率明顯降低；吸收劑量大于150 Gy時(shí)，菌體存活率繼續(xù)下降，但下降速率緩慢，這可能是因?yàn)殡x子輻照所帶電荷沉積在生物體內(nèi)，影響了DNA堿基間的電子轉(zhuǎn)移，對DNA起了保護(hù)作用［15］。

圖1 吸收劑量與解磷細(xì)菌存活率曲線Fig.1 Dose-effect curve of survival of phosphatesolubilizing bacteria

2.2 解磷細(xì)菌的初篩

不同劑量離子束輻照處理過的菌液經(jīng)過恒溫培養(yǎng)，測定細(xì)菌的溶磷圈直徑（D）和菌落直徑（d），D/d值的變化與菌株代謝產(chǎn)物在培養(yǎng)基上蔓延程度有關(guān)系。表1列出了不同劑量下突變菌株在蒙金娜培養(yǎng)基平板上的D/d值。由表1可知，經(jīng)過72 h培養(yǎng)，降解有機(jī)磷效果優(yōu)于原始菌株的突變菌株共24株，其中劑量在50～80 Gy時(shí)共有突變菌株5 株，且D/d值均小于2.2；劑量在120～270 Gy 時(shí)共有19 株，D/d值全部大于2.2。24 株突變菌株的D/d值在2.01～3.14之間，最大的是劑量150 Gy的3號(hào)突變菌株，達(dá)3.14。經(jīng)過不同吸收劑量處理的細(xì)菌，其D/d值雖有差異，但每個(gè)劑量均出現(xiàn)突變菌株D/d值大于原始菌株，說明菌株經(jīng)過不同離子束輻照處理后，其降解有機(jī)磷的能力均有所提高。

表1 不同吸收劑量下解磷細(xì)菌的D/d值Table 1 D/d value of phosphate-solubilizing bacteria at different doses

2.3 解磷細(xì)菌的復(fù)篩

為了對解磷細(xì)菌的降解有機(jī)磷能力進(jìn)行定量分析，本研究采用鉬銻抗比色法，并利用卵磷脂作為有機(jī)磷的唯一磷來源，測定解磷細(xì)菌分解有機(jī)磷能力的大小。初篩獲得的24 株細(xì)菌的降解有機(jī)磷能力測定結(jié)果見表2。結(jié)果表明：經(jīng)不同吸收劑量處理后，突變菌株的干重差異不明顯，但降解有機(jī)磷能力存在明顯差異，吸收劑量在50～80 Gy 時(shí)，菌株對有機(jī)磷降解量均在70 mg/L 以下；吸收劑量在120～270 Gy 時(shí)，有機(jī)磷降解量有了明顯提高，其中吸收劑量為150 Gy 時(shí)的3 號(hào)突變菌株對有機(jī)磷降解量達(dá)到最高161.71 mg/L，較原始菌株解磷能力提高了2.89倍，命名為LA-1。

表2 不同劑量下細(xì)菌降解有機(jī)磷的含量Table 2 Phosphate solubilizing capacities of bacteria at different doses

2.4 解磷細(xì)菌和有機(jī)磷農(nóng)藥起始濃度的關(guān)系

在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中分別加入有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷和氧樂果，使其終濃度分別為100 μg/mL、200 μg/mL、400 μg/mL、600 μg/mL、800 μg/mL和1 000 μg/mL，在30 ℃、200 r/min 震蕩培養(yǎng)48 h后，測定辛硫磷和氧樂果的降解率，結(jié)果見圖2。原始菌株LA對辛硫磷的降解率隨著濃度的升高而迅速降低，降解率在81.4%～26.6%；與之相比，突變菌株LA-1 對不同濃度的辛硫磷降解率均明顯高于原始菌株，尤其在濃度為800 μg/mL時(shí)對辛硫磷的降解率達(dá)到93.5%，在濃度小于800 μg/mL 時(shí)降解率均在90%以上，濃度大于800 μg/mL時(shí)降解率有所降低。原始菌株LA對不同濃度的氧樂果降解率在60.5%～18.7%，均小于突變菌株LA-1；突變菌株對低濃度的氧樂果有良好的降解效果，當(dāng)濃度為400 μg/mL 時(shí)降解率為83.6%，對高濃度氧樂果的降解效果較差。

圖2 有機(jī)磷農(nóng)藥濃度對菌株LA-1降解能力的影響Fig.2 Effect of initial concentration on phoxin and omethoate degradation by strain LA-1

菌株LA-1 在以有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷、氧樂果為唯一碳源的培養(yǎng)基中均可以迅速生長，說明經(jīng)離子束輻照選育的菌株LA-1 對有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷和氧樂果均有降解效果，尤其對辛硫磷降解效果最佳。因此，選擇辛硫磷濃度800 μg/mL、氧樂果濃度400 μg/mL為最佳起始濃度。

2.5 菌株LA-1對有機(jī)磷農(nóng)藥的降解特性

在無機(jī)鹽培養(yǎng)基中分別加入有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷和氧樂果，使其濃度分別為800 μg/mL和400 μg/mL，接種原始菌株LA 和突變菌株LA-1，經(jīng)不同溫度、初始pH、轉(zhuǎn)速、接種量和不同降解時(shí)間的條件培養(yǎng)后，測定辛硫磷和氧樂果的降解率，結(jié)果見圖3。

突變菌株LA-1 在不同溫度時(shí)，對辛硫磷和氧樂果的降解率均高于原始菌株LA；在溫度較高或較低時(shí)，LA-1和LA對辛硫磷和氧樂果的降解效果均較差，當(dāng)溫度為30 ℃時(shí)，2 株菌對二者的降解效果為最佳。

在不同pH時(shí)，菌株LA-1對辛硫磷的降解率均高于菌株LA，在堿性條件下，2 株菌對辛硫磷的降解效果好于酸性條件，當(dāng)pH 為7.0 時(shí)，降解效果最佳；在堿性條件下，菌株LA-1 對氧樂果的降解率小于菌株LA，在酸性條件下，LA-1降解率高于LA，在pH 為7.0 時(shí)，2 株菌對氧樂果的降解率最高。

轉(zhuǎn)速的大小直接影響到供氧量的高低，轉(zhuǎn)速過低菌株無法與氧氣充分接觸，菌株LA-1 在不同溫度時(shí)，對辛硫磷和氧樂果的降解率均高于菌株LA，且在轉(zhuǎn)速為200 r/min 時(shí)，2 株菌對辛硫磷和氧樂果的降解效果均為最佳。

圖3 溫度（a）、pH（b）、轉(zhuǎn)速（c）、接種量（d）和培養(yǎng)時(shí)間（e）對菌株LA-1降解有機(jī)磷農(nóng)藥降解的影響Fig.3 Effects of temperature(a),pH(b),rotation speed(c),incubation ratio(d),and incubation time(e)on phoxin and omethoate degradation by strain LA-1

接種量的多少主要影響菌體的生長速度，過低則生長慢，不能形成正常的菌體量以維持正常代謝，菌株LA-1 在不同接種量時(shí)，對辛硫磷和氧樂果的降解率均高于菌株LA，在接種量為10%時(shí)，2株菌對辛硫磷和氧樂果的降解效果最佳。

微生物發(fā)酵有一個(gè)特定的發(fā)酵周期，若發(fā)酵時(shí)間較短不利于農(nóng)藥的降解，若發(fā)酵時(shí)過長菌體則較早進(jìn)入衰亡期，菌株LA-1 和LA 對辛硫磷的降解率在前24 h較緩慢，在24～48 h降解率明顯提高，48 h 后趨于穩(wěn)定，且在不同時(shí)間下，LA-1 對辛硫磷的降解率均高于LA，最佳降解時(shí)間為48 h；菌株LA-1 在不同時(shí)間下對氧樂果的降解率均高于LA，隨著時(shí)間的增長，2株菌的降解率緩慢升高，在48 h后趨于平穩(wěn)，因此48 h為最佳降解時(shí)間。

2.6 菌株LA-1的遺傳穩(wěn)定性試驗(yàn)

菌株LA-1 在蒙金娜有機(jī)磷培養(yǎng)基中連續(xù)培養(yǎng)8 代，溫度30 ℃，轉(zhuǎn)速200 r/min 培養(yǎng)48 h，測定菌株LA-1 降解有機(jī)磷能力，結(jié)果如表3 所示。結(jié)果表明，菌株LA-1 降解有機(jī)磷能力穩(wěn)定性良好，生物量均在0.30 g左右，有機(jī)磷降解量在160 mg/L左右。

表3 菌株LA-1經(jīng)8代傳代培養(yǎng)后降解有機(jī)磷的含量Table 3 Phosphate solubilizing capacities of LA-1 after 8 generations

3 討論

離子束輻照誘變育種技術(shù)作為微生物高效篩選和改良菌種的手段，具有誘變作用強(qiáng)、菌株突變率高，及突變體性能穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。一些學(xué)者認(rèn)為，低能離子輻照生物體產(chǎn)生的馬鞍型劑量效應(yīng)曲線本質(zhì)上就是低劑量超敏感性/增強(qiáng)的輻射抗性（Low dose hyperradio sensitivity/increased radioresistance， HRS/IRR）效應(yīng)［16-18］，利用該效應(yīng)誘變可能獲得理想的突變體［19］。在類芽孢桿菌（Paenibacillussp.）、釀 酒 酵 母（Saccharomyces cerevisiae）以及水稻種子中都發(fā)現(xiàn)了類似規(guī)律［20-22］。本研究中，60 keV12C6+離子的吸收劑量為50 Gy時(shí)，菌株的存活率降低，當(dāng)吸收劑量增加至80 Gy時(shí)，菌株存活率逐漸升高，而當(dāng)吸收劑量繼續(xù)增加時(shí)，存活率又隨著劑量的增加迅速降低，整個(gè)存活率曲線呈現(xiàn)“馬鞍型”，這與其他研究結(jié)論一致。本研究發(fā)現(xiàn)，吸收劑量為150 Gy 時(shí)，突變菌體最多且降解有機(jī)磷農(nóng)藥效果最好。同時(shí)為利用離子束誘變選育高效降解有機(jī)磷農(nóng)藥的突變菌株提供了參考依據(jù)。

微生物具有種類多、變異快和易操作等優(yōu)點(diǎn)，是進(jìn)行生物修復(fù)的重要生物資源。沈雨佳等［13］分離得到1 株戴爾福特菌屬（Delftiasp.）可以在7 h內(nèi)完全降解100 mg/L的辛硫磷；于婷等［23］對嗜鐵細(xì)菌枯草芽胞桿菌（Bacillus subtilis）Bs-15進(jìn)行馴化，使其在辛硫磷濃度達(dá)到800 mg/L時(shí)仍可生長；楊小蓉等［24］分離獲得1 株巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）可以在以氧樂果為唯一碳源的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中良好生長。本研究通過離子束輻照處理后得到的菌株LA-1在辛硫磷濃度為100～1 000 μg/mL時(shí)，其降解率在99.2%～78.3%；氧樂果濃度為100～1 000 μg/mL 時(shí)，降解率在98.5%～44.3%，菌株LA-1 對有機(jī)磷農(nóng)藥辛硫磷和氧樂果均有較好的降解能力。本研究為微生物降解有機(jī)磷農(nóng)藥的研究提供了菌種資源。

目前，針對有機(jī)磷農(nóng)藥降解菌在生物修復(fù)中的應(yīng)用已經(jīng)開展了廣泛的研究。張廣志等［25］分離出2 株巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）、1 株地衣芽孢桿菌（B.Licheniformis）和1 株假單胞菌屬菌（Pseudomonas）并制備成菌劑，結(jié)果表明，4種菌劑處理30 d后，對甲胺磷和甲基對硫磷的降解率均在78%以上；牛明芬等［26］篩選出2 種復(fù)合微生物菌劑，當(dāng)毒死蜱濃度為100 mg/L 時(shí)，培養(yǎng)5 d 后2 種復(fù)合菌劑的降解效率分別為81.21%和86.57%；Zhu 等［27］篩 選 出1 株 地 衣 芽 孢 桿 菌（Bacillus licheniformis） 和1 株 巨 大 芽 孢 桿 菌（Bacillus megaterium）均可降解阿特拉津，將2 株菌制備成復(fù)合菌劑時(shí)，對阿特拉津（50 mg/kg）作用7 d 后的降解率達(dá)到99.0%。因此，將本研究中突變菌株LA-1 制備成菌劑，用于降解環(huán)境中的有機(jī)磷農(nóng)藥將是下一步研究方向。在微生物降解有機(jī)磷農(nóng)藥過程中，不同品種有機(jī)磷農(nóng)藥由于其分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)的不同，對生物降解的敏感性差別很大［28-29］。農(nóng)藥的化學(xué)結(jié)構(gòu)決定了溶解性、分子排列和空間結(jié)構(gòu)、分子間的吸引和排斥特征并影響農(nóng)藥能否被微生物所降解［30］。在實(shí)際環(huán)境中，大多情況下為2種及以上農(nóng)藥的復(fù)合污染，可采用突變菌株LA-1 與其他微生物混合培養(yǎng)技術(shù)，利用菌種間協(xié)同關(guān)系篩出安全、穩(wěn)定、高效的復(fù)合菌系，充分發(fā)揮微生物的優(yōu)勢。本研究為降解有機(jī)磷農(nóng)藥的離子束誘變選育提供了參考依據(jù)，為降解有機(jī)磷農(nóng)藥菌劑的開發(fā)應(yīng)用提供了菌種資源和理論依據(jù)。