• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    溫敏性水凝膠抑制間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡并促進(jìn)旁分泌及過(guò)表達(dá)FTH的細(xì)胞MRI的實(shí)驗(yàn)研究

    2020-08-29 13:39:07賴麗莎郭媛梁瑩瑩胡曉俊盧雄
    新醫(yī)學(xué) 2020年8期
    關(guān)鍵詞:骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡磁共振成像

    賴麗莎?郭媛?梁瑩瑩?胡曉俊?盧雄

    【摘要】目的 探討過(guò)表達(dá)鐵蛋白重鏈(FTH)的間充質(zhì)干細(xì)胞(UE7T-13)進(jìn)行體外MRI的可行性,并驗(yàn)證溫敏性水凝膠HA-F127復(fù)合UE7T-13是否可抑制其凋亡、促進(jìn)細(xì)胞因子分泌。方法 構(gòu)建攜帶FTH-綠色熒光蛋白(GFP)基因的慢病毒載體并感染UE7T-13,檢測(cè)感染后的GFP陽(yáng)性率及FTH表達(dá)水平。同時(shí),HA-F127復(fù)合FTH/UE7T-13,細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(CCK8法)檢測(cè)FTH慢病毒載體感染后和(或)水凝膠復(fù)合后的UE7T-13細(xì)胞增殖能力,并進(jìn)行HA-F127復(fù)合FTH/UE7T-13的MRI。檢測(cè)HA-F127復(fù)合對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2) 誘導(dǎo)UE7T-13細(xì)胞凋亡的影響,ELISA檢測(cè)IL-10、HGF含量。結(jié)果 FTH-GFP慢病毒載體可成功感染UE7T-13,48 h熒光顯微鏡觀察GFP表達(dá)率幾乎100%,F(xiàn)TH mRNA表達(dá)提高了3倍,F(xiàn)TH蛋白可隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)增多并至5 d仍穩(wěn)定高效表達(dá)。FTH感染或HA-F127復(fù)合均不影響UE7T-13增殖能力,不影響骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外MRI。HA-F127復(fù)合UE7T-13可抑制H2O2介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,并促進(jìn)IL-10、HGF細(xì)胞因子分泌。結(jié)論 過(guò)表達(dá)FTH實(shí)現(xiàn)UE7T-13的MRI示蹤功能,溫敏性水凝膠HA-F127可在過(guò)氧化損傷環(huán)境下抑制FTH/UE7T-13的凋亡,并促進(jìn)其分泌IL-10、HGF,可為下一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。

    【關(guān)鍵詞】骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞;鐵蛋白重鏈;水凝膠;磁共振成像;凋亡

    Experimental study of role of thermo-sensitive hydrogel in inhibiting apoptosis and promoting paracrine function of MSC and MRI of MSC overexpressing FTH Lai Lisha, Guo Yuan, Liang Yingying, Hu Xiaojun, Lu Xiong. Department of Radiology, Guangzhou First Peoples Hospital, School of Medicine, South China University of Technology, Guangzhou 510180, China

    Corresponding author, Lu Xiong, E-mail: 122055667@ qq. com

    【Abstract】Objective To explore the feasibility of in-vitro magnetic resonance imaging (MRI) for UE7T-13 overexpressing ferritin heavy chain (FTH), and investigate the role of thermo-sensitive hydrogel (HA-F127) in suppressing apoptosis and promoting paracrine function of UE7T-13. Methods Lentiviral vectors carrying FTH-GFP gene were established and transfected into UE7T-13. The positive rate of GFP expression and FTH expression level in FTH/UE7T-13 cells were evaluated. FTH/UE7T-13 was encapsulated in HA-F127. Cell Counting Kit-8 (CCK-8) was used to detect the cell proliferation of UE7T-13 after transfection and encapsulation. MRI of the HA-F127-encapsulated FTH/UE7T-13 was performed. The effect of HA-F127 upon the H2O2-induced UE7T-13 apoptosis was evaluated. The contents of IL-10 and HGF were quantitatively measured by using ELISA. Results Lentiviral vectors carrying FTH-GFP gene were successfully transfected into UE7T-13. Fluorescent microscope revealed that the GFP expression rate was almost 100% at 48 hours and the expression level of FTH mRNA was up-regulated by three times. The expression of FTH protein was up-regulated over time and stably expressed for 5 days after transfection. FTH transfection and HA-F127 encapsulation exerted no effect on the proliferation ability of UE7T-13 or the MRI of mesenchymal stem cell. HA-F127 encapsulation could inhibit cell apoptosis induced by H2O2 and promote HGF and IL-10 secretion. Conclusions FTH over-expression can realize in-vitro MRI of UE7T-13. Thermo-sensitive hydrogel HA-F127 encapsulation can inhibit the apoptosis and enhance the HGF and IL-10 secretion of FTH/UE7T-13, which lay a basis for subsequent experiment.

    【Key words】Mesenchymal stem cell;Ferritin heavy chain;Hydrogel;Magnetic resonance;

    Apoptosis

    我國(guó)慢性乙型肝炎患者約2000萬(wàn),每年死于肝纖維化和肝癌的患者高達(dá)50萬(wàn),是全球晚期肝病發(fā)病率最高的地區(qū)[1]。目前尚無(wú)有效治療肝纖維化的臨床方法,間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)被認(rèn)為具有修復(fù)肝纖維化的潛能[2]。前期實(shí)驗(yàn)表明,體內(nèi)微環(huán)境影響MSC存活率,并且缺乏活體監(jiān)測(cè)MSC的有效手段是阻礙MSC治療從基礎(chǔ)研究向臨床移植治療轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵[3-4]。本研究擬構(gòu)建可活體MRI顯像的過(guò)表達(dá)鐵蛋白重鏈(FTH)的MSC(FTH/MSC),并體外證實(shí)其可實(shí)現(xiàn)MSC的MRI示蹤功能,同時(shí),通過(guò)構(gòu)建功能化水凝膠(HA-F127)改善細(xì)胞外微環(huán)境,以提高M(jìn)SC的存活率及旁分泌功能,為下一步實(shí)驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。

    材料與方法

    一、主要試劑和儀器

    DMEM-LG 培養(yǎng)基(GIBCO),F(xiàn)TH基因質(zhì)粒(廣州永諾生物科技有限公司),CCK-8細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒(日本同仁化學(xué)研究所),HGF、IL-10 ELISA試劑盒(RD公司),兔抗人FTH單克隆抗體、兔抗人GAPDH單克隆抗體(武漢博士德公司)。熒光顯微鏡(奧特BDS200-FL),酶標(biāo)儀(Diatek公司),冷凍高速離心機(jī)(Hema TGL-16R),1.5T 磁共振成像儀(Signa Infinity Twinspeed,GE公司)。人永生化骨髓MSC UE7T-13(日本Mori等[5]惠贈(zèng)):5%二氧化碳(CO2),37℃環(huán)境下,低糖DMEM培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)培養(yǎng)(圖1)。

    二、慢病毒載體構(gòu)建、病毒感染及基因表達(dá)檢測(cè)

    通過(guò)PCR進(jìn)行FTH基因和IRES-綠色熒光蛋白(GFP)基因擴(kuò)增,將二者連接后,與慢病毒載體LV003相連,構(gòu)建LV003-FTH-IRES-GFP慢病毒載體進(jìn)行測(cè)序鑒定;同時(shí)構(gòu)建GFP慢病毒載體作為陰性對(duì)照(FTH/UE7T-13及GFP/UE7T-13)。采用脂質(zhì)體法將重組載體感染人胚腎細(xì)胞293A(HEK-293A)進(jìn)行包裝,檢測(cè)病毒滴度(TU/ml)。

    將5×105 UE7T-13接種至6孔板,感染前更換新鮮培養(yǎng)液,根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)獲得的最佳感染復(fù)數(shù)(3000 pfu/細(xì)胞)加入病毒液,混勻后置于細(xì)胞培養(yǎng);于6 h更換新鮮培養(yǎng)液,每隔24 h觀察細(xì)胞狀態(tài)。

    病毒感染后48 h,采用熒光顯微鏡觀察GFP表達(dá)情況;定量PCR(Q-PCR)方法檢測(cè)FTH mRNA水平,引物如下(FTH1-F:GACTCAGAG

    GCCGCCATCAA;FTH1-R:AAGATTCGGCCA CCTCGTTG),使用2-ΔΔCt法[ΔCt = Ct(FTH) -Ct(GAPDH),△△Ct = Ct(FTH/UE7T-13) -Ct(UE7T-13)];采用蛋白免疫印跡法檢測(cè)FTH慢病毒感染UE7T-13后1、2、3、5 d的FTH蛋白表達(dá)。

    三、體外細(xì)胞MRI

    分別將不同數(shù)量(1×103、1×104、1×105、1× 106、1×107、1×108)FTH/UE7T-13細(xì)胞進(jìn)行體外MRI掃描。掃描方案:1.5 TMR,并采用內(nèi)徑12.7 cm的表面線圈,進(jìn)行SE序列T2W掃描,參數(shù):重復(fù)時(shí)間= 400 ms,回波時(shí)間= 100 ms,帶寬20.83,NEX = 2.0,F(xiàn)OV = 20 cm×20 cm,層厚2 mm,矩陣384×256。

    四、溫敏水凝膠透明質(zhì)酸(HA) -F127的制備、鑒定并復(fù)合FTH/UE7T-13

    稱取0.9 g的普朗尼克(Pluronic)F127分別和0.05、0.1、0.15、0.2、0.25 g 透明質(zhì)酸鈉混合,配制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為18%及分別含有不同濃度(1%、2%、2.3%、2.5%、3%、4%、5%)HA-F127溶液,使其可在37℃凝膠,成膠后采用掃描電鏡觀察凝膠(HA-F127)的三維結(jié)構(gòu)。

    收集生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3 ~ 5代慢病毒感染后UE7T-13,消化、離心后,用未凝固的水凝膠混合液重懸細(xì)胞沉淀,UE7T-13與HA-F127充分混合后,置于5% CO2、37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi),待凝固成膠體后,每孔再添加 200 μl含10%胎牛血清和1% 鏈霉素的 DMEM 細(xì)胞培養(yǎng)基。

    細(xì)胞實(shí)驗(yàn)根據(jù)處理情況共分4組:A組(UE7T- 13),未感染的UE7T-13;B組(GFP/UE7T-13),空白載體載GFP感染的UE7T-13;C組(FTH/UE7T-13),F(xiàn)TH慢病毒感染的UE7T-13;D組(GEL-FTH/UE7T-13),HA-F127復(fù)合的FTH/UE7T-13,即凝膠組。

    五、HA-F127復(fù)合及FTH感染對(duì)UE7T-13的成脂成骨分化能力檢測(cè)

    D組(GEL-FTH/UE7T-13)需先放入4℃冰箱中溶解凝膠,凝膠溶解后去除,并使用預(yù)冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)進(jìn)行清洗,分別向培養(yǎng)板內(nèi)加入成脂、成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基,分別采用油紅O染色、茜素紅染色,顯微鏡下觀察標(biāo)記后MSC的成脂、成骨分化情況。

    六、CCK-8檢測(cè)HA-F127復(fù)合FTH/UE7T-13的增殖率

    4個(gè)處理組各取5×103個(gè)細(xì)胞,均勻接種于96孔板,于接種后第3日進(jìn)行CCK-8,檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,以A組(UE7T-13)作為對(duì)照組,每次每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔,取平均值。

    七、HA-F127復(fù)合FTH/UE7T-13抗過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡及促進(jìn)細(xì)胞因子釋放的檢測(cè)

    將C、D組細(xì)胞接種于6孔板,24 h后加入H2O2(50 μmol/L),調(diào)整終濃度為50 μmol/L,繼續(xù)培養(yǎng)12 h;培養(yǎng)結(jié)束后,收集細(xì)胞進(jìn)行流式凋亡檢測(cè)。采用ELISA檢測(cè)C組及D組上清液的肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)、IL-10濃度:分別將2組5×105個(gè)細(xì)胞接種于6孔板,24 h后加入H2O2(50 μmol/L),繼續(xù)培養(yǎng)12 h,取細(xì)胞上清液檢測(cè)HGF、IL-10水平。

    八、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,數(shù)據(jù)以表示。兩獨(dú)立樣本采用t檢驗(yàn)進(jìn)行組間比較。多組比較采用單因素方差分析。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    結(jié)果

    一、成功構(gòu)建LV003-FTH-IRES-GFP慢病毒載體并轉(zhuǎn)染UE7T-13

    LV003-FTH-IRES-GFP慢病毒載體,并成功感染UE7T-13。感染293A 48 h后,細(xì)胞免疫法檢測(cè)病毒滴度為1×109 TU/ml。FTH慢病毒感染UE7T-13 48 h后熒光顯微鏡下觀察,GFP表達(dá)陽(yáng)性率幾乎100%(圖2A);Q-PCR證實(shí)FTH慢病毒感染UE7T-13 48 h后FTH mRNA表達(dá)水平提高了3倍(P < 0.001);FTH慢病毒感染UE7T-13,F(xiàn)TH蛋白表達(dá)隨著感染時(shí)間延長(zhǎng)增多。

    二、HA-F127可成功復(fù)合MSC,不影響細(xì)胞增殖能力

    當(dāng)F127濃度為18%,HA濃度為2.3%,HA-F127可在37℃凝固成膠(圖3A)。CCK-8顯示,4組細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P = 0.809,圖3B)。HA質(zhì)量分?jǐn)?shù)與凝膠化溫度的關(guān)系見表1。

    三、HA-F127復(fù)合FTH/UE7T-13的MRI

    HA-F127復(fù)合FTH/UE7T-13后,利用FTH的T2負(fù)性對(duì)比效應(yīng),可檢測(cè)MSC的T2負(fù)性對(duì)比,在磁共振T2加權(quán)圖像上呈低信號(hào)。并且隨著細(xì)胞數(shù)量的增加,MRI標(biāo)準(zhǔn)化信號(hào)強(qiáng)度逐漸降低(圖4)。

    四、HA-F127復(fù)合FTH/UE7T-13不影響其成骨成脂分化能力

    水凝膠包裹FTH/UE7T-13洗脫后進(jìn)行成骨成脂誘導(dǎo):①茜素紅染色顯示FTH/UE7T-13大片深紅色化合物,聚集部可見斑片狀橘紅色鈣鹽沉積(圖5A);②油紅O染色顯示FTH/UE7T-13體積增大,胞漿內(nèi)可見串珠狀紅色脂滴(圖5B)。上述證明成骨成脂誘導(dǎo)成功。

    五、HA-F127復(fù)合可抑制UE7T-13凋亡,并促進(jìn)HGF及IL-10的旁分泌

    經(jīng)H2O2處理12 h后,D組細(xì)胞早期凋亡率為5.7%,晚期凋亡率為13.9%,C組細(xì)胞早期凋亡率為7.2%,晚期凋亡率為21.7%,D組細(xì)胞凋亡數(shù)量少于C組(圖6A)。ELISA實(shí)驗(yàn)證實(shí),D組的上清液中HGF及IL-10分泌較C組增加(HGF:148.4±15.9 vs. 42.9±3.9,t = -11.1,P < 0.001;IL-10:49.51±5.4 vs. 21.2±2.6,t = -5.7,P = 0.005;圖6B)。

    討論

    干細(xì)胞移植治療終末期肝病越來(lái)越受到人們的關(guān)注[2]。然而,仍有研究指出MSC移植不能改善,甚至是促進(jìn)肝纖維化,可能是肝纖維化體內(nèi)微環(huán)境導(dǎo)致MSC活性降低或者死亡[6-7]。因此,如何改善移植后微環(huán)境,提高M(jìn)SC存活率及增強(qiáng)旁分泌能力,可能是提高M(jìn)SC移植治療肝纖維化療效的關(guān)鍵。因此本研究采用HA-F127復(fù)合MSC改善細(xì)胞生長(zhǎng)微環(huán)境,增強(qiáng)MSC在H2O2過(guò)氧化損傷環(huán)境中的存活及旁分泌功能;同時(shí),通過(guò)MRI分子影像技術(shù),實(shí)現(xiàn)MSC的活體示蹤的目的。

    本實(shí)驗(yàn)使用人永生化骨髓MSC(UE7T-13),具有無(wú)限增殖能力并維持良好的細(xì)胞狀態(tài)和功能,且同MSC一樣易于接受外源性基因的導(dǎo)入[5]。本研究選擇FTH的MRI報(bào)告基因?qū)崿F(xiàn)MSC活體示蹤的目的,因?yàn)槠淇衫脙?nèi)源性鐵離子進(jìn)行MRI,不依賴外源性鐵劑,具有相對(duì)更高的MRI靈敏度[8]。細(xì)胞基因?qū)氲霓D(zhuǎn)運(yùn)載體選擇非常重要,本研究選擇慢病毒載體,可將大片段的目的基因整合靶細(xì)胞DNA,并使目的基因長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定表達(dá),同時(shí),其引起的免疫反應(yīng)小[9-10]。構(gòu)建的LV003-FTH-IRES-GFP慢病毒表達(dá)載體感染UE7T-13 48 h后,可同時(shí)表達(dá)FTH和GFP,熒光顯微鏡下可見GFP表達(dá)幾乎達(dá)100%,Q-PCR檢測(cè)提示感染細(xì)胞中FTH mRNA的表達(dá)提高了3倍,蛋白免疫印跡法顯示感染細(xì)胞中FTH可隨著時(shí)間延長(zhǎng)表達(dá)增多,并至5 d仍穩(wěn)定高效表達(dá),并被證實(shí)可用于MSC的體外MRI,這為下一步動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供成像基礎(chǔ)。

    有研究者指出MSC治療肝纖維化療效欠佳,可能與肝纖維化微環(huán)境中存在的大量炎癥因子,直接導(dǎo)致移植的MSC大量逃逸和死亡有關(guān)[3-4, 6-7]。HA和Pluronic F127制備的水凝膠(HA-F127)不僅具有良好的生物相容性和安全性,還具有溫度敏感性,可用于常溫下注射,并在37℃呈凝膠狀,注射后能夠構(gòu)建MSC移植后生存的微環(huán)境,促進(jìn)其滯留、存活及旁分泌等功能[11-13]。本研究證實(shí),HA-F127在體外不影響FTH/UE7T-13的增殖能力,且不影響MSC的成脂成骨能力。

    在H2O2誘導(dǎo)凋亡情況下,D組細(xì)胞凋亡率低于C組;同時(shí)證實(shí)在過(guò)氧化損傷情況下,D組細(xì)胞上清液中HGF及IL-10分泌較C組明顯增多。上述結(jié)果可能與HA-F127改善細(xì)胞存在的微環(huán)境,促進(jìn)MSC的存活而進(jìn)一步增加其旁分泌功能有關(guān),同時(shí),HGF及IL-10作為抗凋亡及抗炎因子也發(fā)揮了抗過(guò)氧化而減少細(xì)胞損傷作用[14-15]。

    綜上所述,表達(dá)LV003-FTH-IRES-GFP慢病毒感染UE7T-13后可穩(wěn)定高效表達(dá)FTH,可用于MSC的體外MRI,而且不影響UE7T-13分化增殖能力;同時(shí),HA-F127可通過(guò)改善UE7T-13的微環(huán)境從而抑制MSC凋亡,提高旁分泌能力。該結(jié)果為本課題組進(jìn)一步開展水凝膠復(fù)合MSC治療肝纖維化提供了研究基礎(chǔ)。

    參 考 文 獻(xiàn)

    [1] Soriano V, Young B, Reau N. Report from the international Conference on Viral Hepatitis-2017. AIDS Rev,2018,20(1):58-70.

    [2] Guo Y, Chen B, Chen LJ, Zhang CF, Xiang C. Current status and future prospects of mesenchymal stem cell therapy for liver fibrosis. J Zhejiang Univ Sci B,2016,17(11):831-841.

    [3] Lai L, Chen J, Wei X, Huang M, Hu X, Yang R, Jiang X, Shan H. Transplantation of MSCs overexpressing HGF into a rat model of liver fibrosis. Mol Imaging Biol,2016,18(1):43-51.

    [4] Carvalho AB, Quintanilha LF, Dias JV, Paredes BD, Mann-heimer EG, Carvalho FG, Asensi KD, Gutfilen B, Fonseca LM, Resende CM, Rezende GF, Takiya CM, de Carvalho AC, Goldenberg RC. Bone marrow multipotent mesenchymal stromal cells do not reduce fibrosis or improve function in a rat model of severe chronic liver injury. Stem Cells,2008,26(5):1307-1314.

    [5] Mori T, Kiyono T, Imabayashi H, Takeda Y, Tsuchiya K, Miyoshi S, Makino H, Matsumoto K, Saito H, Ogawa S, Sakamoto M, Hata J, Umezawa A. Combination of hTERT and bmi-1, E6, or E7 induces prolongation of the life span of bone marrow stromal cells from an elderly donor without affecting their neurogenic potential. Mol Cell Biol,2005,25(12):5183-5195.

    [6] Russo FP, Alison MR, Bigger BW, Amofah E, Florou A, Amin F, Bou-Gharios G, Jeffery R, Iredale JP, Forbes SJ. The bone marrow functionally contributes to liver fibrosis. Gastroenterology,2006,130(6):1807-1821.

    [7] Mohamadnejad M, Alimoghaddam K, Bagheri M, Ashrafi M, Abdollahzadeh L, Akhlaghpoor S, Bashtar M, Ghavamzadeh A, Malekzadeh R. Randomized placebo-controlled trial of mesenchymal stem cell transplantation in decompensated cirrhosis. Liver Int,2013,33(10):1490-1496.

    [8] Vandsburger MH, Radoul M, Cohen B, Neeman M. MRI reporter genes: applications for imaging of cell survival, proliferation, migration and differentiation. NMR Biomed,2013,26(7):872-884.

    [9] Lundstrom K. Latest development in viral vectors for gene therapy. Trends Biotechnol,2003,21(3):117-122.

    [10] Vigna E, Naldini L. Lentiviral vectors: excellent tools for experimental gene transfer and promising candidates for gene therapy. J Gene Med,2000,2(5):308-316.

    [11] Ballios BG, Cooke MJ, Donaldson L, Coles BL, Morshead CM, van der Kooy D, Shoichet MS. A hyaluronan-based injectable hydrogel improves the survival and integration of stem cell progeny following transplantation. Stem Cell Reports, 2015,4(6):1031-1045.

    [12] Bumgardner GL, Gao D, Li J, Baskin JH, Heininger M, Orosz CG. Rejection responses to allogeneic hepatocytes by reconstituted SCID mice, CD4, KO, and CD8 KO mice. Trans-plantation,2000,70(12):1771-1780.

    [13] Hamrah P, Haskova Z, Taylor AW, Zhang Q, Ksander BR, Dana MR. Local treatment with alpha-melanocyte stimulating hormone reduces corneal allorejection. Transplantation,2009,88(2):180-187.

    [14] Thompson K, Maltby J, Fallowfield J, McAulay M, Millward-Sadler H, Sheron N. Interleukin-10 expression and function in experimental murine liver inflammation and fibrosis. Hepatology,1998,28(6):1597-1606.

    [15] T?gel F, Weiss K, Yang Y, Hu Z, Zhang P, Westenfelder C. Vasculotropic, paracrine actions of infused mesenchymal stem cells are important to the recovery from acute kidney injury. Am J Physiol Renal Physiol,2007,292(5):F1626-F1635.

    (收稿日期:2020-03-18)

    (本文編輯:楊江瑜)

    猜你喜歡
    骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡磁共振成像
    干細(xì)胞移植對(duì)擴(kuò)張型心肌病模型兔心肌膠原及血管影響
    普伐他汀對(duì)人胰腺癌細(xì)胞SW1990的影響及其協(xié)同吉西他濱的抑瘤作用
    彌漫性軸索損傷CT、MR動(dòng)態(tài)觀察
    椎動(dòng)脈型頸椎病的磁共振成像分析
    細(xì)胞自噬與人卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥的關(guān)系
    磁敏感加權(quán)成像(SWI)在腦內(nèi)海綿狀血管瘤診斷中的應(yīng)用
    氙同位素應(yīng)用及生產(chǎn)綜述
    科技視界(2016年18期)2016-11-03 20:32:54
    經(jīng)不同輸注途徑骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療鼠白毒傘中毒致急性肝衰竭的療效比較
    Livin和Survivin在卵巢癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究
    雷帕霉素對(duì)K562細(xì)胞增殖和凋亡作用的影響
    科技視界(2016年5期)2016-02-22 19:03:28
    a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲av成人精品一区久久| 久久99热6这里只有精品| 久久精品久久久久久久性| 超碰97精品在线观看| 国产精品一二三区在线看| 男人狂女人下面高潮的视频| 最近2019中文字幕mv第一页| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日韩中文字幕视频在线看片 | 国产精品一区二区性色av| 欧美日本视频| 国产精品久久久久久久久免| 久热久热在线精品观看| 成人无遮挡网站| 欧美一区二区亚洲| 久久久成人免费电影| 边亲边吃奶的免费视频| 晚上一个人看的免费电影| 国产精品伦人一区二区| 亚洲av在线观看美女高潮| videos熟女内射| 国产综合精华液| 午夜福利在线在线| 中文字幕av成人在线电影| 亚洲欧美日韩无卡精品| 成人国产麻豆网| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 亚洲伊人久久精品综合| 国产精品三级大全| 18禁在线播放成人免费| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 久久久久国产网址| 精品国产露脸久久av麻豆| 三级国产精品欧美在线观看| 日日啪夜夜撸| 亚洲综合色惰| 亚洲国产欧美人成| 亚洲色图综合在线观看| 一本一本综合久久| 妹子高潮喷水视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 人人妻人人看人人澡| 女人久久www免费人成看片| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲av成人精品一二三区| 2018国产大陆天天弄谢| 久久99热这里只频精品6学生| 亚洲综合精品二区| 亚洲人与动物交配视频| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 在线观看免费高清a一片| 亚洲精品日本国产第一区| 性色av一级| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 高清视频免费观看一区二区| 波野结衣二区三区在线| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲美女黄色视频免费看| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区二区| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 亚洲精品中文字幕在线视频 | 欧美性感艳星| 精品一区二区免费观看| 最黄视频免费看| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 身体一侧抽搐| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 日韩中字成人| 亚洲av福利一区| 最近中文字幕高清免费大全6| 2021少妇久久久久久久久久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 男人狂女人下面高潮的视频| 久久久久久久亚洲中文字幕| 尾随美女入室| 99视频精品全部免费 在线| 黄片无遮挡物在线观看| 成人国产av品久久久| 免费人妻精品一区二区三区视频| 草草在线视频免费看| 一级毛片电影观看| 能在线免费看毛片的网站| 午夜激情福利司机影院| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 中国美白少妇内射xxxbb| 九九在线视频观看精品| 午夜福利在线在线| xxx大片免费视频| 久久影院123| 插阴视频在线观看视频| 超碰97精品在线观看| 青春草视频在线免费观看| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品国产三级专区第一集| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品女同一区二区软件| 免费观看的影片在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 精品一品国产午夜福利视频| 国产黄片美女视频| 国产高潮美女av| 久久久成人免费电影| 成人特级av手机在线观看| 一级毛片我不卡| 欧美 日韩 精品 国产| 在线观看免费视频网站a站| h日本视频在线播放| 国产一区二区三区综合在线观看 | www.av在线官网国产| 不卡视频在线观看欧美| 99re6热这里在线精品视频| 日本免费在线观看一区| 亚洲在久久综合| 国产欧美亚洲国产| 免费av不卡在线播放| av在线蜜桃| 亚洲中文av在线| 黄色欧美视频在线观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频 | 免费看av在线观看网站| 联通29元200g的流量卡| 精品国产露脸久久av麻豆| 美女主播在线视频| 激情 狠狠 欧美| 久久久久网色| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产伦在线观看视频一区| 在线天堂最新版资源| 视频区图区小说| 午夜免费鲁丝| 最近的中文字幕免费完整| 在线观看人妻少妇| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产黄频视频在线观看| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品久久久精品久久久| 久久精品久久久久久久性| 人妻 亚洲 视频| 国产成人精品久久久久久| www.色视频.com| 天堂8中文在线网| 熟女人妻精品中文字幕| 涩涩av久久男人的天堂| 女人久久www免费人成看片| 亚洲美女黄色视频免费看| 男女边吃奶边做爰视频| 亚洲国产最新在线播放| 久热久热在线精品观看| 熟女av电影| 日本黄大片高清| 亚洲av男天堂| 男男h啪啪无遮挡| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲欧美日韩东京热| 国产真实伦视频高清在线观看| 成人漫画全彩无遮挡| 国产爱豆传媒在线观看| 26uuu在线亚洲综合色| 99九九线精品视频在线观看视频| 国产黄色视频一区二区在线观看| 99热这里只有是精品50| 国产精品一区二区在线观看99| 少妇被粗大猛烈的视频| 综合色丁香网| 青春草国产在线视频| 青春草视频在线免费观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 少妇人妻 视频| 亚洲,一卡二卡三卡| 热re99久久精品国产66热6| 人人妻人人看人人澡| 亚洲精品自拍成人| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲欧美清纯卡通| 观看免费一级毛片| 欧美日韩综合久久久久久| 免费观看a级毛片全部| 久久久国产一区二区| 丰满迷人的少妇在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡 | av线在线观看网站| 亚洲人成网站在线观看播放| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 亚洲精品色激情综合| 亚洲欧美清纯卡通| 涩涩av久久男人的天堂| 夫妻性生交免费视频一级片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 一区二区三区四区激情视频| 久久精品久久久久久久性| 尾随美女入室| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 最近的中文字幕免费完整| 国产淫语在线视频| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 人妻一区二区av| 街头女战士在线观看网站| 男女国产视频网站| 欧美xxxx性猛交bbbb| 人妻 亚洲 视频| 亚洲av日韩在线播放| 国产一区亚洲一区在线观看| 久久久久网色| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久久久久九九精品二区国产| 久久久精品94久久精品| 少妇熟女欧美另类| 人人妻人人看人人澡| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久久久人妻精品一区果冻| 人妻系列 视频| 日韩成人伦理影院| 国产精品成人在线| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 久久热精品热| 激情五月婷婷亚洲| 亚洲成人一二三区av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲国产精品专区欧美| 婷婷色综合www| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 亚洲欧美一区二区三区黑人 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 丰满乱子伦码专区| 亚洲人与动物交配视频| 日韩成人伦理影院| 日本av免费视频播放| 各种免费的搞黄视频| 在线观看美女被高潮喷水网站| 性色av一级| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲电影在线观看av| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 男女边吃奶边做爰视频| 国产免费视频播放在线视频| 女性被躁到高潮视频| 亚洲国产成人一精品久久久| 午夜免费观看性视频| 国产成人freesex在线| 久久热精品热| 久久久成人免费电影| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 丰满少妇做爰视频| 一本一本综合久久| 涩涩av久久男人的天堂| 欧美xxⅹ黑人| 欧美另类一区| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产成人精品一,二区| 亚洲色图av天堂| 全区人妻精品视频| 搡女人真爽免费视频火全软件| 精品久久久精品久久久| 亚洲欧美一区二区三区国产| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 男女免费视频国产| 色婷婷av一区二区三区视频| 美女福利国产在线 | 亚洲丝袜综合中文字幕| 色网站视频免费| 精品视频人人做人人爽| 国产淫语在线视频| h日本视频在线播放| 日本av免费视频播放| 久久精品久久精品一区二区三区| 高清欧美精品videossex| 男女午夜视频在线观看| 精品视频人人做人人爽| 国产欧美日韩精品亚洲av| 青草久久国产| 亚洲欧洲日产国产| 一区二区三区乱码不卡18| 久久亚洲精品不卡| 一二三四在线观看免费中文在| 在线观看www视频免费| 纯流量卡能插随身wifi吗| 久久天堂一区二区三区四区| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| svipshipincom国产片| 久久久久网色| kizo精华| 久久精品成人免费网站| 青春草亚洲视频在线观看| 手机成人av网站| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 在线观看免费日韩欧美大片| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 少妇粗大呻吟视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 亚洲五月婷婷丁香| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 精品免费久久久久久久清纯 | 黄色视频不卡| 成人亚洲欧美一区二区av| 免费不卡黄色视频| 欧美日韩精品网址| 日韩欧美一区视频在线观看| 最新的欧美精品一区二区| xxx大片免费视频| 欧美成人午夜精品| 人妻一区二区av| 国产三级黄色录像| 女人精品久久久久毛片| 黄片播放在线免费| 又黄又粗又硬又大视频| 国产av一区二区精品久久| 久久精品成人免费网站| 一区二区三区四区激情视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 欧美人与善性xxx| 亚洲av男天堂| 不卡av一区二区三区| a级片在线免费高清观看视频| 欧美精品一区二区免费开放| 精品高清国产在线一区| 91成人精品电影| 麻豆av在线久日| 激情五月婷婷亚洲| 狂野欧美激情性bbbbbb| 亚洲久久久国产精品| 婷婷色综合大香蕉| 又黄又粗又硬又大视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜av观看不卡| 国产99久久九九免费精品| 少妇精品久久久久久久| 高清黄色对白视频在线免费看| 久久热在线av| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 亚洲精品美女久久av网站| 午夜av观看不卡| 丝袜美足系列| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 丝袜人妻中文字幕| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲欧美色中文字幕在线| 大香蕉久久成人网| 日日爽夜夜爽网站| 日韩电影二区| 日韩av在线免费看完整版不卡| 在线观看免费高清a一片| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 视频在线观看一区二区三区| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产亚洲精品第一综合不卡| cao死你这个sao货| 一级毛片女人18水好多 | 午夜av观看不卡| 丝袜美足系列| 另类亚洲欧美激情| 婷婷色综合大香蕉| 水蜜桃什么品种好| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 日韩中文字幕视频在线看片| 国产精品免费视频内射| 久久久国产精品麻豆| 国产片内射在线| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 中国美女看黄片| 亚洲精品av麻豆狂野| 国产精品香港三级国产av潘金莲 | 国产成人精品久久二区二区免费| 国产91精品成人一区二区三区 | 亚洲国产日韩一区二区| 日本一区二区免费在线视频| 曰老女人黄片| 高清视频免费观看一区二区| 国产男人的电影天堂91| 一区二区三区激情视频| 欧美日韩综合久久久久久| 男女高潮啪啪啪动态图| 韩国精品一区二区三区| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 国产成人av激情在线播放| 最近手机中文字幕大全| tube8黄色片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| xxxhd国产人妻xxx| 久久精品国产a三级三级三级| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 1024香蕉在线观看| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 女警被强在线播放| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 国产在线观看jvid| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 桃花免费在线播放| 色播在线永久视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 日本a在线网址| 国产成人av教育| 亚洲国产精品成人久久小说| 少妇被粗大的猛进出69影院| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 老鸭窝网址在线观看| 久久久国产一区二区| 秋霞在线观看毛片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲国产精品999| 日本色播在线视频| av天堂久久9| 亚洲国产精品国产精品| 成人黄色视频免费在线看| 久久久久精品国产欧美久久久 | 青草久久国产| 美女国产高潮福利片在线看| 亚洲久久久国产精品| 国产精品欧美亚洲77777| 另类精品久久| 日韩av在线免费看完整版不卡| 91精品国产国语对白视频| 另类亚洲欧美激情| 日韩制服骚丝袜av| 飞空精品影院首页| 久久99精品国语久久久| 亚洲欧美一区二区三区久久| 国产欧美日韩精品亚洲av| 成人三级做爰电影| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 久久免费观看电影| 老司机深夜福利视频在线观看 | 国产欧美亚洲国产| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产在线免费精品| 一级毛片电影观看| 乱人伦中国视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 午夜福利视频在线观看免费| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 欧美日韩亚洲高清精品| 超色免费av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 国产精品二区激情视频| 一本色道久久久久久精品综合| 韩国精品一区二区三区| 最新的欧美精品一区二区| 国产精品久久久久久精品电影小说| 精品少妇黑人巨大在线播放| 免费av中文字幕在线| 亚洲少妇的诱惑av| 在线观看免费午夜福利视频| 在线观看免费午夜福利视频| 一级毛片女人18水好多 | 亚洲视频免费观看视频| 各种免费的搞黄视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 中国美女看黄片| 两个人看的免费小视频| 日韩视频在线欧美| 最新的欧美精品一区二区| 国产成人a∨麻豆精品| 老熟女久久久| 你懂的网址亚洲精品在线观看| xxxhd国产人妻xxx| av在线app专区| 久久性视频一级片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 热99久久久久精品小说推荐| 国产成人一区二区三区免费视频网站 | 后天国语完整版免费观看| 久久久久久久精品精品| av线在线观看网站| 青草久久国产| 国产精品久久久久成人av| 久久国产精品大桥未久av| 色视频在线一区二区三区| 欧美激情 高清一区二区三区| 黑人猛操日本美女一级片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 成人国产av品久久久| 国产一区二区三区av在线| 天堂俺去俺来也www色官网| 亚洲一区二区三区欧美精品| 水蜜桃什么品种好| 永久免费av网站大全| 国产精品熟女久久久久浪| 国产亚洲精品久久久久5区| 午夜91福利影院| 视频区欧美日本亚洲| 国产成人a∨麻豆精品| 成人亚洲精品一区在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| av有码第一页| 中文字幕高清在线视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密 | 免费黄频网站在线观看国产| 十分钟在线观看高清视频www| 午夜免费成人在线视频| 精品一区二区三区四区五区乱码 | 少妇裸体淫交视频免费看高清 | h视频一区二区三区| 日韩av免费高清视频| 午夜免费观看性视频| 欧美另类一区| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲精品国产色婷婷电影| 国产午夜精品一二区理论片| 伦理电影免费视频| 欧美变态另类bdsm刘玥| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 蜜桃在线观看..| 国产高清国产精品国产三级| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 久久国产精品人妻蜜桃| 在线精品无人区一区二区三| 可以免费在线观看a视频的电影网站| av在线老鸭窝| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 日韩视频在线欧美| 七月丁香在线播放| 午夜福利视频在线观看免费| 各种免费的搞黄视频| 日韩制服丝袜自拍偷拍| 老司机午夜十八禁免费视频| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日本午夜av视频| 一区二区三区激情视频| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲国产精品成人久久小说| 欧美在线一区亚洲| 我的亚洲天堂| 色94色欧美一区二区| 9191精品国产免费久久| 国产三级黄色录像| 9191精品国产免费久久| 国产av精品麻豆| 大片免费播放器 马上看| 国产高清不卡午夜福利| 黄色毛片三级朝国网站| 看十八女毛片水多多多| 久久青草综合色| 成年人免费黄色播放视频| 国产激情久久老熟女| 赤兔流量卡办理| 亚洲国产精品一区三区| 国产不卡av网站在线观看| 两个人看的免费小视频| 91麻豆精品激情在线观看国产 | av又黄又爽大尺度在线免费看| 婷婷成人精品国产| 最新的欧美精品一区二区| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美激情 高清一区二区三区| 激情五月婷婷亚洲| 久久av网站| 久久久久精品国产欧美久久久 | 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲欧美精品自产自拍| 黄色视频在线播放观看不卡| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 一边摸一边做爽爽视频免费| 日本av免费视频播放| 丰满饥渴人妻一区二区三| 最黄视频免费看| 午夜免费成人在线视频| 99热网站在线观看| 国产精品久久久av美女十八| 十分钟在线观看高清视频www| 日本欧美视频一区| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 久久人人97超碰香蕉20202| 国产麻豆69| 18禁观看日本| 各种免费的搞黄视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 夫妻午夜视频| 人妻 亚洲 视频| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 97在线人人人人妻| 这个男人来自地球电影免费观看| 欧美日韩av久久| 国产精品偷伦视频观看了| 国产日韩欧美视频二区| 操出白浆在线播放| 久久人人97超碰香蕉20202| 母亲3免费完整高清在线观看| 久久精品国产综合久久久| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 久9热在线精品视频| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 69精品国产乱码久久久| 人人妻,人人澡人人爽秒播 | 91精品伊人久久大香线蕉| 女人久久www免费人成看片| 一级毛片我不卡| 免费观看人在逋| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产一区二区三区av在线| 国产精品久久久久久精品古装| 黄色片一级片一级黄色片| 丝瓜视频免费看黄片| 一边亲一边摸免费视频| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲成人手机| 亚洲一码二码三码区别大吗| 热99国产精品久久久久久7| 超色免费av| 日韩制服丝袜自拍偷拍| av片东京热男人的天堂| 午夜福利乱码中文字幕| www.熟女人妻精品国产| 在线天堂中文资源库| 黄片播放在线免费|