甜葉菊葉斑病病原真菌的分離及分子生物學(xué)鑒定

崔曉霞 束紅梅 倪萬潮 何曉蘭 鞏元勇 郭書巧

摘要：為明確引起甜葉菊葉斑病的病原菌種類，2018年7月從江蘇省東臺(tái)市富安鎮(zhèn)甜葉菊生產(chǎn)基地采集病樣。采用組織分離法，獲得4種病原真菌分離物，觀察分離物的菌落形態(tài)及分生孢子形態(tài)特征并進(jìn)行致病性測(cè)定，利用MEGA 7軟件的鄰接法（neighbor-joining，簡(jiǎn)稱NJ）基于病原菌的rDNA-ITS、GAPDH、CHS-1區(qū)序列和GenBank中相關(guān)病原菌的相應(yīng)序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，確定病原菌的種類。因此，江蘇省東臺(tái)市富安鎮(zhèn)甜葉菊生產(chǎn)基地甜葉菊葉斑病的致病菌鑒定結(jié)果為炭疽菌和鏈格孢菌。目前為止，我國關(guān)于甜葉菊病害病原物鑒定方面的報(bào)道還很少，本研究首次報(bào)道并分離鑒定由炭疽菌引起的甜葉菊葉斑病。

關(guān)鍵詞：甜葉菊[Stevia rebaudiana （Bertoni）];葉斑病;病原菌鑒定;炭疽菌;鏈格孢菌

中圖分類號(hào)： S432.4+4? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1002-1302（2020）14-0117-08

甜葉菊[Stevia rebaudiana （Bertoni）]屬菊科斯臺(tái)維亞屬多年生草本植物。甜葉菊葉片富含甜菊糖苷類、黃酮類、酚類及衍生物、揮發(fā)油類等化學(xué)成分[1]。黃酮類化合物具有抗腫瘤、抗自由基和抗氧化等多種藥理活性;甜菊糖苷（steviol glycosides，簡(jiǎn)稱SGs）則是一類新型的天然甜味劑，具有高甜度、低熱量、安全無毒等特點(diǎn)[2]，逐漸成為食品和醫(yī)藥領(lǐng)域研究開發(fā)的熱點(diǎn)[3-4]。2018年筆者在江蘇省東臺(tái)市富安鎮(zhèn)的甜葉菊生產(chǎn)基地發(fā)現(xiàn)了發(fā)病的甜葉菊植株，葉片上呈現(xiàn)出大小不等的近圓形病斑，一些發(fā)病比較嚴(yán)重的植株葉片枯萎、整株死亡，到后期嚴(yán)重影響到甜葉菊的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)量。因此，分離并鑒定引起甜葉菊葉斑病的病原菌種類，對(duì)于該病害的防治具有重要意義。

炭疽菌屬（Colletotrichum spp.）真菌分布廣泛，寄主繁多，尤其在熱帶和亞熱帶農(nóng)作物以及果樹上[5]，可以引起大量經(jīng)濟(jì)作物的炭疽病，比如玉米、豆類、草莓、咖啡、辣椒、葫蘆、土豆等[6-11];常危害植物葉、花、果、莖及嫩枝，引發(fā)各種農(nóng)作物的炭疽病，影響植物的生長發(fā)育，降低作物品質(zhì)，嚴(yán)重時(shí)可造成落花、落果，甚至植株死亡，導(dǎo)致農(nóng)作物減產(chǎn)，如柿子炭疽菌（C. horii）主要侵染果實(shí)和樹枝，引起頂梢枯死，嚴(yán)重的甚至整樹枯死[12];也可危害采后果實(shí)，常造成果實(shí)腐爛，影響產(chǎn)品質(zhì)量，導(dǎo)致嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。準(zhǔn)確鑒定炭疽菌有助于對(duì)炭疽病的有效防控。由于炭疽菌的種間形態(tài)特征差異小、比較接近，若僅以形態(tài)學(xué)特征對(duì)其進(jìn)行鑒定是不夠準(zhǔn)確的，分子系統(tǒng)學(xué)作為近年來快速發(fā)展起來的一種方法，為炭疽菌的準(zhǔn)確分類提供了有力依據(jù)[13-15]。在病原真菌的鑒定中應(yīng)用最為廣泛的是核糖體內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)的rDNA-ITS序列，該DNA序列也是最先被應(yīng)用于炭疽菌分類的[16]。由于許多炭疽菌是復(fù)合種群，并且種間菌株間變異大，有多個(gè)?；突蛏硇》N，因此，ITS序列不能有效地區(qū)分炭疽菌復(fù)合種群的近緣種[17-18]。近年來，越來越多的研究報(bào)道傾向于利用多個(gè)基因序列來開展炭疽菌的鑒定和遺傳多樣性分析[19]。本研究利用內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（internal transcribed spacer，簡(jiǎn)稱ITS）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，簡(jiǎn)稱GAPDH）和幾丁質(zhì)合酶（chitin synthase，簡(jiǎn)稱CHS-1）基因的部分序列對(duì)分離自甜葉菊的炭疽菌進(jìn)行鑒定，明確引起甜葉菊葉斑病的病原菌種類。

鏈格孢菌（Alternaria spp.）是自然界中廣泛存在、危害嚴(yán)重的一種死體營養(yǎng)型植物病原真菌[20]。鏈格孢菌可引起多種植物特別是農(nóng)作物，如小麥、玉米、蘋果、梨等幾十種農(nóng)作物的真菌性病害，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[21]。在美國伊利諾斯州，曾因細(xì)極鏈格孢（A. tenuissima）引起大豆猝倒病，造成15%的產(chǎn)量損失[22]。我國各地廣泛發(fā)生的番茄、馬鈴薯等茄科蔬菜的早疫病，則是由A. solani為主的病原真菌引起的[23-24]。1982年，日本首次發(fā)現(xiàn)1種鏈格孢屬真菌A. steviae能引起甜葉菊黑斑病[25]，病斑呈黑色不規(guī)則形狀擴(kuò)展，周圍區(qū)域呈褪綠狀態(tài)。印度和伊朗也分別于2007、2015年首次分離鑒定到鏈格孢屬真菌為引起甜葉菊葉斑病的致病病原菌[26-27]。2018年崔曉霞等從發(fā)病甜葉菊葉片中分離鑒定到引起褐斑病的鏈格孢菌[28]。本研究利用形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)手段鑒定到引起甜葉菊葉斑病的致病病原菌鏈格孢菌，為深入開展該病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律、綜合防治以及抗病育種研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 葉斑病標(biāo)樣采集及病原菌分離

2018年7月從江蘇省東臺(tái)市富安鎮(zhèn)甜葉菊生產(chǎn)基地采集葉片帶有病斑的甜葉菊譜星1號(hào)病株，于江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所完成試驗(yàn)部分。剪取病健交接處大小為0.5 cm×0.5 cm的葉片，首先用無菌水沖洗3～5次，用70%乙醇表面消毒30 s，再用0.1% HgCl2處理2 min，最后用無菌水漂洗3～5次，用無菌濾紙除去葉片表面水分，將材料平鋪于添加有鏈霉素（40 μg/mL）的PDA平板培養(yǎng)基上，于黑暗條件下25 ℃培養(yǎng)3～5 d，從新長出的菌落邊緣挑取少量菌絲接種到新的PDA平板上進(jìn)一步分離純化，記錄菌落的形態(tài)學(xué)特征。

1.2 病原菌的致病性測(cè)定

選擇健康無病、無傷痕的甜葉菊葉片，在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行離體葉片接種試驗(yàn)，進(jìn)行分離菌株的致病性檢測(cè)。每個(gè)菌株均為3次重復(fù)試驗(yàn)。將葉片用70%乙醇進(jìn)行表面消毒后再用無菌水清洗，置于鋪有保濕濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)。將上述分離純化的菌株在新的PDA平板上培養(yǎng)7 d，采用菌絲塊接種法，用滅菌刀沿菌落邊緣切取3 mm×3 mm大小的菌餅，菌絲面朝下、避開主葉脈貼于已消毒處理的甜葉菊葉片背面兩側(cè)，同時(shí)接種空白的PDA培養(yǎng)基塊作為對(duì)照。接種后做好保濕，置于25 ℃條件下誘導(dǎo)發(fā)病，每天觀察并記錄發(fā)病情況;待接種后的甜葉菊葉片發(fā)病后，將病原菌重新進(jìn)行分離純化，觀察新分離物與接種菌是否相同。

1.3 病原菌分生孢子形態(tài)學(xué)觀察

將分離得到的致病菌株接種到新的PDA培養(yǎng)基上，置于28 ℃培養(yǎng)箱中黑暗培養(yǎng)8 d。取PX-2菌落上橘色的分生孢子團(tuán)溶于適量的無菌水中;PX-3 和PX-4則從菌落邊緣表面切取小塊薄的、帶菌絲的培養(yǎng)基，將其放置到載玻片上，在光學(xué)顯微鏡（Olympus CX41，Japan）下觀察分生孢子及分生孢子梗的形態(tài)并拍照，用目鏡測(cè)微尺測(cè)量分生孢子的大小。結(jié)合病原菌菌落在PDA培養(yǎng)基上的形態(tài)特征及色澤特征，參考《真菌鑒定手冊(cè)》[29]確定病原菌的種類。

1.4 病原菌的分子生物學(xué)鑒定

1.4.1 總DNA的提取

將分離得到的菌株接種到PDA培養(yǎng)基上，置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d，從培養(yǎng)基表面刮取菌絲，加入液氮迅速研磨成粉末，參照真菌基因組DNA提取試劑盒（Solarbio，China）操作說明提取菌株DNA，并將DNA樣品放于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4.2 ITS、GAPDH、CHS-1區(qū)擴(kuò)增

采用真菌核糖體基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)的通用引物ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′）和ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）、3-磷酸甘油醛脫氫酶基因GAPDH區(qū)通用引物：GDF：5′-GCCGTCAACGACCCCTTCATTGA-3′和GDR：5′-GGGTGGAGTCGTACTTGAGCATGT-3′、幾丁質(zhì)合成酶基因CHS-1區(qū)通用引物：CHS-79F：5′-TGGGGCAAGGATGCTTGGAAGAAG-3′和CHS-345R：5′-TGGAAGAACCATCTGTGAGAGTTG-3′對(duì)病原菌的基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系50 μL：2 μL DNA模板、各1 μL上下游引物、5 μL 10×PCR buffer（Mg2+ plus）、4 μL dNTP Mix（2.5 mmol）、1 μL rTaq DNA聚合酶，無菌ddH2O補(bǔ)齊至50 μL。PCR擴(kuò)增程序如下：94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸40 s，共33個(gè)循環(huán);最后72 ℃延伸10 min，4 ℃保存。

1.4.3 PCR產(chǎn)物切膠回收與克隆

取“1.4.2”節(jié)中的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物加入6×DNA loading buffer混勻，于1%瓊脂糖凝膠上檢測(cè)樣品條帶大小是否正確并特異。檢測(cè)正確的PCR產(chǎn)物使用DNA凝膠回收試劑盒（Axygen，USA）回收純化，將其與 pEASY-T1 克隆載體（TransGen，China）連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入大腸桿菌Trans1-T1感受態(tài)細(xì)胞（TransGen，China）中，經(jīng)菌落PCR鑒定后，選取陽性克隆送上海英駿生物技術(shù)有限公司進(jìn)行測(cè)序。

1.4.4 病原菌的ITS、GAPDH、CHS-1序列分析

將測(cè)得的ITS、GAPDH、CHS-1區(qū)序列在GenBank中進(jìn)行同源性搜索，分別與已報(bào)道真菌菌株的ITS、GAPDH、CHS-1區(qū)序列進(jìn)行同源性比較。利用MEGA 7軟件的鄰接法（neighbor-joining，簡(jiǎn)稱NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。將比較結(jié)果與病原菌的形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀和致病性結(jié)合起來，對(duì)病原菌進(jìn)行鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌的分離純化

在江蘇省東臺(tái)市富安鎮(zhèn)甜葉菊生產(chǎn)基地采集甜葉菊譜星1號(hào)病樣，對(duì)分離菌株的菌落形態(tài)和分生孢子形態(tài)進(jìn)行觀察，結(jié)果分離到4種病原菌，將分離菌株編號(hào)為PX-1、PX-2、PX-3、PX-4。

2.2 病原菌的培養(yǎng)特性和形態(tài)學(xué)特征

4個(gè)分離菌株在PDA培養(yǎng)基上呈近圓形等徑輻射生長，氣生菌絲初期為白色（圖1）。PX-1菌株在生長后期菌落中心出現(xiàn)淡粉色，由菌落中心向菌落四周輻射生長（可能由于培養(yǎng)條件或其他因素，未能成功培養(yǎng)到分生孢子，將在后續(xù)研究中進(jìn)一步優(yōu)化培養(yǎng)條件或利用一些外界條件刺激誘導(dǎo)分生孢子的產(chǎn)生）。PX-2菌絲排列整齊，毛絨狀，培養(yǎng)7 d后，菌落表面產(chǎn)生橘紅色分生孢子團(tuán)，分生孢子長橢圓形，表面光滑，無色，單胞，圓柱形或橢圓形，多數(shù)兩端鈍圓，大小為（15.0～226） μm×（4.0～6.5） μm（圖2-A）。PX-3和PX-4氣生菌絲較為發(fā)達(dá)，生長后期逐漸變?yōu)椴煌潭鹊幕液谏|(zhì)呈現(xiàn)不同類型的同心輪紋，在PDA平板上培養(yǎng)8 d的菌落產(chǎn)生大量的分生孢子，顯微鏡下觀察，分生孢子單生或成鏈，形態(tài)多樣，多為近球形、倒棒狀或倒梨形，大小為（19.7～47.6） μm×（6.7～15.8） μm（圖2-B、圖2-C）。根據(jù)這些形態(tài)學(xué)特征，參照魏景超的《真菌鑒定手冊(cè)》[29]及張?zhí)煊畹摹吨袊婢尽穂19]初步判斷PX-1和PX-2為炭疽菌、PX-3和PX-4為鏈格孢屬霉菌。

2.3 病原菌致病性測(cè)定

采用離體葉片接種方法，對(duì)葉片發(fā)病情況進(jìn)行觀察統(tǒng)計(jì)。由圖3可知，4個(gè)分離的菌株對(duì)甜葉菊葉片致病程度存在一定的差異，PX-1和PX-2菌株侵染葉片后病斑擴(kuò)展速度快，在接種后72 h發(fā)病部位出現(xiàn)水漬狀淺褐色病斑;PX-3侵染后發(fā)病程度相對(duì)較輕，發(fā)病位置呈黑褐色;而PX-4在接種后的第7天病斑仍局限于葉片的創(chuàng)傷位點(diǎn)。因此，引起甜葉菊葉片葉斑病的PX-1和PX-2菌株的致病力較強(qiáng)，PX-3對(duì)甜葉菊的致病力則相對(duì)較弱，而PX-4菌株的致病力則相對(duì)最弱。從接種發(fā)病的葉片病斑上刮取少量的病組織鏡檢，可觀察到與接種菌株一致的菌絲和分生孢子。對(duì)發(fā)病組織進(jìn)行病原菌的再分離， 同樣獲得與接種病原真菌菌落形態(tài)一致的培養(yǎng)物，完成柯赫氏法則（Koch postulates）致病性檢測(cè)。因此，接種所用的菌株是引起甜葉菊葉斑病的病原菌。

2.4 病原菌的分子鑒定

2.4.1 菌株P(guān)X-1和PX-2的分子鑒定

以菌株P(guān)X-1和PX-2的基因組DNA為模板，利用真菌rDNA-ITS區(qū)通用引物ITS1和ITS4分別擴(kuò)增得到616、613 bp大小的ITS序列;利用GAPDH區(qū)通用引物GDF和GDR分別擴(kuò)增得到252、280 bp大小的GAPDH序列;利用CHS-1區(qū)通用引物CHS-79F和CHS-345R分別擴(kuò)增得到299、299 bp大小的CHS-1序列（圖4）。PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果表明，PX-1 和PX-2菌株間的rDNA-ITS、GAPDH、CHS-1序列之間存在差異。將序列在NCBI GenBank中進(jìn)行同源性搜索，PX-1和PX-2與炭疽菌屬（Colletotrichum）真菌具有高度同源性，因此將分離到的真菌歸屬于炭疽菌。

利用rDNA-ITS區(qū)序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，PX-1 菌株與MG600754、KP743027等（Colletotrichum sojae和Colletotrichum gloeosporioides）聚為一類;PX-2 菌株則與MH863841和MF540883等（Colletotrichum gloeosporioides和Colletotrichum fructicola）相似度較高，聚為一類（圖5）。在此基礎(chǔ)上利用GAPDH和CHS-1區(qū)序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，發(fā)現(xiàn)PX-1菌株與MG600865等（Colletotrichum sojae）的序列相似度達(dá)到100%，PX-2菌株與MF540891及MG657351等（Colletotrichum fructicola）的序列相似度達(dá)到100%（圖6、圖7）。結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察，進(jìn)一步確認(rèn)引起甜葉菊葉斑病的病原菌PX-1和PX-2為大豆炭疽菌（Colletotrichum sojae）和果生炭疽菌（Colletotrichum fructicola）。

2.4.2 菌株P(guān)X-3和PX-4的分子鑒定

以菌株P(guān)X-3和PX-4的基因組DNA為模板，利用真菌rDNA-ITS區(qū)通用引物ITS1和ITS4分別擴(kuò)增得到571、572 bp 大小的ITS序列（圖8）， PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果表明，PX-3和PX-4菌株間的rDNA-ITS序列之間存在微小的差異。將序列在[KG*5]NCBI[KG*3]GenBank中進(jìn)行同源性搜索，PX-3、PX-4與鏈格孢菌屬（Alternaria）真菌具有高度同源性，因此將分離到的真菌歸屬于鏈格孢菌。利用rDNA-ITS區(qū)序列構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹，PX-3和PX-4菌株與KY814632.1和KY075667.1等（Alternaria alternata）聚為一類（圖9）。結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察，進(jìn)一步確認(rèn)引起甜葉菊葉斑病的病原菌PX-3和PX-4為鏈格孢菌（Alternaria alternata）。

3 討論與結(jié)論

甜葉菊提取物甜菊糖苷作為甜味食品添加劑在南美已使用了數(shù)個(gè)世紀(jì)[30]，歐盟和美國也已開始批準(zhǔn)使用[31]。甜菊糖苷同時(shí)具有一定的藥用價(jià)值[32]，例如對(duì)降血壓、增強(qiáng)胰島β細(xì)胞功能治療2型糖尿病以及清除人體自由基等功能[31，33-34]。我國的甜葉菊自20世紀(jì)70年代南京中山植物園從日本引入試種成功后，80年代初向全國各地推廣種植[35]。目前，我國關(guān)于甜葉菊病害已有相關(guān)報(bào)道。2008年，盧清會(huì)闡述了甜葉菊的病害有白絹病、立枯病、葉斑病和花葉病毒病，并提出了相應(yīng)的防治方法[36]。近年來，甘肅河西走廊地區(qū)甜葉菊育苗期的病害呈逐年加重趨勢(shì)，猝倒病、立枯病和葉斑病成為育苗期最容易發(fā)生的3大病害，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[37]。2017年，筆者在江蘇省東臺(tái)市富安鎮(zhèn)甜葉菊生產(chǎn)基地調(diào)查發(fā)現(xiàn)甜葉菊葉片上呈現(xiàn)不同程度的病斑，發(fā)病嚴(yán)重的植株葉片全部枯萎。經(jīng)病原菌的分離、培養(yǎng)、純化，共分離得到4株病原真菌，為炭疽菌屬和鏈格孢屬真菌。致病性測(cè)定結(jié)果發(fā)現(xiàn)，炭疽菌PX-1和PX-2的對(duì)甜葉菊葉片的致病力最強(qiáng)，鏈格孢菌PX-3相對(duì)次之，鏈格孢菌PX-4的致病力則相對(duì)最弱。在下一步的研究中，將在試驗(yàn)圃對(duì)這幾種病原菌進(jìn)行混合組合接種，篩選高效的抑菌藥劑。

近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，分子生物學(xué)技術(shù)在真菌的研究中也得到了廣泛應(yīng)用。rDNA序列由于不同區(qū)域進(jìn)化速度不同，因此可用于不同分類水平的研究[38]。特別是rDNA的ITS區(qū)段既具保守性，又在科、屬、種水平上均有特異性序列，通過對(duì)ITS區(qū)進(jìn)行測(cè)序來診斷和檢測(cè)植物病原菌，尤其是對(duì)植物病原真菌的分子檢測(cè)已越來越被廣泛應(yīng)用[39]。許鳳仙等在對(duì)中華常春藤黑腐病病原菌分離鑒定研究中采用了形態(tài)學(xué)特征觀察的方法，并結(jié)合柯赫氏法則和rDNA-ITS序列分析進(jìn)行了驗(yàn)證，明確引起中華常春藤黑腐病的病原菌為葡萄座腔菌[40]。2018年崔曉霞等利用病原菌形態(tài)學(xué)觀察結(jié)合rDNA-ITS序列分子生物學(xué)分析的方法，從甜葉菊守田3號(hào)品種中分離鑒定了引起甜葉菊褐斑病的病原菌為鏈格孢和細(xì)極鏈格孢菌[29]。ITS序列為多數(shù)物種的鑒定提供了有力工具，但對(duì)炭疽菌屬真菌系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建的支持率較低，具有一定的局限性[41-42]。多基因涵蓋的信息比單基因多，系統(tǒng)發(fā)育分析能更準(zhǔn)確地鑒定炭疽菌的種類[18]。李沛利等通過構(gòu)建多基因（ITS、ACT、GAPDH、CHS-1、TUB2、CAL）系統(tǒng)發(fā)育樹鑒定出四川省鵝掌柴炭疽病的致病病原菌為暹羅炭疽菌（Colletotrichum siamense）[43]。為鑒定貴州省油茶炭疽病的病原菌種類，帥小春等采用ITS-CAL-GAPDH-ACT-TUB等5個(gè)基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征鑒定，明確貴州省油茶炭疽病的病原菌種類[44]。

在本研究中，對(duì)引起甜葉菊譜星1號(hào)葉斑病的病原菌進(jìn)行了分離鑒定，采用柯赫氏法則進(jìn)行驗(yàn)證，利用ITS、GAPDH和CHS-1基因序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹，結(jié)合菌落形態(tài)和分生孢子形態(tài)特征，鑒定到引起甜葉菊葉斑病的2株炭疽菌：大豆炭疽菌（Colletotrichum sojae）和果生炭疽菌（Colletotrichum fructicola）;利用rDNA-ITS序列分子生物學(xué)分析結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察的方法同時(shí)也鑒定到2株鏈格孢菌（Alternaria alternata）也可以引起甜葉菊葉斑病。本研究利用分子生物學(xué)手段結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察的方法對(duì)引起甜葉菊葉斑病的病原菌進(jìn)行鑒定，為該病的診斷和防治提供理論依據(jù)。

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收稿日期：2019-09-02

基金項(xiàng)目：江蘇省博士后科研資助計(jì)劃（編號(hào)：2018K224C）;江蘇省科技計(jì)劃（編號(hào)：SZ-SQ2017019）。

作者簡(jiǎn)介：崔曉霞（1989—），女，甘肅定西人，博士，助理研究員，從事大豆抗病育種以及甜葉菊田間病害鑒定等方面的研究。E-mail：cuixiaoxia7@163.com。

通信作者：郭書巧，博士，副研究員，從事特色經(jīng)濟(jì)作物的代謝調(diào)控研究。Tel：（025）84390290，E-mail：gsq925@163.com。