• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    多囊卵巢綜合征大鼠卵巢中kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)的表達(dá)及作用研究

    2020-08-27 12:58:32劉冉冉駱倩倩孫曉娟
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2020年19期
    關(guān)鍵詞:多囊卵巢綜合征

    劉冉冉 駱倩倩 孫曉娟

    [摘要] 目的 建立多囊卵巢綜合征(PCOS)大鼠模型,探討卵巢組織中kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)表達(dá)及作用。 方法 孕10 d的Wistar大鼠20只,其雌性后代60只,根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為PCOS組和正常組,每組30只。PCOS組給予來曲唑和羧甲基纖維素(CMC)連續(xù)灌胃21 d,正常組給予等體積的CMC灌胃。造模結(jié)束后檢測兩組大鼠體重參數(shù)和血清激素水平;HE染色檢測卵巢組織形態(tài)學(xué)改變;免疫組織化學(xué)染色和qRT-PCR檢測卵巢組織中kisspeptin和kiss1r的表達(dá)。 結(jié)果 與正常組比較,PCOS組大鼠的體重、腹膜后脂肪含量、卵巢重量均增加,血清黃體生成素、卵泡刺激素和睪酮水平均升高(P < 0.05或P < 0.01)。與正常組比較,PCOS組大鼠卵巢中kiss1-mRNA表達(dá)降低(P < 0.05);兩組大鼠卵巢中kiss1r-mRNA表達(dá)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。PCOS組大鼠卵巢具有典型的多囊樣改變。 結(jié)論 PCOS大鼠卵巢可見kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)的低表達(dá),可能在PCOS的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

    [關(guān)鍵詞] 多囊卵巢綜合征;Kisspeptin/kiss1r系統(tǒng);卵巢;來曲唑

    [中圖分類號] R711.75 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A ? ? ? ? ?[文章編號] 1673-7210(2020)07(a)-0016-04

    [Abstract] Objective To establish a rat model of polycystic ovary syndrome (PCOS) and investigate the expression and function of kisspeptin/kiss1r system in ovarian tissue. Methods Twenty Wistar rats at the 10th day of gestation were divided into PCOS group and normal group according to the random number table method, with 30 rats in each group. In PCOS group, Letrozole and carboxy methyl cellulose (CMC) were administered continuously for 21 days, while in normal group, CMC of equal volume was administered. Body weight parameters and serum hormone levels of two groups were measured after model establishment; the ovarian histomorphology was detected by HE staining; the expression of kisspeptin and kiss1r in the ovarian tissue was detected by immunohistochemistry and qRT-PCR. Results Compared with normal group, the weight, the content of retroperitoneal fat and the weight of ovary in PCOS group were increased, and the levels of serum luteinizing hormone, follicle stimulating hormone and testosterone were increased (P < 0.05 or P < 0.01). Compared with normal group, the expression of kiss1-mRNA in the ovaries of PCOS group was decreased (P < 0.05). There was no significant difference in kiss1r-mRNA expression between two groups (P > 0.05). PCOS group showed typical polycystic changes in ovaries. Conclusion Down-regulation of kisspeptin/kiss1r system in the ovaries of PCOS rats may play an important role in the occurrence and development of PCOS.

    [Key words] Polycystic ovarian syndrome; Kisspeptin/kiss1r system; Ovary; Letrozole

    多囊卵巢綜合征(PCOS)是臨床上最常見的內(nèi)分泌紊亂性疾病,多伴有卵泡發(fā)育異常和雄激素增多[1],造成閉經(jīng)、不育、多毛、肥胖等[2]。由于發(fā)病率高,治療困難,增加腫瘤[3]的發(fā)生,PCOS成為重要的研究課題。目前對PCOS病因的研究較多,大多與下丘腦-垂體-性腺軸有關(guān)。kisspeptin/kiss1受體(kiss1r)系統(tǒng)是此軸最強(qiáng)有力的影響因素[4]。kisspeptin是由kiss1基因編碼的神經(jīng)肽前體,可以結(jié)合并激活其受體kiss1r,并發(fā)揮作用。食源性肥胖大鼠下丘腦中的kisspeptin表達(dá)減少[5],導(dǎo)致生殖障礙,營養(yǎng)不良、糖尿病等均會引起下丘腦kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)的異常表達(dá)[6]。在PCOS大鼠中,下丘腦kiss1基因和kisspeptin表達(dá)均有顯著改變[7-8]。本研究主要探究kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)在多囊卵巢中的作用,以了解其發(fā)病機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    Wistar大鼠購自濟(jì)南朋悅實驗動物繁育有限公司,生產(chǎn)許可證號:SCXK(魯)20190003,實驗設(shè)計和開展情況符合濱州醫(yī)學(xué)院煙臺附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的倫理要求。病理圖像分析儀(萊卡);Rotor Gene-3000PCR儀(德國QIAGEN);酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒[上海酶聯(lián)生物,黃體生成素(LH):002860;卵泡刺激素(FSH):002872;睪酮(T):003368];免疫組織化學(xué)染色試劑盒(Bioworld,05100);PCR試劑盒(Roche,11636103001)。

    1.2 分組及模型制備

    孕10 d的Wistar大鼠20只,產(chǎn)后60只雌鼠按1~60編號,依據(jù)隨機(jī)數(shù)字表法分為PCOS組和正常組。PCOS組30只大鼠每日用來曲唑(1 mg/kg)溶于1%的羧甲基纖維素(CMC)溶液連續(xù)灌胃21 d;正常組30只大鼠給予等體積的CMC溶液灌胃。造模結(jié)束后,大鼠的激素改變、卵巢的典型多囊樣與臨床PCOS患者一致,表明造模成功。

    1.3 動物取材

    造模結(jié)束后,稱重,測身長(鼻尖至肛門的距離),麻醉,心尖部取血,得血清備用;剝離腹膜后脂肪稱重;部分大鼠取新鮮卵巢組織;剩余大鼠用多聚甲醛心內(nèi)灌流固定卵巢組織,備用。

    1.4 ELISA檢測血清激素水平

    按ELISA試劑盒檢測血清LH、FSH和T水平。

    1.5 蘇木精-伊紅(HE)染色檢測卵巢形態(tài)學(xué)改變

    將多聚甲醛固定后的卵巢,按照步驟,經(jīng)脫水、透明、包埋、切片、HE染色等一系列過程,觀察卵巢的形態(tài)學(xué)改變。

    1.6 免疫組織化學(xué)染色檢測卵巢中kisspeptin和kiss1r的表達(dá)

    將石蠟包埋的卵巢組織蠟塊,經(jīng)切片、脫蠟至水。一抗選用兔抗kisspeptin多克隆抗體,兔抗kiss1r多克隆抗體,二抗選用生物素化羊抗兔IgG(1∶200),DAB顯色,經(jīng)脫水、透明、封片、鏡檢。

    1.7 qRT-PCR檢測卵巢中kiss1-mRNA和kiss1r-mRNA的表達(dá)

    新鮮卵巢液氮研磨提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄得cDNA。制備β-actin、kiss1和kiss1r引物序列。kiss1:上游5′-CACCTGTGGTGAACCCTGAA-3′,下游5′-GACGAAT-TTGCACATGAAGTCTCC-3′;kiss1r:上游5′-AGCAC-ATGCAGACCGTCACC-3′,下游5′-GACGAATTTGC-ACATGAAGTCTCC-3′。預(yù)變性95℃×30 s,1個循環(huán);PCR反應(yīng):95℃×5 s,60℃×20 s,40個循環(huán)。以β-actin為內(nèi)參,采用Rotor Gene-3000進(jìn)行擴(kuò)增定量,以相對定量法分析數(shù)據(jù)。

    1.8 統(tǒng)計學(xué)方法

    采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩組比較采用t檢驗。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 兩組大鼠體重參數(shù)和血清激素水平比較

    與正常組比較,PCOS組大鼠的體重、腹膜后脂肪含量、卵巢重量均增加(P < 0.05或P < 0.01),血清LH、FSH和T水平均升高(P < 0.05或P < 0.01)。見表1。

    2.2 兩組大鼠卵巢的形態(tài)學(xué)改變

    正常組大鼠卵巢可見多個卵泡,卵母細(xì)胞、透明帶和放射冠清晰可見,次級卵泡、成熟卵泡均正常;PCOS組大鼠卵巢可見數(shù)十個囊狀擴(kuò)張的卵泡,卵母細(xì)胞和放射冠減少或消失。見圖1。

    2.3 兩組大鼠卵巢中kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)的表達(dá)

    卵巢中kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)在胞質(zhì)中呈棕黃色著色,邊界清晰。kisspeptin主要表達(dá)于顆粒細(xì)胞和膜細(xì)胞,kiss1r的陽性信號多見于顆粒細(xì)胞。分析顯示,與正常組比較,PCOS組大鼠卵巢組織kisspeptin和kiss1r陽性細(xì)胞數(shù)量減少,胞質(zhì)著色淡,含量均減少。見圖2(封四)。

    2.4 兩組大鼠卵巢中kiss1-mRNA和kiss1r-mRNA的表達(dá)

    與正常組比較,PCOS組大鼠卵巢中kiss1-mRNA表達(dá)降低(P < 0.05);兩組大鼠卵巢中kiss1r-mRNA表達(dá)比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P > 0.05)。見圖3。

    3 討論

    PCOS是無排卵性不孕的最常見原因,發(fā)病率為25%~30%[9],多見閉經(jīng)、多毛、肥胖、不孕和卵巢多囊樣改變。本實驗用來曲唑構(gòu)建大鼠的PCOS模型,來曲唑可抑制芳香化酶的功能,減弱睪酮和雄烯二酮轉(zhuǎn)變成雌二醇和雌酮[10]的能力,導(dǎo)致雄激素水平升高。卵巢中高雄激素使卵泡發(fā)育停滯,無優(yōu)勢卵泡出現(xiàn)和持續(xù)性不排卵,是本課題中建立PCOS模型的理論基礎(chǔ)。

    造模結(jié)束后,大鼠的體重、腹膜后脂肪和卵巢重量顯著增加,血清LH、FSH和T水平升高,HE染色后可見卵巢結(jié)構(gòu)紊亂,呈典型的多囊樣,因此用來曲唑造??梢宰鳛镻COS模型進(jìn)行后續(xù)研究。

    PCOS的致病機(jī)制尚不能確定,多與HPG軸的功能紊亂有關(guān)。kisspeptin是HPG軸最直接的啟動點[11]。營養(yǎng)不良[12]、禁食[13]、糖尿病[14]等均會引起下丘腦kiss1-mRNA的表達(dá)減少。PCOS大鼠的下丘腦kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)中蛋白和基因表達(dá)有明顯改變,可能通過調(diào)節(jié)HPG軸的功能發(fā)揮作用。卵巢組織局部的kiss-peptin不僅在下丘腦發(fā)揮作用,而且還能調(diào)節(jié)卵巢的功能[15]。向體外培養(yǎng)卵巢黃體細(xì)胞加入外源性kissp-eptin,孕酮升高[16],同時激活Erkl/2信號途徑[17],由此證明,kisspeptin可直接影響卵巢功能。PCOS組大鼠卵巢組織中kisspeptin和kiss1r的低表達(dá),可能導(dǎo)致卵泡的生長發(fā)育存在明顯缺陷[18]。kisspeptin處理黃素化的顆粒細(xì)胞后,促使顆粒細(xì)胞增殖分化,分泌雌激素和孕激素增加[19]。在PCOS大鼠卵巢中,顆粒細(xì)胞數(shù)量減少或功能減低,可能與低表達(dá)的kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)有關(guān)。有研究將kisspeptin用于誘導(dǎo)排卵[20],發(fā)現(xiàn)其能減少促排卵過程中卵巢過度刺激綜合征的發(fā)生。

    綜上所述,kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)與PCOS的發(fā)生、發(fā)展存在潛在的聯(lián)系,為深入研究PCOS的發(fā)病機(jī)制提供一定的理論基礎(chǔ),并為臨床治療提供有利線索。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] ?Di Pietro M,Pascuali N,Parborell F,et al. Ovarian angiogenesis in polycystic ovary syndrome [J]. Reproduction,2018,155(5):R199-R209.

    [2] ?王秋毅,黃薇.重視多囊卵巢綜合征代謝紊亂問題[J].實用婦產(chǎn)科雜志,2018,34(8):564-566.

    [3] ?畢紅,李衛(wèi)文,曹森楊,等.多囊卵巢綜合征患者血清腫瘤壞死因子-α和抗苗勒管激素水平及其與疾病的相關(guān)性分析[J].婦女保健,2018,33(19):4363-4365.

    [4] ?Skorupskaite K,George JT,Anderson RA. The kisspeptin-GnRH pathway in human reproductive health and disease [J]. Hum Reprod Update,2014,20(4):485-500.

    [5] ?劉冉冉,張洪芹.Kisspeptin/kiss1r系統(tǒng)在營養(yǎng)性肥胖雄性大鼠下丘腦弓狀核的表達(dá)以及對下丘腦-垂體-睪丸軸的影響[J].中華男科學(xué)雜志,2014,20(9):792-797.

    [6] ?Tng EL. Kisspeptin signalling and its roles in humans [J]. Singapore Med J,2015,56(12):649-656.

    [7] ?Aliabadi E,Namavar MR,Mortezaee K. Kisspeptin expression features in the arcuate and anteroventral periventricular nuclei of hypothalamus of letrozole-induced polycystic ovarian syndrome in rats [J]. Arch Gynecol Obstet,2017,296(5):957-963.

    [8] ?駱倩倩,劉冉冉,張冬梅,等. Kisspeptin/Kiss1r系統(tǒng)在多囊卵巢綜合癥大鼠下丘腦弓狀核的表達(dá)[J].中國計劃生育學(xué)雜志,2014,22(5):304-308.

    [9] ?劉麗偉.C-FOS、STAT3、Ub在PCOS患者著床窗口期子宮內(nèi)膜的表達(dá)及意義[D].鄭州:鄭州大學(xué),2016.

    [10] ?Kakadia N,Patel P,Deshpande S,et al. Effect of Vitex negundo L. seeds in letrozole induced polycystic ovarian syndrome [J]. J Tradit Complement Med,2018,9(4):336-345.

    [11] ?Trevisan CM,Montagna E,de Oliveira R,et al. Kisspeptin/GPR54 system:what do we know about its role in human reproduction? [J]. Cell Physiol Biochem,2018,49(4):1259-1276.

    [12] ?Roa J,Barroso A,Ruiz-Pino F,et al. Metabolic regulation of female puberty via hypothalamic AMPK-kisspeptin signaling [J]. Proc Natl Acad Sci U S A,2018,15(45):E10758-E10767.

    [13] ?Harter Campbell JL,Kavanagh GS,Smith JT. The role of kisspeptin neurons in reproduction and metabolism [J]. J Endocrinol,2018,238(3):R173-R183.

    [14] ?Dudek M,Ko?覥odziejski PA,Pruszyńska-Oszma?覥ek E,et al. Effects of high-fat diet-induced obesity and diabetes on Kiss1 and GPR54 expression in the hypothalamic-pituitary-gonadal (HPG) axis and peripheral organs (fat,pancreas and liver) in male rats [J]. Neuropeptides,2016, 56:41-49.

    [15] ?Hu KL,Zhao H,Chang HM,et al. Kisspeptin/kisspeptin receptor system in the ovary [J]. Front Endocrinol (Lausanne),2018,8:365.

    [16] ?Maranesi M,Petrucci L,Leonardi L,et al. Kisspeptin/kisspeptin receptor system in pseudopregnant rabbit corpora lutea:presence and function [J]. Sci Rep,2019,9(1):5044.

    [17] ?Peng J,Tang M,Zhang BP,et al. Kisspeptin stimulates progesterone secretion via the Erk1/2 mitogen-activated protein kinase signaling pathway in rat luteal cells [J]. Fertil Steril,2013,99(5):1436-1443.

    [18] ?Liu H,Xu G,Yuan Z,et al. Effect of kisspeptin on the proliferation and apoptosis of bovine granulosa cells [J]. Anim Reprod Sci,2017,185:1-7.

    [19] ?郭威.Kisspeptin參與多嚢卵巢綜合征患者顆粒細(xì)胞孕激素分泌的調(diào)節(jié)[D].鄭州:鄭州大學(xué),2015.

    [20] ?翟君鈺.Kisspeptin與卵巢功能及排卵的關(guān)聯(lián)性研究[D].濟(jì)南:山東大學(xué),2014.

    (收稿日期:2019-08-08)

    猜你喜歡
    多囊卵巢綜合征
    坤泰膠囊聯(lián)合炔雌醇環(huán)丙孕酮片治療多囊卵巢綜合征的臨床效果
    二甲雙胍+克羅米芬治療多囊卵巢綜合征合并不孕的效果研究
    非肥胖多囊卵巢綜合征患者的代謝評估
    防治“多囊卵巢綜合征”從娃娃抓起
    家庭用藥(2016年9期)2016-12-03 08:30:03
    胰島素抵抗與非胰島素抵抗多囊卵巢綜合征的臨床治療分析
    青春期多囊卵巢綜合征經(jīng)達(dá)英—35及媽富隆治療的效果觀察
    紫草湯治療濕熱瘀阻型多囊卵巢綜合征的臨床療效
    孫躍農(nóng)健脾補腎化痰方治療多囊卵巢綜合征經(jīng)驗
    坤泰膠囊聯(lián)合來曲唑片對多囊卵巢綜合征患者內(nèi)分泌和排卵功能的影響研究
    用于治療多囊卵巢綜合征的中藥藥理學(xué)作用機(jī)制研究進(jìn)展
    美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲av二区三区四区| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 2021少妇久久久久久久久久久| 久热久热在线精品观看| 色5月婷婷丁香| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲av成人精品一二三区| 舔av片在线| 亚洲欧美日韩高清专用| 乱码一卡2卡4卡精品| 亚洲国产精品合色在线| 人人妻人人澡欧美一区二区| 国产精品精品国产色婷婷| 大香蕉97超碰在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 国产一区二区三区av在线| 国产黄a三级三级三级人| 久久午夜福利片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产一区二区在线观看日韩| 综合色丁香网| 又爽又黄无遮挡网站| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲国产精品合色在线| 久久亚洲精品不卡| 99久久无色码亚洲精品果冻| 亚洲av电影不卡..在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| eeuss影院久久| 国产高清国产精品国产三级 | 欧美又色又爽又黄视频| 久久久久久大精品| 欧美xxxx性猛交bbbb| 一级爰片在线观看| 少妇高潮的动态图| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 黄色配什么色好看| 91aial.com中文字幕在线观看| 一级毛片电影观看 | 波野结衣二区三区在线| 2021天堂中文幕一二区在线观| 男女边吃奶边做爰视频| 免费在线观看成人毛片| 亚洲人成网站在线观看播放| 日本与韩国留学比较| 综合色av麻豆| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产熟女欧美一区二区| 长腿黑丝高跟| 乱系列少妇在线播放| 十八禁国产超污无遮挡网站| 欧美精品一区二区大全| 有码 亚洲区| 日本欧美国产在线视频| 日韩视频在线欧美| 久久久亚洲精品成人影院| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲国产精品成人久久小说| 看黄色毛片网站| 国产乱人视频| 我要看日韩黄色一级片| 欧美成人精品欧美一级黄| 欧美日韩国产亚洲二区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 美女内射精品一级片tv| 久久久a久久爽久久v久久| 亚洲中文字幕日韩| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 三级毛片av免费| 可以在线观看毛片的网站| 日本免费在线观看一区| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 久久人人爽人人片av| 麻豆一二三区av精品| 午夜福利高清视频| 日本免费a在线| 成人二区视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 99久久精品热视频| 男人的好看免费观看在线视频| 真实男女啪啪啪动态图| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲自偷自拍三级| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产亚洲精品久久久com| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产免费一级a男人的天堂| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产 一区精品| 69av精品久久久久久| 国产精品久久电影中文字幕| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲18禁久久av| 欧美色视频一区免费| 欧美变态另类bdsm刘玥| www日本黄色视频网| 欧美激情在线99| 亚洲国产精品久久男人天堂| 1000部很黄的大片| 视频中文字幕在线观看| 91精品国产九色| 国产免费又黄又爽又色| 两个人的视频大全免费| 七月丁香在线播放| 国产亚洲精品久久久com| 国产激情偷乱视频一区二区| 看非洲黑人一级黄片| 欧美三级亚洲精品| 少妇丰满av| av在线天堂中文字幕| 国产真实乱freesex| 国产av一区在线观看免费| 人人妻人人看人人澡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产av在哪里看| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 色视频www国产| 又爽又黄无遮挡网站| 欧美成人午夜免费资源| 国产一区有黄有色的免费视频 | 男女视频在线观看网站免费| 男女视频在线观看网站免费| 一个人观看的视频www高清免费观看| 日韩一区二区三区影片| 欧美潮喷喷水| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产精品,欧美在线| 丝袜美腿在线中文| 国产亚洲一区二区精品| 欧美人与善性xxx| 日韩一本色道免费dvd| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产日韩欧美在线精品| 日本黄色视频三级网站网址| 在线观看一区二区三区| 国产高清有码在线观看视频| 久久精品久久久久久久性| 成人美女网站在线观看视频| av福利片在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产高清有码在线观看视频| av线在线观看网站| 欧美高清成人免费视频www| 91av网一区二区| 听说在线观看完整版免费高清| 免费观看的影片在线观看| 欧美97在线视频| 全区人妻精品视频| 欧美性感艳星| 色视频www国产| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久久成人免费电影| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲在线观看片| 亚洲成色77777| 九色成人免费人妻av| 毛片女人毛片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久99精品国语久久久| 亚洲精品国产av成人精品| 亚洲国产精品久久男人天堂| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久久精品久久久久真实原创| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 好男人在线观看高清免费视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 欧美日韩在线观看h| 丰满乱子伦码专区| 国产久久久一区二区三区| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲综合色惰| 一本一本综合久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产熟女欧美一区二区| 五月玫瑰六月丁香| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 不卡视频在线观看欧美| 国产成人免费观看mmmm| 国产精品熟女久久久久浪| 国产91av在线免费观看| 中文字幕av成人在线电影| 精品午夜福利在线看| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 波多野结衣高清无吗| 免费观看性生交大片5| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品.久久久| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 日本黄色片子视频| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲国产欧美人成| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 色综合色国产| 亚洲精品成人久久久久久| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产高清三级在线| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 少妇高潮的动态图| 国产一区亚洲一区在线观看| 亚洲国产精品久久男人天堂| 两个人的视频大全免费| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲天堂国产精品一区在线| 日本黄大片高清| 亚洲18禁久久av| 极品教师在线视频| 精品不卡国产一区二区三区| 一级毛片久久久久久久久女| 国产91av在线免费观看| av天堂中文字幕网| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲精品456在线播放app| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲国产欧美人成| 亚洲图色成人| 午夜日本视频在线| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产在线男女| 91av网一区二区| 91精品伊人久久大香线蕉| 久久久久久久久久久丰满| 秋霞伦理黄片| 日本wwww免费看| 插阴视频在线观看视频| 亚洲人成网站在线播| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 我的女老师完整版在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 久久久久久久国产电影| 成年版毛片免费区| 日韩欧美 国产精品| eeuss影院久久| 欧美性猛交黑人性爽| 春色校园在线视频观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲成人av在线免费| 亚洲精品,欧美精品| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 国产精品精品国产色婷婷| 99国产精品一区二区蜜桃av| 一个人观看的视频www高清免费观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲人成网站高清观看| 欧美变态另类bdsm刘玥| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 看非洲黑人一级黄片| 狠狠狠狠99中文字幕| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产爱豆传媒在线观看| 观看美女的网站| 麻豆成人午夜福利视频| 可以在线观看毛片的网站| 婷婷六月久久综合丁香| 最近2019中文字幕mv第一页| 中文资源天堂在线| 热99在线观看视频| 国产精品一区www在线观看| 亚洲成色77777| 国产男人的电影天堂91| 女人被狂操c到高潮| 伦理电影大哥的女人| 婷婷六月久久综合丁香| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 成年女人看的毛片在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 免费在线观看成人毛片| 久久久欧美国产精品| 久久久久久久久久黄片| 免费在线观看成人毛片| 国产精品.久久久| 丰满人妻一区二区三区视频av| 精品一区二区三区视频在线| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 长腿黑丝高跟| 特大巨黑吊av在线直播| 国产精品综合久久久久久久免费| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 热99在线观看视频| 一级毛片我不卡| 精品久久久噜噜| 午夜福利网站1000一区二区三区| 丰满少妇做爰视频| 联通29元200g的流量卡| 精品久久久久久久久亚洲| 插阴视频在线观看视频| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 蜜臀久久99精品久久宅男| 亚洲国产精品成人综合色| 精品久久久噜噜| 日韩精品青青久久久久久| 久久精品久久精品一区二区三区| 国产综合懂色| 男女啪啪激烈高潮av片| 色播亚洲综合网| 欧美一级a爱片免费观看看| 国产成人精品久久久久久| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产淫语在线视频| 深夜a级毛片| 美女内射精品一级片tv| 国产亚洲精品av在线| 精品人妻偷拍中文字幕| 简卡轻食公司| 看免费成人av毛片| 变态另类丝袜制服| 中文字幕亚洲精品专区| 久久国产乱子免费精品| 简卡轻食公司| 网址你懂的国产日韩在线| av免费观看日本| 亚洲一区高清亚洲精品| 91精品一卡2卡3卡4卡| 99热网站在线观看| 国产视频内射| 九九在线视频观看精品| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲精品国产成人久久av| 中文字幕免费在线视频6| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 1024手机看黄色片| 少妇的逼水好多| 亚洲18禁久久av| 亚洲一区高清亚洲精品| 欧美三级亚洲精品| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 色5月婷婷丁香| 国产成人免费观看mmmm| 久热久热在线精品观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 午夜福利视频1000在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 97超视频在线观看视频| 中文字幕亚洲精品专区| 三级经典国产精品| 六月丁香七月| 亚洲性久久影院| 久久久久久伊人网av| 热99re8久久精品国产| 91久久精品电影网| 99国产精品一区二区蜜桃av| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲伊人久久精品综合 | 亚洲久久久久久中文字幕| 日本午夜av视频| 国产亚洲精品久久久com| 国产伦一二天堂av在线观看| 长腿黑丝高跟| 51国产日韩欧美| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 国产日韩欧美在线精品| 黄片无遮挡物在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 天堂中文最新版在线下载 | 黄色欧美视频在线观看| 日韩精品有码人妻一区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 欧美一区二区精品小视频在线| 91在线精品国自产拍蜜月| 久久这里有精品视频免费| 91aial.com中文字幕在线观看| 水蜜桃什么品种好| 黄色配什么色好看| 婷婷六月久久综合丁香| 久久精品久久久久久久性| 中文字幕av在线有码专区| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲精品乱久久久久久| 日本一二三区视频观看| 日韩视频在线欧美| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 色综合站精品国产| 精品无人区乱码1区二区| 日韩成人伦理影院| 国产 一区精品| 性插视频无遮挡在线免费观看| 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲电影在线观看av| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 午夜免费激情av| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 午夜亚洲福利在线播放| 午夜视频国产福利| 久久久久久伊人网av| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲欧美日韩无卡精品| 最近的中文字幕免费完整| 亚洲av二区三区四区| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 欧美一区二区亚洲| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美性感艳星| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲av免费在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 婷婷六月久久综合丁香| 欧美3d第一页| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 内地一区二区视频在线| www.色视频.com| 人妻系列 视频| 国产成人精品久久久久久| 亚洲av免费在线观看| 韩国高清视频一区二区三区| 日韩一本色道免费dvd| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 伦精品一区二区三区| 国产精品人妻久久久影院| 欧美一级a爱片免费观看看| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产亚洲av嫩草精品影院| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 床上黄色一级片| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久人人爽人人爽人人片va| 午夜精品国产一区二区电影 | 免费观看的影片在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 欧美激情在线99| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 麻豆国产97在线/欧美| 啦啦啦啦在线视频资源| 亚洲中文字幕日韩| 卡戴珊不雅视频在线播放| 精品国内亚洲2022精品成人| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 国语自产精品视频在线第100页| a级毛片免费高清观看在线播放| 中文字幕av在线有码专区| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 亚洲美女搞黄在线观看| 哪个播放器可以免费观看大片| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲精品,欧美精品| 日韩 亚洲 欧美在线| 99视频精品全部免费 在线| 91久久精品国产一区二区成人| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 亚洲成av人片在线播放无| 长腿黑丝高跟| 久久人妻av系列| 亚洲内射少妇av| 国产色爽女视频免费观看| www.色视频.com| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲av.av天堂| 极品教师在线视频| 美女大奶头视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 免费av毛片视频| 国产色婷婷99| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 色哟哟·www| 老女人水多毛片| 99热网站在线观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 亚洲欧洲日产国产| 国产伦精品一区二区三区四那| 日韩成人av中文字幕在线观看| 久久亚洲国产成人精品v| 天堂√8在线中文| 别揉我奶头 嗯啊视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 麻豆乱淫一区二区| 欧美人与善性xxx| 国产精品久久视频播放| 波多野结衣巨乳人妻| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 18禁在线播放成人免费| 日韩欧美在线乱码| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 成人漫画全彩无遮挡| 国产免费又黄又爽又色| 欧美精品国产亚洲| 国产伦理片在线播放av一区| 青春草亚洲视频在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 嫩草影院入口| 白带黄色成豆腐渣| 国产黄色小视频在线观看| 成人综合一区亚洲| 国产黄片视频在线免费观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 成人午夜高清在线视频| 欧美+日韩+精品| 久久久久久大精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产精品野战在线观看| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 久久久久免费精品人妻一区二区| 欧美一区二区国产精品久久精品| 成人欧美大片| 久久久久久久久久黄片| 日韩成人伦理影院| 18禁在线播放成人免费| 色5月婷婷丁香| av国产久精品久网站免费入址| 少妇高潮的动态图| 精品久久久久久久久av| 熟女人妻精品中文字幕| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国内精品美女久久久久久| 免费观看人在逋| 亚洲人成网站在线播| ponron亚洲| 超碰av人人做人人爽久久| 老女人水多毛片| 中文字幕av成人在线电影| 国产成人a∨麻豆精品| 成人欧美大片| 国产不卡一卡二| 成人性生交大片免费视频hd| 村上凉子中文字幕在线| 青春草国产在线视频| 亚洲精品,欧美精品| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 亚洲久久久久久中文字幕| 永久免费av网站大全| 久久6这里有精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 热99在线观看视频| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 国产精品久久久久久精品电影小说 | 国产精品国产三级专区第一集| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲av成人精品一区久久| 精品人妻视频免费看| 男人的好看免费观看在线视频| 欧美日本视频| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 综合色丁香网| 久久这里有精品视频免费| 我的女老师完整版在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 日韩欧美精品v在线| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 久99久视频精品免费| 十八禁国产超污无遮挡网站| 国产精品国产三级专区第一集| 国产精品一二三区在线看| av.在线天堂| 天天躁日日操中文字幕| 精品不卡国产一区二区三区| 国产高清有码在线观看视频| 波多野结衣巨乳人妻| 中国国产av一级| 国产色爽女视频免费观看| 看非洲黑人一级黄片| 国产高清三级在线| 国产成人福利小说| 国产黄片美女视频| 国产高清有码在线观看视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲av中文av极速乱| 国产单亲对白刺激| 高清av免费在线| 午夜视频国产福利| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲中文字幕日韩| 亚洲国产成人一精品久久久| 婷婷六月久久综合丁香| 人妻系列 视频| 夫妻性生交免费视频一级片| 春色校园在线视频观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 最近2019中文字幕mv第一页| av免费在线看不卡| 一级爰片在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 中文亚洲av片在线观看爽| av女优亚洲男人天堂| 永久免费av网站大全| 最近的中文字幕免费完整| 日韩精品青青久久久久久| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国产男人的电影天堂91| 成年版毛片免费区| 一本久久精品| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 精品国内亚洲2022精品成人| 欧美性猛交黑人性爽| 午夜免费男女啪啪视频观看| 久久99热这里只频精品6学生 | 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 久久精品91蜜桃| 18禁动态无遮挡网站| 国产私拍福利视频在线观看|