金剛藤總黃酮栓的工藝研究

況成裕，郭小藤，張憲科，崔 燕

（山東省藥學(xué)科學(xué)院，山東 濟(jì)南 250014）

金剛藤為百合科植物菝葜（Smilax chinaL.），又名金剛刺、假萆解[1]，廣泛分布于長江以南丘陵地區(qū)，藥用其根莖，其性甘溫?zé)o毒，有清熱解毒、消腫散結(jié)之功效。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，金剛藤有抗感染和鎮(zhèn)痛[2]、抗腫瘤、活血和增強(qiáng)免疫作用[3-4]，臨床發(fā)現(xiàn)金剛藤在治療輸卵管梗阻性不孕、繼發(fā)性不孕癥[5]、慢性盆腔炎[6]等方面有較好療效。

金剛藤總黃酮栓主治慢性盆腔炎，原料為金剛藤總黃酮，是由金剛藤藥材經(jīng)醇提、大孔吸附樹脂分離純化所得[7]。慢性盆腔炎是指女性內(nèi)生殖器及其周圍結(jié)締組織、盆腔腹膜的慢性炎癥[8]。目前，國內(nèi)臨床上治療慢性盆腔炎多為口服藥品，由于口服藥品經(jīng)消化系統(tǒng)，導(dǎo)致藥物生物利用度降低，療效不甚滿意，且存在肝腎毒性。為有效快速達(dá)到治療目的，并能減少肝腎毒性，直腸給藥成為一種簡便、有效、安全的替代途徑。栓劑作為直腸給藥的一種劑型，具有避免肝臟首過效應(yīng)、生物利用度高等特點(diǎn)[9]?，F(xiàn)行藥典栓劑項(xiàng)下只收載了“融變時(shí)限”檢查，沒有對栓劑溶出度相關(guān)要求[10]。溶出度反映了有效成分從制劑中溶出的速度和程度，栓劑基質(zhì)種類是影響溶出速度的主要因素[11]，所以本研究采用單因素試驗(yàn)考察金剛藤總黃酮栓的注模溫度、聚乙二醇型號；以外觀、硬度、融變時(shí)限及溶出度為指標(biāo)，采用正交設(shè)計(jì)進(jìn)行處方篩選[7]。

1 儀器和材料

1.1 儀器

8453型紫外-可見分光光度儀（Agilent）；恒溫烘箱（上海一恒）；恒溫水浴鍋（浙江力辰）；RC806D溶出試驗(yàn)儀（天津天大天發(fā)）；子彈型栓劑模型（長沙益宏）；自動(dòng)融變時(shí)限檢查儀（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠）；手術(shù)刀。

1.2 材料

金剛藤總黃酮（自制，落新婦苷含量58.29 %）；落新婦苷對照品（自制，含量97.82 %）[7]；聚乙二醇1500（PEG-1500，西安天正）；聚乙二醇-4000（PEG-4000，西安天正）；聚乙二醇-400（PEG-400，西安天正）；硬脂酸聚烴氧（40）酯（S-40，西安泰華）；甘油（禾大西普化學(xué)）；液體石蠟（西安晉湘）；亞硝酸鈉，硝酸鋁，氫氧化鈉，甲醇，乙醇為分析純，水為純化水（自制）。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方量初步確定

根據(jù)金剛藤總黃酮?jiǎng)游镩L期毒性試驗(yàn)中引起中毒癥狀或臟器出現(xiàn)可逆性變化劑量的l/10[12]，大鼠最低有毒劑量為100 mg/kg，Beagle犬可逆性中毒劑量為50 mg/kg計(jì)算，人體按60 kg計(jì)算，最大劑量應(yīng)為3000 mg，根據(jù)臨床實(shí)際可操作性及推薦臨床劑量，初步確定最大劑量為200 mg/d；制備栓劑每粒含金剛藤總黃酮100 mg，每日2次，每次1粒。

2.2 制備方法

采用熱熔法進(jìn)行制備金剛藤總黃酮栓：將PEG1500與S-40混合，水浴融化[13]，攪拌使其分散均勻，加入甘油、金剛藤總黃酮，攪拌使其分散均勻，倒入已冷卻并涂有液體石蠟的栓模中，冷卻后，用手術(shù)刀削去溢出部分，打開模具，推出即得栓劑10粒[13]。

2.3 處方初步篩選

2.3.1 PEG型號的篩選 稱取PEG1500，PEG400和PEG4000各7 g，各加入S40 3 g，分別于70 ℃水浴融化，攪拌使其分散均勻，倒入已冷卻并涂有液體石蠟的栓模中，冷卻后，用手術(shù)刀削去溢出部分，打開模具，脫模得空白栓劑。以外觀、硬度為考察指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)PEG400、PEG-4000與S-40混合基質(zhì)栓體斷裂，較脆。PEG1500與S40混合基質(zhì)成型性好，外觀光滑，硬度適宜[11]。所以選擇PEG1500與S40混合基質(zhì)。

2.3.2 考察篩選 注模溫度稱取PEG1500各7 g，3份，各加入S40 3 g，于70 ℃水浴融化，攪拌使其分散均勻，分別加入甘油1 g、金剛藤總黃酮1 g，攪拌使其分散均勻，分別冷卻至不同溫度，倒入已冷卻并涂有液體石蠟的栓模中，冷卻后脫模，考察不同注模溫度的影響，結(jié)果見表1。結(jié)果表明，注模溫度影響成品質(zhì)量，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果選擇60 ℃作為注模溫度。

表1 不同注模溫度對栓劑的影響

2.4 溶出度測定方法的確定

2.4.1 對照品溶液的制備 精密稱定干燥至恒重的落新婦苷對照品（含量為97.82 %）5.12 mg，置入50 ml量瓶，加乙醇40 ml，超聲使溶解，加乙醇至刻度，搖勻，制成濃度為1.002 mg/ml的對照品溶液[14]。

2.4.2 金剛藤總黃酮供試品溶液的制備 稱取金剛藤總黃酮10 mg，精密稱定，置入250 ml圓底燒瓶，加乙醇100 ml，稱定重量，加熱回流提取1 h，放冷，加乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液[15-17]。

2.4.3 檢測波長選擇 精密量取對照品溶液、金剛藤總黃酮供試品溶液各1 ml，置入10 ml量瓶，加乙醇至刻度，搖勻，以乙醇為空白，在波長200～400 nm范圍內(nèi)掃描，對照品溶液、金剛藤總黃酮供試品溶液均在292 nm處有最大吸收峰，因此選擇292 nm作為檢測波長[7]。

2.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密量取對照品溶液0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml，分別置入10 ml量瓶，加乙醇至刻度，搖勻，在292 nm處測定吸光度，以濃度C為橫坐標(biāo)，以吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=30.87C+0.042，R2=0.9994[7]。結(jié)果表明，落新婦苷在0～30.06 μg/ml濃度范圍之內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4.5 溶出方法及溶出介質(zhì)的選擇 參考《中國藥典》2015年版二部附錄XC第三法進(jìn)行溶出度測定。分別將樣品置于250 ml純化水、0.1 mol/L鹽酸溶液、pH4.8醋酸鹽緩沖液及pH 7.4磷酸鹽緩沖液中，轉(zhuǎn)速為100 r/min，水浴溫度為（37±0.5） ℃[7]，分別于5，10，15，20，30和50 min取樣2 ml，補(bǔ)液。用紫外分光光度法測定樣品中總黃酮的含量，計(jì)算不同時(shí)間點(diǎn)取樣總黃酮的平均累積溶出百分率，繪制溶出曲線，結(jié)果見圖1。

結(jié)果表明，除了在0.1 mol/L鹽酸溶液中，其余3種溶出介質(zhì)在30 min內(nèi)均能溶出80 %以上，由于栓劑系直腸給藥，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并考察文獻(xiàn)[18]，選擇接近人體直腸環(huán)境的pH 7.4磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)。

2.5 處方篩選

用綜合評分法評價(jià)栓劑的優(yōu)劣，采用正交設(shè)計(jì)對金剛藤總黃酮（A）、PEG1500（B）、S40（C）和甘油（D）的用量比例進(jìn)行考察，選擇最優(yōu)工藝[19]。考察因素水平見表2，綜合評分見表3，正交試驗(yàn)結(jié)果見表4，方差分析見表5。

由表3直觀分析得，最佳工藝為A2B2C3D1，即金剛藤總黃酮:PEG1500:S40:甘油=1:5:3:1，且該工藝產(chǎn)品的溶出度≥80 %。

2.6 工藝驗(yàn)證

按篩選的最佳處方（金剛藤總黃酮：PEG1500:S40:甘油=1:5:3:1）、工藝制備3批金剛藤總黃酮栓樣品，每批30枚。評價(jià)金剛藤總黃酮栓的外觀、檢查重量差異和融變時(shí)限，測定溶出度。結(jié)果：3批樣品均外觀光滑均勻，硬度適宜，重量差異及融變時(shí)限均符合標(biāo)準(zhǔn)，30 min溶出度分別為85.54 %，86.91 %，4.67 %。結(jié)果表明上述處方、工藝穩(wěn)定性好，操作簡單。

圖1 不同溶出介質(zhì)中的釋放情況（100 r/min，37 ℃）

表2 正交試驗(yàn)因素水平表

表3 綜合評分表

表4 L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果

表5 方差分析

3 討論

經(jīng)大量預(yù)試驗(yàn)比較了PEG類、S40、甘油明膠等水溶性基質(zhì)，發(fā)現(xiàn)甘油明膠體系在制備栓劑過程中出現(xiàn)氣泡，導(dǎo)致外觀不好且重量差異大。最終采用PEG、S40和甘油制成水溶性基質(zhì)，并采用正交設(shè)計(jì)，篩選出以PEG-S40-甘油為基質(zhì)的最佳處方為金剛藤總黃酮:PEG1500:S40:甘油=1:6:2:1，工藝操作簡單，穩(wěn)定性好，栓劑外觀光滑、色澤均勻、硬度適宜、不變形、無氣泡。而且栓劑中添加甘油，可減少PEG1500對腔壁的刺激性，增加栓劑的潤滑性，而且能提高藥物的溶出。同時(shí)甘油有一定保濕作用，可防止栓劑在貯藏過程中干燥變硬[20]。

在《中國藥典》栓劑檢查項(xiàng)中有“融變時(shí)限”，但是“融變時(shí)限”只能反應(yīng)藥品自己的溶解時(shí)間，卻不能反映其中藥物成分溶出情況。所以增加溶出度測定，選擇接近人體直腸環(huán)境的pH 7.4磷酸鹽緩沖液作為溶出介質(zhì)，用紫外分光光度法檢測總黃酮含量，為深入研究金剛藤總黃酮栓提供基礎(chǔ)。