針灸對潰瘍性結(jié)腸炎大鼠維生素D受體及p53信號通路調(diào)節(jié)作用的研究

李晗　李昆珊　吳璐一　周志剛　黃任佳　吳煥淦　劉雅楠　黃艷　馬曉芃　劉慧榮　陸嫄

摘要 目的：維生素D（VD）缺乏與潰瘍性結(jié)腸炎（UC）發(fā)病相關(guān)，針灸對UC有顯著的療效，起效機(jī)制尚未完全闡明，因此我們從維生素D受體（VDR）及與VDR相關(guān)的p53信號通路角度，觀察針灸對UC大鼠調(diào)節(jié)的作用機(jī)制。方法：采用3%DSS制備UC大鼠模型。將大鼠隨機(jī)分為正常組，模型組，電針組，隔藥灸組和維生素D組。對雙側(cè)天樞穴采用電針或隔藥灸干預(yù)1周，維生素D灌胃1周。分析大鼠結(jié)腸黏膜形態(tài)并評分，采用免疫組織化學(xué)法和QPCR檢測結(jié)腸VDR蛋白和mRNA的表達(dá)，Western blotting檢測結(jié)腸p53、PUMA和Caspase-3蛋白的水平。結(jié)果：與正常組比較，模型組組織病理學(xué)評分顯著升高，經(jīng)電針、隔藥灸和VD干預(yù)后各組顯著降低;與正常組比較，模型組VDR蛋白和mRNA表達(dá)顯著降低，p53、PUMA和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著升高，與模型組比較，電針組、隔藥灸組和維生素D組的VDR蛋白和mRNA表達(dá)顯著升高，p53、PUMA和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著降低。結(jié)論：電針、隔藥灸可以顯著改善UC大鼠結(jié)腸黏膜炎性反應(yīng)，該效應(yīng)可能與針灸對VDR及下游p53信號通路的調(diào)節(jié)作用有關(guān)。

關(guān)鍵詞 潰瘍性結(jié)腸炎;針刺;艾灸;維生素D受體;p53信號通路

Study on the Regulatory Effects of Acupuncture on Vitamin D Receptor and p53 Signal Pathway in Ulcerative Colitis Rats

LI Han1，2，LI Kunshan1，WU Luyi1，ZHOU Zhigang3，HUANG Renjia1，WU Huangan1，LIU Yanan4，HUANG Yan1，4，MA Xiaopeng1，4，LIU Huirong1，4，LU Yuan1，4

（1 Key Laboratory of Acupuncture-Moxibustion and Immunological Effects，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai 200030，China; 2 The Center of Neck And Low Back Pain，Changzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Changzhou Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Changzhou 213002，China; 3 International Education College，Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China; 4 Department of Acupuncture and Moxibustion Immunization Laboratory，Shanghai Research Institute of Acupuncture and Median，Shanghai 200030，China）

Abstract Vitamin D deficiency has closely relationship with ulcerative colitis（UC）.Acupuncture has significant effects on UC，and the mechanism of action has not yet been fully elucidated.Therefore，we are to observe the regulatory mechanism of acupuncture on UC rats from the perspective of vitamin D receptor（VDR）and the p53 signaling pathway related to VDR.Methods：The UC rat model was prepared with 3% DSS.The rats were randomly divided into a normal group，a model group，an electroacupuncture group，a medicine-separated moxibustion group and a vitamin D group.Electroacupuncture or medicine-separated moxibustion was used to intervene in bilateral Tianshu points for one week，and vitamin D was given for gavage for one week.The morphology of the rat colon mucosa was analyzed and scored.The expression of VDR protein and mRNA in the colon was detected by immunohistochemistry and QPCR，and the levels of p53，PUMA and Caspase-3 protein in the colon were detected by western blotting.Results：Compared with the normal group，the histopathological score of the model group was significantly increased，and the groups were significantly reduced after electroacupuncture，medicine-separated moxibustion，and VD intervention; compared with the normal group，the expression of VDR protein and mRNA in the model group was significantly reduced.The expression of p53，PUMA and Caspase-3 protein was significantly increased.Compared with the model group，the expression of VDR protein and mRNA in the electroacupuncture group，the medicine-separated moxibustion group and the vitamin D group were significantly increased，and the expression of p53，PUMA and Caspase-3 protein was significantly decreased.Conclusion：Electroacupuncture and medicine-separated moxibustion can significantly improve the inflammatory response of colonic mucosa in UC rats.This effect may be related to the regulation of VDR and downstream p53 signaling pathway by acupuncture.

Keywords Ulcerative colitis; Acupuncture; Moxibustion; Vitamin D receptor; p53 signaling pathway

中圖分類號：R245文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2020.15.012

潰瘍性結(jié)腸炎（Ulcerative Colitis，UC）是一種目前病因未明的慢性非特異性腸道疾病，臨床表現(xiàn)為持續(xù)或反復(fù)發(fā)作的腹瀉、粘液膿血便伴腹痛、里急后重和不同程度的全身癥狀[1]。UC的治療主要采用氨基水楊酸制劑和糖皮質(zhì)激素[2]，臨床上已經(jīng)取得了較好的治療效果，但是不良反應(yīng)的報(bào)道也屢見不鮮。針灸作為中醫(yī)學(xué)重要的治療方法，對UC的輔助治療有確切的療效[3-6]，但起效機(jī)制尚未完全闡明。

研究表明，維生素D缺乏與UC的發(fā)生和發(fā)展存在較為緊密的聯(lián)系[7-8]。因此，國內(nèi)外學(xué)者越來越重視維生素D在UC發(fā)病中的作用與意義[9-10]。我們課題組前期研究表明，隔藥灸可以顯著促進(jìn)UC大鼠血清和結(jié)腸組織中維生素D及其受體（Vitamin D Receptor，VDR）的表達(dá)，降低結(jié)腸IFN-γ、TNF-α等細(xì)胞因子的表達(dá)[11]。p53基因是人體抑癌基因，目前認(rèn)為p53主要調(diào)控炎性反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[12]，當(dāng)炎性反應(yīng)發(fā)生時，p53的激活可加重炎性反應(yīng)的發(fā)生。研究表明：UC模型結(jié)腸組織的p53被激活，呈現(xiàn)高表達(dá)[13]。PUMA是p53的下游靶基因，是促炎啟動基因，體內(nèi)各種感染炎性反應(yīng)會誘發(fā)細(xì)胞依賴p53及非依賴p53機(jī)制，誘導(dǎo)PUMA表達(dá)增多，且PUMA表達(dá)與UC模型內(nèi)炎性反應(yīng)嚴(yán)重程度呈線性關(guān)系[14]。本課題組長期致力于針灸治療UC的臨床和實(shí)驗(yàn)研究，證實(shí)針灸在改善UC患者臨床癥狀，抗炎，調(diào)節(jié)免疫等方面具有顯著的優(yōu)勢[15-17]。本次研究，旨在從維生素D受體VDR和p53信號通路的角度探討針灸對UC的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 5周齡雄性SD清潔級大鼠32只，體質(zhì)量（150±20）g，購于上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動物有限責(zé)任公司，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，動物許可證號：SCXK（滬）2012-0002，室內(nèi)環(huán)境溫度控制在（20±2）℃，濕度50%～70%，照明：12 h光照/12 h黑暗。實(shí)驗(yàn)中所有操作均遵循美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）及上海市實(shí)驗(yàn)動物倫理委員會的規(guī)定（實(shí)驗(yàn)動物倫理審批號：SZY201707014）。

1.1.2 試劑與儀器 DSS（MPBiomedicals，美國，貨號：MPbio.0216011080），骨化三醇膠丸（R.P.Scherer GmbH & Co.KG，瑞士，國藥準(zhǔn)字J20150011），戊巴比妥鈉（Merck，德國，貨號：P-010），甲醛（上海國藥集團(tuán)，貨號：M0130-2363），VDR抗體（Abcam，美國，貨號：ab3508），p53抗體（Abcam，美國，貨號：ab26），PUMA抗體（Abcam，美國，貨號：ab9643），Caspase-3抗體（Abcam，美國，貨號：ab13847）。Trizol（Invitrogen，美國，貨號：10296010），逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（天根公司，貨號：KP203-02），SYBR GREEN熒光定量試劑盒（天根公司，貨號：FP314-02）。酶標(biāo)儀（Thermo Fisher，美國，型號：MultiskanFC），石蠟包埋機(jī)（Leica，德國，型號：EG1150），切片機(jī)（Leica，德國，型號：RM2245），韓氏穴位神經(jīng)刺激儀（南京濟(jì)生醫(yī)療科技有限公司，型號：Hans-200），光學(xué)顯微鏡（OLYMPUS，日本，型號：CX23），PCR儀（ABI公司，美國，型號：2720）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 大鼠隨機(jī)選取7只作為正常組大鼠（Normal Group，N），其余25只為造模大鼠。采用3%DSS水溶液自由飲用的方法制備UC大鼠模型[18]。造模大鼠于第1周、第3周，自由飲用3%DSS水溶液，第2周、第4周，常規(guī)飼養(yǎng)。見圖1。第4周后，隨機(jī)取1只正常大鼠、1只造模大鼠進(jìn)行模型鑒定。24只造模大鼠隨機(jī)分為模型組（Model Group，M），電針組（Electro-acupuncture Group，EA），隔藥灸組（Herb-partitioned Moxibustion Group，HM）和維生素D組（Vitamin D Group，VD），每組6只。

1.2.2 干預(yù)方法 正常組和模型組不做治療，只做與其他3組相同的固定，連續(xù)7 d。電針組采用一次性無菌針灸針，直刺大鼠雙側(cè)天樞穴（ST25）（臍中旁開5 mm，針刺2 mm）[19-20]，針柄連接韓氏穴位神經(jīng)刺激儀，采用疏密波，頻率2/100 Hz，電流1 mA，留針10 min，治療1次/d，共針7次。隔藥灸組予雙側(cè)天樞穴（ST25）隔藥灸，艾炷大小約90 mg;藥餅配方：附子、肉桂等，藥餅厚約0.5 cm，直徑1 cm;灸1次/d，每次每穴灸2壯，每壯燃燒時間5 min，2壯燃燒時間為10 min，共灸7次。維生素D組予1，25（OH）2D3灌胃：將0.25 μg/粒的骨化三醇膠丸（4粒）溶于15 mL的橄欖油，每只大鼠每天灌胃0.5 mL的混合液，連續(xù)灌胃7 d[21]。所有大鼠經(jīng)4%戊巴比妥鈉過量麻醉處死，取出大鼠結(jié)直腸縱行剪開，取自肛門向上6 cm腸段觀察，剪取其中1 cm置于4%多聚甲醛固定，其余置于-80 ℃冰箱保存。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1）HE染色：組織放入包埋機(jī)進(jìn)行石蠟包埋，切片機(jī)連續(xù)切片（厚度為4 μm），脫蠟水化后進(jìn)行蘇木素-伊紅染色，中性樹膠封片。評分參照Hofman P等人的方法[22]。2）免疫組化：結(jié)腸組織切片脫蠟水化后，采用0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖溶液進(jìn)行抗原修復(fù)，自然冷卻后0.02 mol/L PBS洗3 min×3次;將玻片置于3%H2O2中，濕盒孵育10 min，0.02 mol/L PBS沖洗3 min×3次。根據(jù)說明書和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，添加稀釋后的抗體，VDR（1∶200）。濕盒孵育，4 ℃孵育過夜，0.02 mol/L PBS沖洗3 min×3次，滴加DAB顯色液，蘇木素染色5 min，1%鹽酸乙醇分化，顯微鏡下觀察，控制染色程度，中性樹膠封片。顯微鏡下拍照，采集圖像，Image Pro Plus軟件分析累積光密度，計(jì)算IOD值。3）Western Blot：a.蛋白濃度測定：結(jié)腸組織剪碎，加入蛋白裂解液后離心，提取上清液，使用酶標(biāo)儀測定蛋白濃度;b.電泳：依據(jù)說明書制備SDS-PAGE凝膠，目標(biāo)蛋白樣品根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需濃度稀釋，于100 ℃沸水中水浴加熱10 min，使蛋白充分變性，上樣。冷卻至室溫，樣品于濃縮膠以80 V×30 min，于分離膠120 V×60 min跑膠分離;c.轉(zhuǎn)膜：采用半干轉(zhuǎn)。以濾紙、膠體、膜、濾紙的方式制成三明治，用電轉(zhuǎn)緩沖液浸潤后，直接置于電轉(zhuǎn)儀的正負(fù)極之間，NC膜和膠體于轉(zhuǎn)膜前置于電轉(zhuǎn)緩沖液中平衡5 min;d.封閉：5%脫脂奶粉室溫封閉1 h;e.一抗、二抗孵育：依據(jù)說明書和預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果稀釋一抗（p53，1∶1 000;PUMA，1∶1 000;Caspase-3，1∶500），加入稀釋液中，4 ℃孵育過夜。一抗的膜用TBST洗滌3次，5 min/次。按照1∶1 000稀釋HRP標(biāo)記的二抗，加入二抗后37 ℃孵育1 h。用TBST洗滌3次，5 min/次;f.顯色：采用ECL發(fā)光液，顯色，放入成像系統(tǒng)掃描;g.數(shù)據(jù)提?。菏褂肐mage Pro Plus軟件分析灰度值，計(jì)算目的蛋白和內(nèi)參蛋白的比值，作為最終結(jié)果。4）實(shí)時定量PCR：將-80 ℃凍存的結(jié)腸組織，使用Trizol提取mRNA，經(jīng)氯仿分離、異丙醇純化、75%乙醇洗滌后，ddH2O溶解mRNA。使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，使用SYBR GREEN熒光定量試劑盒于PCR儀上進(jìn)行相關(guān)mRNA表達(dá)量的檢測。主要檢測直腸組織VDR mRNA的表達(dá)。具體引物設(shè)計(jì)見表1，反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性15 min，95 ℃變性10 s，60 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，一共40個循環(huán)。每個樣本做2個復(fù)孔，采用公式△Ct=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因，計(jì)算得出每個基因的△Ct，再通過換算得出每個基因相對表達(dá)量=2-△△Ct。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，對計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，若服從正態(tài)分布，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示;若不服從正態(tài)分布，則采用中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）[Median（P25，P75）]表示。正態(tài)分布的資料組間比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），方差齊則采用最小顯著差異法（LSD檢驗(yàn)）進(jìn)行兩兩比較;方差不齊則采用新復(fù)極差法檢驗(yàn)（Dunnett-t檢驗(yàn)）進(jìn)行兩兩比較。若資料不服從正態(tài)分布則采用秩和檢驗(yàn)（Kruskal-Wallis test）。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 針灸可降低UC大鼠結(jié)腸組織病理學(xué)評分

正常組大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞形態(tài)正常，腺體排列整齊，黏膜結(jié)構(gòu)完整，無組織充血、水腫和潰瘍。模型組大鼠結(jié)腸上皮結(jié)構(gòu)破壞，腺體缺失，黏膜結(jié)構(gòu)不完整，炎性細(xì)胞大量浸潤。與模型組比較，電針組、隔藥灸組和維生素D組大鼠結(jié)腸上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)較完整，腺體排列較整齊，炎性細(xì)胞浸潤少。見圖2A。

病理評分顯示，與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸黏膜病理評分顯著增高（P<0.001），與模型組比較，電針組、隔藥灸組和維生素D組病理評分顯著減低（P<0.001）。見圖2B。

2.2 針灸可上調(diào)UC大鼠結(jié)腸黏膜VDR蛋白和mRNA表達(dá)

與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸黏膜VDR蛋白表達(dá)和mRNA水平顯著降低（P<0.001），與模型組比較，電針組、隔藥灸組和維生素D組VDR蛋白表達(dá)和mRNA水平顯著升高（P<0.001）。見圖3A、B、C。

2.3 針灸可上調(diào)大鼠結(jié)腸黏膜p53通路中p53、PUMA和Caspase-3蛋白表達(dá)

與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸黏膜p53、PUMA和Caspase-3蛋白表達(dá)顯著升高（P<0.001），與模型組比較，電針組、隔藥灸組和維生素D組的p53、PUMA和Caspase-3蛋白表達(dá)水平顯著降低，其中維生素D組p53，P<0.05，其余P<0.001。見圖4。

3 討論

形態(tài)學(xué)觀察顯示，與正常組比較，模型組大鼠結(jié)腸黏膜損傷及炎性細(xì)胞浸潤程度均較重，經(jīng)電針、隔藥灸和VD干預(yù)后，黏膜損傷和炎性細(xì)胞浸潤均顯著改善。病理評分結(jié)果，模型組較正常組評分顯著升高，3組觀察組評分較模型組均顯著降低，說明針灸可以改善UC大鼠結(jié)腸黏膜損傷，減輕結(jié)腸黏膜炎性反應(yīng)。該效應(yīng)是否與VDR及其相關(guān)信號通路有關(guān)是本次研究要探尋的答案。皮膚中的7-脫氫膽固醇經(jīng)由陽光中的紫外線，轉(zhuǎn)化為維生素D3，后者再經(jīng)過肝臟、腎臟的作用，在腎臟被1α羥化酶CYP27B1轉(zhuǎn)化為1，25（OH）2D3[23]。1，25（OH）2D3在細(xì)胞內(nèi)與VDR結(jié)合，激活多種細(xì)胞因子，發(fā)揮生物學(xué)作用。我們發(fā)現(xiàn)模型組大鼠結(jié)腸黏膜的VDR蛋白表達(dá)與正常組比較顯著降低，這與已有的臨床研究結(jié)果一致[24]，電針，隔藥灸和維生素D均能顯著增加UC大鼠結(jié)腸的VDR表達(dá)。提示各觀察組大鼠結(jié)腸黏膜損傷的減輕與電針、隔藥灸和補(bǔ)充維生素D提高VDR蛋白表達(dá)有關(guān)。

由于VDR在UC發(fā)病中與炎性反應(yīng)密切相關(guān)，所以我們選擇了與炎性反應(yīng)調(diào)控和VDR均有關(guān)聯(lián)的p53信號通路中的部分蛋白進(jìn)行觀察。研究人員采用western-blot技術(shù)，證實(shí)細(xì)胞質(zhì)中p53是VDR的“結(jié)合伴侶”之一[25]。而在UC結(jié)腸組織中，Caspase-3的高表達(dá)和UC的發(fā)生、發(fā)展緊密相關(guān)[26]。Caspase-3蛋白屬于Caspase家族，是細(xì)胞凋亡最為關(guān)鍵的執(zhí)行者。在受到炎性反應(yīng)等因素刺激時，即被激活。p53、PUMA在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過程中，引起線粒體功能障礙和Caspase-3激活，通過阻滯細(xì)胞周期、破壞細(xì)胞平衡狀態(tài)、解體細(xì)胞組織等方式進(jìn)入凋亡進(jìn)程。Caspase-3水平的顯著下降可以抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生[27]。在本項(xiàng)研究中，我們發(fā)現(xiàn)UC模型組大鼠結(jié)腸黏膜p53蛋白、PUMA和Caspase-3表達(dá)顯著增多，經(jīng)電針、隔藥灸和維生素D干預(yù)后，表達(dá)均顯著降低，提示電針和隔藥灸可能通過調(diào)控p53通路中的p53、PUMA和Caspase-3，介導(dǎo)抗炎、抑制腸上皮細(xì)胞凋亡，保護(hù)腸黏膜屏障，緩解結(jié)腸炎性反應(yīng)，改善結(jié)腸黏膜潰瘍。

本研究首次以VDR為切入點(diǎn)，并首次通過觀察與VDR和p53通路的p53、PUMA和Caspase-3在UC大鼠結(jié)腸的表達(dá)情況，電針和隔藥灸干預(yù)后的表達(dá)情況，擬闡釋電針和隔藥灸對UC大鼠的部分起效機(jī)制。本研究結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)，電針和隔藥灸能顯著增加UC大鼠結(jié)腸的VDR表達(dá)水平，降低p53、PUMA和Caspase-3的水平，提示該作用可能是電針和隔藥灸干預(yù)UC大鼠的起效機(jī)制之一。本研究尚存在不足之處，如受實(shí)驗(yàn)條件限制，未做基因敲除等反向驗(yàn)證工作，電針和隔藥灸對VDR的調(diào)控是直接作用還是間接影響不能明確，這將在后續(xù)研究中開展。

綜上所述，通過本次研究，我們發(fā)現(xiàn)電針、隔藥灸可以顯著改善UC大鼠結(jié)腸黏膜炎性反應(yīng)，該作用可能與升高VDR表達(dá)水平，降低p53、PUMA和Caspase-3的表達(dá)有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

[1]Rubin DT，Ananthakrishnan AN，Siegel CA，et al.ACG Clinical Guideline：Ulcerative Colitis in Adults[J].Am J Gastroenterol，2019，114（3）：384-413.

[2]中華醫(yī)學(xué)會消化病學(xué)分會炎癥性腸病學(xué)組.炎癥性腸病診斷與治療的共識意見[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志，2018，38（9）：796-813.

[3]Joos S，Wildau N，Kohnen R，et al.Acupuncture and moxibustion in the treatment of ulcerative colitis：a randomized controlled study[J].Scand J Gastroenterol，2006，41（9）：1056-1063.

[4]Ji J，Lu Y，Liu HR，et al.Acupuncture and moxibustion for inflammatory boweldiseases：a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials[J].Evid Based Complement Alternat Med，2013，2013：158352.

[5]謝文松，魏錄翠，王金周，等.針刺聯(lián)合中藥治療潰瘍性結(jié)腸炎療效及對相關(guān)指標(biāo)的影響[J].上海針灸雜志，2019，38（4）：378-383.

[6]沈群，鄭云硉，陸菁.隔附子餅灸聯(lián)合美沙拉嗪治療濕熱型潰瘍性結(jié)腸炎療效觀察[J].上海針灸雜志，2019，38（4）：374-377.

[7]Olmedo Martín RV，González Molero I，OlveiraFuster G，et al.Vitamin D deficiency in outpatients with inflammatory bowel disease：prevalence and association with clinical-biological activity[J].Rev Esp Enferm Dig，2019，111（1）：46-54.

[8]Abraham BP，Prasad P，Malaty HM.Vitamin D deficiency and corticosteroid use are risk factors for low bone mineral density in inflammatory bowel disease patients[J].Dig Dis Sci，2014，59：1878-1884.

[9]Garg M，Royce SG，Tikellis C，et al.The intestinal vitamin D receptor in inflammatory bowel disease：inverse correlation with inflammation but no relationship with circulating vitamin D status[J].Therap Adv Gastroenterol，2019，18，12：1756284818822566.

[10]Huang J，Chen T，Liu Y，et al.How would serum 25（OH）D level change in patients with inflammatory bowel disease depending on intestinal mucosa vitamin D receptor（VDR）and vitamin D1-α hydroxylase（CYP27B1）[J].Turk J Gastroenterol，2019，30（2）：132-138.

[11]王寬，黃任佳，吳煥淦，等.維生素D在炎癥性腸病中的作用機(jī)制[J].世界華人消化雜志，2015，23（35）：5655-5661.

[12]Bai JA，Jie H，Wei S，et al.GART mediates the renewal of intestinal epithelial barrier via p38/p53/PUMA cascade in colitis[J].Apoptosis，2016，21（12）：1386-1397.

[13]Goretsky T，Dirisina R，Sinh P，et al.p53 mediates TNF-induced epithelial cell apoptosis in IBD[J].Am J Pathol，2012，181（4）：1306-1315.

[14]Qiu W，Wu B，Wang X，et al.PUMA-mediated intestinal epithelial apoptosis contributes to ulcerative colitis in humans and mice[J].J Clin Invest，2011，121（5）：1722-1732.

[15]Wu HG，Zhou LB，Pan YY，et al.Study of the mechanisms of acupuncture and moxibustion treatment for ulcerative colitis rats in view of the gene expression of cytokines[J].World J Gastroenterol，1999，5（6）：515-517.

[16]Wu HG，Zhou LB，Shi DR，et al.Morphological study on colonic pathology in ulcerative colitis treated by moxibustion[J].World J Gastroenterol，2000，6（6）：861-865.

[17]Huang Y，Ma Z，Cui YH，et al.Effects of Herb-Partitioned Moxibustion on the miRNA Expression Profiles in Colon from Rats with DSS-Induced Ulcerative Colitis[J].Evid Based Complement Alternat Med，2017，2017：1767301.

[18]Wirtz S，Popp V，Kindermann M，et al.Chemically induced mouse models of acute and chronic intestinal inflammation[J].Nat Protoc，2017，12（7）：1295-1309.

[19]原萌謙.單穴與雙穴調(diào)節(jié)大鼠不同結(jié)腸段運(yùn)動的效應(yīng)差異及機(jī)制研究[D].南京：南京中醫(yī)藥大學(xué)，2017.

[20]余曙光，郭義.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2009：150-152.

[21]魏偉.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：274.

[22]Hofman P，Cherfils-Vicini J，Bazin M，et al.Genetic and pharmacological inactivation of the purinergic P2RX7 receptor dampens inflammation but increases tumor incidence in a mouse model of colitis-associated cancer[J].Cancer Res，2015，75（5）：835-845.

[23]Palmer MT，Weaver CT.Linking vitamin d deficiency to inflammatory bowel disease[J].Inflamm Bowel Dis，2013，19：2245-2256.

[24]Liu W，Chen Y，Golan MA，et al.Intestinal epithelial vitamin D receptor signaling inhibits experimental colitis[J].J Clin Invest，2013，123（9）：3983-3996.

[25]Pemsel A，Rumpf S，Roemer K，et al.Tandem Affinity Purification and NanoHPLC-ESI-MS/MS Reveal Binding of Vitamin D Receptor to p53 and other New Interaction Partners in HEK 293T Cells[J].Anticancer Res，2018，8（2）：1209-1216.

[26]Setia S，Nehru B，Sanyal S N.Celecoxib prevents colitis associated colon carcinogenesis：an upregulation of apoptosis[J].Pharmacol Rep，2014，66（6）：1083-1091.

[27]Sreedhar R，Arumugam S，Thandavarayan R A，et al.Toki-shakuyaku-san，a Japanese kampo medicine，reduces colon inflammation in a mouse model of acute colitis[J].IntImmunopharmacol，2015，29（2）：869-875.

（2020-05-07收稿 責(zé)任編輯：徐穎）

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目（81674074）——基于VDR信號通路探討艾灸對UC腸道抗菌肽的調(diào)控機(jī)制研究;上海市衛(wèi)生計(jì)生委優(yōu)秀人才培養(yǎng)計(jì)劃項(xiàng)目（2018YQ11）——艾灸干預(yù)潰瘍性結(jié)腸炎E3泛素連接酶TRIM31的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制;上海市衛(wèi)生計(jì)生委科研課題青年項(xiàng)目（20164Y0221）——基于VDR信號通路探討艾灸對UC腸道抗菌肽的調(diào)控機(jī)制研究作者簡介：李晗（1987.03—），男，博士，主治醫(yī)師，研究方向：針灸作用機(jī)制研究，E-mail：long-1987@126.com通信作者：陸嫄（1986.12—），女，博士，助理研究員，研究方向：針灸治療炎癥性腸病的臨床與機(jī)制研究，E-mail：luyuan_sh@163.com;劉慧榮（1976.07—），女，博士，研究員，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：針灸治療胃腸疾病的臨床與機(jī)制研究，E-mail：lhr_tcm@139.com