β1-腎上腺素受體、血管緊張素Ⅱ-1型受體基因多態(tài)性與高寒地區(qū)高血壓的關(guān)系研究

王晶，董天崴，王爽，周萌，吳春麗，胡焱垚，楊軍

本研究創(chuàng)新點(diǎn)與不足之處：

（1）創(chuàng)新點(diǎn)：本研究發(fā)現(xiàn)高寒地區(qū)高血壓患者β1-腎上腺素受體（ADRB1）基因C等位基因與其發(fā)病相關(guān)，為高寒地區(qū)高血壓的病因提供了有價(jià)值的分子生物學(xué)依據(jù)。同時(shí)，為精準(zhǔn)治療高血壓提供了參考，即可以依據(jù)基因多態(tài)性進(jìn)行個(gè)體化精準(zhǔn)治療，從而提高診治效果、降低醫(yī)療費(fèi)用。

（2）不足之處：本研究所納入的樣本僅限于佳木斯地區(qū)，無法完全代表全國高寒地區(qū)，因此，今后仍需繼續(xù)進(jìn)行大樣本的采集與分析。此外，高血壓畢竟是一種多基因遺傳病，應(yīng)該考慮不同基因多態(tài)性之間的交互作用。

分別以美托洛爾和厄貝沙坦為代表的β1-腎上腺素受體（ADRB1）阻滯劑和血管緊張素Ⅱ-1型受體（AGTR1）阻滯劑已廣泛用于高血壓的管理，但長期服用此類藥物的人群表現(xiàn)出非常大的療效個(gè)體差異。研究發(fā)現(xiàn)，不同的遺傳背景會(huì)導(dǎo)致不同的藥物反應(yīng)，而受體相關(guān)基因的變異會(huì)對(duì)藥物反應(yīng)產(chǎn)生影響［1］?；蚨鄳B(tài)性可通過影響藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體等對(duì)藥物療效產(chǎn)生不同影響。因此，研究高血壓藥物相關(guān)受體ADRB1和AGTR1基因多態(tài)性可為臨床有效進(jìn)行高血壓個(gè)體化治療提供依據(jù)。

ADRB1阻滯劑受藥物作用靶點(diǎn)ADRB1的影響，AGTR1阻滯劑受藥物作用靶點(diǎn)AGTR1的影響。有調(diào)查發(fā)現(xiàn)高寒地區(qū)是高血壓的高發(fā)地帶［2］，而佳木斯位于黑龍江省東部地區(qū)，南起北緯45°56'至48°28'，西起東經(jīng)129°29'至135°5'，氣候寒冷、晝夜溫差大，冬長夏短，屬于高寒地區(qū)，因此當(dāng)?shù)厝巳菏茄芯扛吆貐^(qū)高血壓受體基因變異的理想人群。本研究通過對(duì)高寒地區(qū)高血壓患者進(jìn)行ADRB1（1165G＞C）（rs1801253）、AGTR1（1166A＞C）基因多態(tài)性檢測(cè)，比較高血壓患者與健康人基因多態(tài)性，旨在分析基因多態(tài)性與高血壓發(fā)病有無相關(guān)性，為ADRB1阻滯劑和AGTR1阻滯劑在高寒地區(qū)高血壓患者中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 高血壓患者納入、排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：符合《中國高血壓防治指南2010》［3］中的原發(fā)性高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：繼發(fā)性高血壓；有明顯心、肺、肝、腎及代謝性疾?。簧窠?jīng)系統(tǒng)疾??；過度飲酒〔飲酒史＞5年，乙醇量≥80 g/d，乙醇量（g）=飲酒量（ml）×乙醇濃度（%）×0.8〕和過度吸煙（吸煙指數(shù)＞400包年）者。

1.2 一般資料 選取2014年8月—2017年2月于佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院高血壓和心內(nèi)科門診就診及住院的符合研究標(biāo)準(zhǔn)的高血壓患者1 084例。546例進(jìn)行ADRB1基因檢測(cè)（記為高寒地區(qū)1組），其中男255例，女291例；平均年齡（57.1±15.8）歲。702例進(jìn)行AGTR1基因檢測(cè)（記為高寒地區(qū)2組），其中男343例，女359例；平均年齡（50.5±12.4）歲。

選取同期于本院進(jìn)行體檢的健康且未服用任何藥物的志愿者169例（記為對(duì)照組受試者），其中男94例，女75例；平均年齡（48.4±8.4）歲。

1.3 儀器與試劑 TL-988實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（西安天隆科技儀器有限公司），微測(cè)序基因分析程序（北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司），HC-3017高速離心機(jī)（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）。PHARMGENE 01 SNP 分析保存液，PHARM-GENE 200 SNP 分析樣品處理試劑（北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司）。

1.4 檢測(cè)方法 取所有受試者靜脈血5 ml置于EDTA管中，采用原位雜交熒光染色方法提取DNA并進(jìn)行ADRB1及AGTR1基因多態(tài)性檢測(cè)，其過程包括富集白細(xì)胞、裂解、加樣、PCR擴(kuò)增。

1.5 觀察指標(biāo) 比較高寒地區(qū)1組與對(duì)照組受試者ADRB1基因型、等位基因頻率，高寒地區(qū)2組與對(duì)照組受試者AGTR1基因型、等位基因頻率；并分析高寒地區(qū)高血壓患者與非高寒（北京［4］、湖南［5］、福建［6］）地區(qū)高血壓患者及高寒地區(qū)健康人群與非高寒（北京［4］、湖南［5］、福建［6］）地區(qū)高血壓患者 ADRB1、AGTR1基因型、等位基因頻率。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以（±s）表示；計(jì)數(shù)資料以相對(duì)數(shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Hardy-Winberg平衡檢驗(yàn)分析基因型分布是否符合遺傳學(xué)平衡。雙側(cè)檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 ADRB1基因多態(tài)性

2.1.1 高寒地區(qū)1組與對(duì)照組受試者ADRB1基因型、等位基因頻率比較 高寒地區(qū)1組與對(duì)照組受試者ADRB1基因型比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；高寒地區(qū)1組與對(duì)照組受試者ADRB1等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表1）。

2.1.2 Hardy-Winberg平衡檢驗(yàn) 對(duì)照組受試者ADRB1基因型的實(shí)際頻率與理論頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.26，P=0.88，見表2），符合Hardy-Weinberg平衡，表明樣本具有代表性。

2.2 AGTR1基因多態(tài)性

2.2.1 高寒地區(qū)2組與對(duì)照組受試者AGTR1基因型、等位基因頻率比較 高寒地區(qū)2組與對(duì)照組受試者AGTR1基因型、等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表3）。

2.2.2 Hardy-Winberg平衡檢驗(yàn) 對(duì)照組受試者AGTR1基因型的實(shí)際頻率與理論頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.04，P=0.85，見表4），符合Hardy-Weinberg平衡，表明樣本具有代表性。

2.3 高寒地區(qū)高血壓患者與非高寒地區(qū)高血壓患者ADRB1、AGTR1基因型、等位基因頻率比較 高寒地區(qū)1組高血壓患者與北京地區(qū)、湖南地區(qū)、福建地區(qū)高血壓患者ADRB1基因型、等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表5）。

表1 高寒地區(qū)1組與對(duì)照組受試者ADRB1基因型、等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 1 Comparison of ADRB1 genotypes and allele frequency between Group 1 and control group

表2 對(duì)照組受試者ADRB1基因型的實(shí)際頻率與理論頻率比較〔n（%），n=169〕Table 2 Comparison of the actual frequency and the theoretical frequency of ADRB1 genotypes in the control group

表3 高寒地區(qū)2組與對(duì)照組受試者AGTR1基因型、等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 3 Comparison of AGTR1 genotypes and allele frequency between Group 2 and control group

表4 對(duì)照組受試者AGTR1基因型的實(shí)際頻率與理論頻率比較〔n（%），n=169〕Table 4 Comparison of the actual frequency and the theoretical frequency of AGTR1 genotypes in the control group

高寒地區(qū)2組高血壓患者與北京地區(qū)高血壓患者AGTR1基因型、等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；高寒地區(qū)2組高血壓患者與湖南地區(qū)、福建地區(qū)高血壓患者AGTR1基因型、等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表6）。

2.4 高寒地區(qū)健康者與其他非高寒地區(qū)高血壓患者ADRB1、AGTR1基因型、等位基因頻率比較 對(duì)照組受試者與北京地區(qū)高血壓患者ADRB1基因型比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)照組受試者與北京地區(qū)高血壓患者ADRB1等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；對(duì)照組受試者與湖南、福建地區(qū)高血壓患者ADRB1基因型、等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表7）。

對(duì)照組受試者與北京地區(qū)高血壓患者AGTR1基因型、等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；對(duì)照組受試者與湖南、福建地區(qū)高血壓患者AGTR1基因型、等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表8）。

表5 高寒地區(qū)高血壓患者與非高寒（北京、湖南、福建）地區(qū)高血壓患者ADRB1基因型、等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 5 Comparison of ADRB1 genotypes and allele frequency between patients with hypertension in alpine areas and in non-alpine areas（Beijing，Hunan，and Fujian）

表6 高寒地區(qū)高血壓患者與非高寒（北京、湖南、福建）地區(qū)高血壓患者AGTR1基因型、等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 6 Comparison of AGTR1 genotypes and allele frequency between patients with hypertension in alpine areas and in non-alpine areas（Beijing，Hunan，and Fujian）

3 討論

ADRB1屬于G蛋白耦連家族，是心肌細(xì)胞表達(dá)的最重要的腎上腺素受體，其表達(dá)量和質(zhì)的改變可直接影響血壓。ARNOLD等［7］首先通過對(duì)高血壓大鼠進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，ADRB1基因與血壓相關(guān)。LIU等［8］研究發(fā)現(xiàn)，不同基因型的高血壓患者應(yīng)用美托洛爾治療后，血壓下降幅度存在明顯差異。

本研究通過檢測(cè)ADRB1基因型，得出高寒地區(qū)1組高血壓患者ADRB1基因C等位基因頻率為75.09%，而對(duì)照組受試者ADRB1基因C等位基因頻率為69.23%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示ADRB1基因C等位基因與高寒地區(qū)高血壓發(fā)病相關(guān)；北京地區(qū)高血壓患者ADRB1基因型與對(duì)照組受試者比較有差異，提示ADRB1基因型CC型與北京地區(qū)高血壓發(fā)病相關(guān)，可能與北京地區(qū)和本地區(qū)氣候存在差異有關(guān)。同樣，PENG等［9］通過病例對(duì)照研究發(fā)現(xiàn)，高血壓組的C（Arg389）等位基因頻率明顯高于健康對(duì)照組受試者（P＜0.001），在校正了性別、年齡和體質(zhì)指數(shù)后發(fā)現(xiàn)，每增多一個(gè)C（Arg389）基因突變，患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)也相應(yīng)增加。同時(shí)，本研究結(jié)果與李俊萍等［10］和李強(qiáng)等［11］對(duì)漢族人群的研究結(jié)果相似。但也有學(xué)者所得研究結(jié)果不同，其研究發(fā)現(xiàn)Gly389是導(dǎo)致高血壓的主要危險(xiǎn)因素［12］。WANG等［13］通過對(duì)ADRB1基因多態(tài)性與高血壓關(guān)系的研究進(jìn)行Meta分析得出，東亞地區(qū)Arg389等位基因會(huì)降低患高血壓風(fēng)險(xiǎn)。梁宇等［14］研究發(fā)現(xiàn)，中國健康人群的Gly389等位基因頻率明顯低于高血壓患者，提示Gly389等位基因可增加中國人的高血壓發(fā)病率。

表7 高寒地區(qū)健康者與非高寒（北京、湖南、福建）地區(qū)高血壓患者ADRB1基因型、等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 7 Comparison of ADRB1 genotypes and allele frequency between healthy people in alpine areas and patients with hypertension in non-alpine areas（Beijing，Hunan，and Fujian）

表8 高寒地區(qū)健康者與非高寒（北京、湖南、福建）地區(qū)高血壓患者AGTR1基因型、等位基因頻率比較〔n（%）〕Table 8 Comparison of AGTR1 genotypes and allele frequency between healthy people in alpine areas and patients with hypertension in non-alpine areas（Beijing，Hunan，and Fujian）

AGTR1是由腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（RAAS）中的初始底物血管緊張素原（AGT）轉(zhuǎn)化而成的，對(duì)血壓的調(diào)節(jié)有重要作用。余惠珍等［15］研究發(fā)現(xiàn)，AGTR1基因中A1166C多態(tài)性是導(dǎo)致高血壓的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可能參與高血壓發(fā)生及靶器官的損害。

本研究比較了高寒地區(qū)高血壓患者與健康者AGTR1（A1166C）基因型、等位基因頻率，但未見明顯差異，提示高寒地區(qū)高血壓的發(fā)生可能與AGTR1基因多態(tài)性無明顯相關(guān)性，A1166C不是高血壓的危險(xiǎn)因素。本研究結(jié)果與孟超等［16］研究結(jié)果一致，其研究發(fā)現(xiàn)ADRB1阻滯劑對(duì)不同AGTR1基因型的上海地區(qū)老年高血壓患者均有降壓療效，但其療效與是否攜帶C（1166C）等位基因無關(guān)。KOOFFREH等［17］對(duì)尼日利亞烏約市和卡拉巴爾市人群進(jìn)行的研究表明，A1166C多態(tài)性與高血壓無關(guān)。同樣也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)新疆哈薩克族人群A1166C多態(tài)性與高血壓不相關(guān)［18］。但STANKOVIC等［19］發(fā)現(xiàn)塞爾維亞人群A1166C多態(tài)性與男性高血壓有關(guān)。LIU等［20］的Meta分析表明，A1166C多態(tài)性與白種人及亞洲人原發(fā)性高血壓相關(guān)。何青芳等［21］通過對(duì)141例高血壓患者進(jìn)行AGTR1基因A1166C多態(tài)性進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，AGTR1基因可能是高血壓發(fā)病的遺傳標(biāo)志，但其研究樣本量太小，可能對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，需進(jìn)一步研究。

本研究結(jié)果顯示，高寒地區(qū)高血壓患者AGTR1基因型、等位基因頻率與湖南、福建地區(qū)高血壓患者有明顯差異，而湖南、福建地區(qū)高血壓患者AGTR1基因與對(duì)照組受試者比較，也同樣有明顯差異，其可能與所處地理位置、生活環(huán)境、氣候條件等因素有關(guān)，但各基因型與高血壓發(fā)病的關(guān)系還需進(jìn)一步研究。

綜上所述，ADRB1基因C等位基因與高寒地區(qū)高血壓發(fā)病相關(guān)，暫未發(fā)現(xiàn)AGTR1基因與高寒地區(qū)高血壓發(fā)病相關(guān)。

作者貢獻(xiàn)：王晶負(fù)責(zé)文章的初步構(gòu)思與設(shè)計(jì)、結(jié)果分析與解釋、撰寫論文；董天崴負(fù)責(zé)研究的實(shí)施與可行性分析；王晶、周萌、吳春麗、胡焱垚負(fù)責(zé)數(shù)據(jù)收集、整理和統(tǒng)計(jì)學(xué)處理；王爽、周萌負(fù)責(zé)論文修訂；楊軍負(fù)責(zé)文章的質(zhì)量控制及審校、對(duì)文章整體負(fù)責(zé)，監(jiān)督管理。

本文無利益沖突。