流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用研究

【摘要】：目的? 探究臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的作用價(jià)值。方法? 在2019年1月-2019年12月中采用多次嚴(yán)謹(jǐn)性的實(shí)驗(yàn)來分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，確保實(shí)驗(yàn)的真實(shí)性、嚴(yán)謹(jǐn)性，通過資料回顧性分析，總結(jié)臨床檢驗(yàn)中流式細(xì)胞術(shù)的可行性。結(jié)果? 最終實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，在臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)，可以有效檢驗(yàn)淋巴細(xì)胞亞群、腫瘤標(biāo)志物、HLA-B27抗原、臨床微生物。結(jié)論? 臨床檢驗(yàn)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的價(jià)值顯著，現(xiàn)已在多個(gè)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中得到應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】流式細(xì)胞術(shù);臨床檢驗(yàn);應(yīng)用價(jià)值

流式細(xì)胞術(shù)是借助流式細(xì)胞儀實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞的定量分選、分析技術(shù)，該技術(shù)可以在短時(shí)間內(nèi)分析數(shù)以萬計(jì)的細(xì)胞，在每個(gè)細(xì)胞中獲取的參數(shù)具有多樣性，將其應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)中，具有方便快捷、高精度、準(zhǔn)確性佳的優(yōu)勢。現(xiàn)階段在臨床上流式細(xì)胞術(shù)可以檢測受染細(xì)胞內(nèi)部、表面的病毒抗體，但是由于流失細(xì)胞術(shù)檢測多是單細(xì)胞，因此在進(jìn)行受染細(xì)胞檢測時(shí)具有一定的局限性，多將其用于血液標(biāo)本、尿液標(biāo)本、灌洗液（支氣管）標(biāo)本的檢驗(yàn)中[1]。在整個(gè)檢驗(yàn)的過程中，需要開展DNA-RNA的熒光標(biāo)記工作，將蛋白探針、代謝的活性呈現(xiàn)出來，作為細(xì)胞定量分析最為先進(jìn)的技術(shù)，現(xiàn)已成為臨床檢測的重要組成部分。本文重點(diǎn)探究臨床檢驗(yàn)中應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的作用價(jià)值，以供有關(guān)人士參考，現(xiàn)將報(bào)道數(shù)據(jù)整理如下。

1.資料與方法

1.1一般資料

本文研究開展時(shí)間為2019年1月-2019年12月，在該時(shí)間段內(nèi)收集流式細(xì)胞術(shù)的臨床檢驗(yàn)資料，依據(jù)資料收集結(jié)果發(fā)現(xiàn)，流式細(xì)胞術(shù)檢驗(yàn)技術(shù)為細(xì)胞分選、細(xì)胞定量分析，其用于實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞有很多，如腎上皮細(xì)胞、骨肉瘤細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞等。此次研究的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行獲得了倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)。

1.2方法

首先，檢驗(yàn)醫(yī)師需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，其涉及到的工作步驟包括鋪板、細(xì)胞轉(zhuǎn)染、細(xì)胞分板放置、樣本上機(jī)制備、藥物刺激、細(xì)胞獲得、細(xì)胞處理、試劑配制等。在這個(gè)操作過程中，需要對細(xì)胞的數(shù)量加強(qiáng)控制，確保每瓶的細(xì)胞數(shù)在1X107之下，在細(xì)胞計(jì)數(shù)之前需要在鋪板環(huán)節(jié)分化細(xì)胞，如果所計(jì)數(shù)的細(xì)胞存在高密度的情況，為了確保計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性，需要用試劑來稀釋細(xì)胞，使細(xì)胞倍數(shù)合理。具體在鋪板時(shí)需要在培養(yǎng)皿中置于合適數(shù)量的細(xì)胞，然后需要晃動(dòng)培養(yǎng)皿，避免細(xì)胞出現(xiàn)聚集的情況，確保其分布的均勻性，在晃動(dòng)培養(yǎng)皿時(shí)要注意以水平為方向，并且要注意動(dòng)作的輕柔性，以免培養(yǎng)液灑出，在完成上述工作后，將培養(yǎng)箱作為細(xì)胞的盛放容器，對細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

在細(xì)胞的轉(zhuǎn)染環(huán)節(jié)，首要操作是選擇適宜的染色劑，然后需要借助載體將基因質(zhì)粒構(gòu)建出來，當(dāng)前臨床常用的載體為DEF-FN，在轉(zhuǎn)染之前需要檢查細(xì)胞密度，只有密度值在50%-60%之間時(shí)才可以開展轉(zhuǎn)染，當(dāng)轉(zhuǎn)染時(shí)長超過12小時(shí)，需要以1：3的比例將細(xì)胞分板，在分板時(shí)主要以細(xì)胞密度為依據(jù)，確保最終的細(xì)胞密度處于30%[2]。

在選擇陽性對照物時(shí)，主要有兩種，即轉(zhuǎn)染質(zhì)粒、藥物處理細(xì)胞等，細(xì)胞鋪板超過1天，開展藥物刺激，培養(yǎng)1天后對獲取的細(xì)胞進(jìn)行處理，在收集培養(yǎng)液這一過程中，需要將適宜劑量的胰酶加入到相應(yīng)規(guī)格板中，等待期消化完全后再開展胰酶的中和工作。在上述工作結(jié)束后，需要間隔4小時(shí)以上在冰箱等儲(chǔ)存容器中取出細(xì)胞樣本，之后用1XPBS進(jìn)行清洗與混合，并將其置于水浴鍋中進(jìn)行半小時(shí)的避光處理，從而有效完成細(xì)胞樣本的制備工作中。

處理分選樣本時(shí)，需要在細(xì)胞貼壁處進(jìn)行相關(guān)的培養(yǎng)，在培養(yǎng)環(huán)節(jié)選擇細(xì)胞板規(guī)格在10cm，之后要充分消化培養(yǎng)酶，在細(xì)胞脫壁后，應(yīng)該選擇5ml左右的培養(yǎng)液進(jìn)行中和處理，確保細(xì)胞分散的均勻性，與此同時(shí)，需要進(jìn)行轉(zhuǎn)染效率的測定工作，以測定結(jié)果為依據(jù)，合理選擇分選模式，對細(xì)胞濃度進(jìn)行合理的調(diào)節(jié)，確保上樣速率的數(shù)值在每秒1000-3000個(gè)。

2.結(jié)果

本文調(diào)查結(jié)果顯示，流式細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用優(yōu)勢體現(xiàn)在同時(shí)在單個(gè)細(xì)胞中獲取多個(gè)參數(shù)，定量對受染細(xì)胞進(jìn)行檢驗(yàn)，準(zhǔn)確測定樣本中存在的病毒、病毒抗原，現(xiàn)階段流式細(xì)胞技術(shù)常用于淋巴細(xì)胞亞群、腫瘤標(biāo)志物、HLA-B27抗原、臨床微生物等方面。

3.討論

腫瘤標(biāo)志物的檢測主要是分析患者是否存在細(xì)胞癌變，主要是在檢測時(shí)，對腫瘤細(xì)胞DNA進(jìn)行染色處理，分析其含量，掌握細(xì)胞增值能力，以其為依據(jù)對治療方案進(jìn)行科學(xué)的制定。HLA—B27基因主要分析患者是否患有關(guān)節(jié)炎、脊柱炎，借助流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢驗(yàn)，需要采用CD3/HLA抗體，先將T淋巴細(xì)胞亞群測定出來，之后分析細(xì)胞表面HLA—B27的組織抗原，臨床微生物檢測有助于科學(xué)選取抗病菌藥物，降低細(xì)胞的耐藥性，主要是在檢測的過程中應(yīng)用熒光染料，依據(jù)發(fā)光輕度來判斷。

綜上所述，流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中廣泛應(yīng)用于淋巴細(xì)胞亞群、腫瘤標(biāo)志物、HLA-B27抗原、臨床微生物等方面，有利于疾病的診斷與治療，因此流式細(xì)胞術(shù)值得臨床進(jìn)一步應(yīng)用與推廣。

參考文獻(xiàn)：

[1]李文波，李文華. 流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用探究[J]. 影像研究與醫(yī)學(xué)應(yīng)用，2018，2（19）：219-220.

[2]王師，張孟源，童能勝，張火兵. 流式細(xì)胞術(shù)在臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用[J]. 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2017，14（06）：897-898+902.

作者簡介：李必生，男，1969年7月出生，四川南充人，漢族，本科，副主任技師，現(xiàn)為河北省醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)會(huì)委員