頂空氣相色譜法測定頭孢托侖匹酯中苯殘留量

林軍

摘??要：目的：建立頭孢托侖匹酯中苯殘留的氣相色譜檢測方法?方法：頂空毛細管氣相色譜法，F(xiàn)ID檢測器，HP-5毛細管柱，分流進樣，頂空加熱溫度70℃。結(jié)果：檢測限0.05ppm，精密度及線性關系良好，平均回收率95.9%。結(jié)論：本方法準確、靈敏度高，可用于頭孢妥侖匹酯中苯殘留檢測。

關鍵詞：頭孢托侖匹酯;苯殘留;氣相色譜法

一、前言

頭孢托侖匹酯是第四代口服頭孢菌素，對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌具有廣泛而強大的抗菌作用，臨床療效確切，安全穩(wěn)定，口服吸收好、體內(nèi)分布廣、血藥濃度高等特點，應用廣泛。

頭孢妥侖匹酯的常規(guī)溶劑二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯、DMF的檢測方法已經(jīng)收錄在藥典或已有報道，而工藝中間接引入的溶劑雜質(zhì)的研究報道較少。從用藥安全性角度，原料中引入的雜質(zhì)，特別是毒性較大的雜質(zhì)也是必須有相應的檢測方法來檢測控制。頭孢托侖匹酯中用到的常規(guī)溶劑丙酮、甲苯的生產(chǎn)工藝中用到苯，苯在中國藥典和《殘留溶劑指導原則》（ICH?Q3C）中被定義為一類溶劑，規(guī)定其限度為2ppm。痕量溶劑殘留的檢測方法已有報道中多為質(zhì)譜法、熱解吸/化學發(fā)光聯(lián)用技術(shù)、雙光子電離技術(shù)，操作復雜、且依賴昂貴儀器。目前尚未見頭孢托侖匹酯中苯殘留檢測方法的報道。本文參考中國藥典通則0861殘留溶劑檢查法和相關文獻，建立了頂空氣相色譜法測定頭孢妥侖匹酯中基因毒性雜質(zhì)苯殘留量的方法，該方法儀器通用易得、簡便、準確、靈敏。

二、儀器與試藥

Agilent?7890B氣相色譜儀（美國安捷侖公司）;

十萬分之一分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）

頭孢托侖匹酯（齊魯制藥有限公司提供，批號20190606）

N，N-二甲基甲酰胺（DMF，Merk公司，色譜純）

苯（國藥集團化使有限公司，色譜純）

三、方法與結(jié)果

1.色譜條件

色譜柱：HP-5，30m*0.53mm*5.0μm;檢測器：FID;載氣：氮氣;載氣流速：6.5mL/min;柱溫：50℃保持10分鐘，然后以30℃/min的速率升溫至180℃;進樣口溫度：150℃;檢測器溫度：250℃;頂空爐溫度：70℃;平衡時間：30min;進樣量1ml

2.溶液配制

對照溶液：精密量取5.7μl苯于盛有適量DMF的50ml容量瓶中，用DMF稀釋并定容混勻，為對照品儲備液。精密量取上述溶液0.5ml于盛有適量DMF的50ml容量瓶中，用DMF稀釋并定容混勻，為對照溶液。

供試品溶液：取供試品5000.0mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加DMF使其溶解并稀釋定容混勻，為供試品溶液。

系統(tǒng)適用性溶液：取供試品5000.0mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加對照溶液使其溶解并稀釋定容混勻，為供試品與對照品混合溶液。

3.專屬性考察

取空白溶劑DMF、對照溶液、供試品溶液、系統(tǒng)適用性溶液分別進樣，記錄色譜圖。結(jié)果表明，空白對測定無干擾，各組分分離度9.13（>1.5），被測組分峰理論塔板數(shù)5320（>5000），對稱因子1.09（在0.75～1.5范圍內(nèi)）。供試品中其它組分對測定結(jié)果無影響，方法專屬性好。

4.檢測限和定量限的測定

取對照溶液，逐步稀釋，用信噪比法計算檢測限LOD、定量限LOQ。使苯的信噪比（S/N）為3時，即為苯的檢測限，濃度為0.025μg/ml，換算樣品濃度后為0.05ppm;使苯的信噪比（S/N）為10時，即為苯的定量限，濃度為0.12μg/ml，換算樣品濃度后為0.2ppm。

5.線性與范圍

精密量取對照品貯備溶液0.1、0.4、0.8、1.0、1.5ml，分別置于100ml容量瓶中，加DMF稀釋定容，配置成10%、40%、80%、100%、150%限度溶度的溶液，進樣記錄色譜圖。以峰面積為縱坐標，以溶液濃度為橫坐標，進行線性回歸，得線性方程：Y=1.4893X+1.1568，相關系數(shù)r=0.9995，表明峰面積與濃度線性關系良好。

6.準確度（回收率）試驗

精密量取對照品貯備溶液0.8、1.0、1.2ml，分別置于100ml容量瓶中，約相當于限度的80%、100%、120%，加入已測定苯殘留量的供試品（批號：20190606，未檢出）約5000mg，用DMF溶解并稀釋定容，搖勻，作為回收率測試溶液，每個濃度配置3份，進樣記錄色譜圖，計算苯的量、回收率、平均回收率和RSD，結(jié)果80%、100%、120%濃度水平的回收率分別為95.6%、99.2%、92.9%。表明苯的回收率都在80%～120%之間，平均回收率95.9%，RSD2.23%，符合要求。

7.精密度（重復性）試驗

取對照溶液，進樣記錄圖譜，平行操作6次，結(jié)果苯的峰面積的RSD為4.13%，表明該方法精密度良好。

8.耐用性考察

在其它條件不變的情況下，考察了進樣口溫度（150℃±3℃）、流速（6.5ml/min±0.3ml/min）、柱溫（50℃±3℃）、頂空爐溫（70±3℃）、頂空平衡時間（30min±5min）及不同批號色譜柱，測試結(jié)果的變化，結(jié)果表明，在以上條件變化范圍內(nèi)，獲得的色譜圖苯與前后峰的分離度均≥1.5。

四、結(jié)論

通過以上實驗，本方法準確靈敏耐用性好，可用于頭孢托侖匹酯中苯殘留檢測。具體方法如下：采用HP-530m*0.53mm*5.0μm色譜柱、FID檢測器，載氣為氮氣，流速：6.5mL/min，柱溫為50℃保持10分鐘，然后以30℃/min的速率升溫至180℃，進樣口溫度150℃，檢測器溫度250℃，頂空爐溫度70℃平衡30min，分流進樣量1ml。測定法：取供試品5000.0mg，精密稱定，置10ml容量瓶中，加DMF使其溶解并稀釋定容混勻，為供試品溶液。精密量取苯對照品儲備液0.5ml，稀釋至50ml為對照溶液。頂空進樣記錄色譜圖，按照外標法以峰面積計算。

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