凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體的遺傳多樣性分析

彭敏 陳慧芳 李強(qiáng)勇 楊春玲 曾地剛 劉青云 趙永貞 陳曉漢 林勇 陳秀荔

摘要：【目的】明確凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體的遺傳變異情況及近親繁殖對個(gè)體生長速度和抗病性的影響，為凡納濱對蝦種質(zhì)改良提供理論依據(jù)?！痉椒ā繌腉enBank收錄的微衛(wèi)星（SSR）引物序列中篩選11對能有效擴(kuò)增的SSR引物，對2016—2018年桂海1號凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體（合計(jì)853個(gè)樣品）進(jìn)行遺傳多樣性分析，監(jiān)測相鄰2個(gè)世代選育群體間的遺傳變異情況?！窘Y(jié)果】11對SSR引物在凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體中共檢測到103個(gè)等位基因，各SSR位點(diǎn)的等位基因數(shù)（Na）平均為9.3636個(gè)，有效等位基因數(shù)（Ne）平均為3.8355個(gè)，觀測雜合度（Ho）平均為0.4794，期望雜合度（He）平均為0.7074，多態(tài)信息含量（PIC）平均為0.6708;除TUMXLv10.33位點(diǎn)呈中度多態(tài)性（0.250.50）;對應(yīng)的平均Na為8.7272、7.3636和8.0000個(gè)，平均Ne為3.8676、3.7654和3.8010個(gè)，平均Ho為0.3975、0.5224和0.4876，平均He為0.7057、0.7057和0.7029。Hardy-Weinberg平衡檢測結(jié)果顯示，絕大部分SSR位點(diǎn)偏離Hardy-Weinberg平衡。凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體在11個(gè)SSR位點(diǎn)上的遺傳分化系數(shù)（Fst）均小于0.0500，即凡納濱對蝦群體的遺傳分化很小;凡納濱對蝦群體內(nèi)近交系數(shù)（Fis）介于-0.0101～0.8098，平均為0.3543，且除C11654位點(diǎn)為負(fù)值外，其余SSR位點(diǎn)均為正值，表明凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體的近交程度較高。分子方差分析（AMOVA）結(jié)果顯示，69.78%的遺傳變異來源于凡納濱對蝦個(gè)體內(nèi)，而29.96%的變異來源于凡納濱對蝦個(gè)體間。【結(jié)論】桂海1號凡納濱對蝦各世代選育群體尚具有較豐富的遺傳變異，但群體遺傳結(jié)構(gòu)處于不穩(wěn)定狀態(tài)。因此，今后應(yīng)通過人工選育方式保留有利突變、淘汰有害突變，同時(shí)避免近親繁殖，或引進(jìn)優(yōu)質(zhì)品種進(jìn)行雜交以擴(kuò)充基因庫，保護(hù)凡納濱對蝦的遺傳多樣性，防止種質(zhì)退化。

關(guān)鍵詞： 凡納濱對蝦;選育群體;微衛(wèi)星（SSR）分子標(biāo)記;遺傳多樣性;遺傳變異

Abstract：【Objective】To clarify the genetic variation of three consecutive generations of? Litopenaeus vannamei and the influence of inbreeding on individual growth rate and disease resistance， and provide a theoretical basis for the improvement of L. vannamei germplasm. 【Method】Using 11 pairs of effectively amplified SSR primers selected from the sequence of microsatellite（SSR） primers collected by GenBank， the genetic diversity of L. vannamei Guihai No.1 breeding population for three consecutive generations （2016-2018） （853 samples） was analyzed to monitor the genetic diversity between two adjacent generation breeding populations. 【Result】Using the 11 pairs of SSR primers， 103 alleles were detec-ted in the three consecutive L. vannamei generations. The average number of alleles（Na） at each SSR locus was 9.3636， and the average number of effective alleles（Ne） was 3.8355， the average observed heterozygosity（Ho） was 0.4794， the average expected heterozygosity（He） was 0.7074， and the average polymorphic information content（PIC） was 0.6708; except that TUMXLv10.33 locus was moderately polymorphic（0.250.50）. The corresponding average Na were 8.7272， 7.3636 and 8.000， and the average Ne were 3.8676， 3.7654 and 3.8010， the average Ho were 0.3975， 0.5224 and 0.4876， the average He were 0.7057， 0.7057 and 0.7029， respectively. Hardy-Weinberg balance test showed that most SSR sites deviated from Hardy-Weinberg balance. The genetic differentiation coefficients（Fst） at the 11 SSR sites of the three consecutive L. vannamei generations were all less than 0.0500， indicating that the genetic differentiations of the L. vannamei populations were very small. The inbreeding coefficient （Fis） was -0.0101-0.8098， with an average of 0.3543， and except for the C11654 locus was negative， the rest of the SSR loci were positive， indicating a high degree of inbreeding among three successive generations of L. vannamei. The analysis of molecular variance （AMOVA） showed that 69.78% of the genetic diversity originated from individuals of L. vannamei while 29.96% originated from between individuals of L. vannamei.【Conclusion】The three generations of Guihai No.1 still have rich genetic variation， but the genetic structure of the populations is in an unstable state. Therefore， based on the results of molecular markers， it is suggested that should retain favorable mutations and eliminate harmful mutations through artificial breeding to avoid inbreeding， or introduce fine breeds for hybrid and enlarge gene bank， protect the genetic polymorphism of L. vannamei and prevent germplasm degradation.

Key words： Litopenaeus vannamei; breeding population; microsatellite（SSR） molecular marker; genetic diversity; genetic variation

0 引言

【研究意義】凡納濱對蝦（Litopenueus vannamei）又稱南美白對蝦，原產(chǎn)于秘魯至墨西哥太平洋沿岸，1988年中國科學(xué)院海洋研究所首次引進(jìn)凡納濱對蝦，并于1992年突破人工繁殖技術(shù)難關(guān)，之后凡納濱對蝦在全國范圍內(nèi)大面積推廣養(yǎng)殖，現(xiàn)已發(fā)展成為我國對蝦養(yǎng)殖的主導(dǎo)品種（王興強(qiáng)等，2004;陳錨等，2008;黃薇等，2014）。但目前我國凡納濱對蝦養(yǎng)殖的良種覆蓋率較低，大多數(shù)對蝦養(yǎng)殖場使用的蝦苗是從美國進(jìn)口雜交種的數(shù)代甚至十幾代孵化苗種，其生長性能和抗逆性嚴(yán)重退化，蝦病發(fā)生率高，導(dǎo)致對蝦養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益急劇下降。加之世界各國對知識產(chǎn)權(quán)保護(hù)意識的增強(qiáng)，嚴(yán)格限制原種親蝦出口，致使我國凡納濱對蝦養(yǎng)殖業(yè)面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。因此，亟待我國科學(xué)家開展凡納濱對蝦品種選育，培育出具有自主知識產(chǎn)權(quán)的優(yōu)良品種?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】微衛(wèi)星（SSR）分子標(biāo)記具有簡便、快速、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，在水產(chǎn)生物的親緣關(guān)系鑒定、系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化分析、種群遺傳結(jié)構(gòu)、遺傳連鎖圖譜構(gòu)建及遺傳變異等研究領(lǐng)域發(fā)揮著重要作用（Wolfus et al.，1997;Valles-Jimenez et al.，2004;Zhang et al.，2007;王霞等，2009;董在杰等，2010）。至今，有關(guān)SSR分子標(biāo)記在凡納濱對蝦上的應(yīng)用研究已有較多報(bào)道。童馨等（2009）采用SSR分子標(biāo)記對凡納濱對蝦4個(gè)世代7個(gè)養(yǎng)殖群體進(jìn)行遺傳多樣性分析;謝麗等（2009）對凡納濱對蝦4個(gè)選育群體進(jìn)行遺傳多樣性SSR分析;馬春燕等（2011）基于8個(gè)高多態(tài)性的SSR位點(diǎn)分析凡納濱對蝦引進(jìn)親蝦群體及引進(jìn)親蝦子一代、子二代群體的遺傳變異情況;包秀鳳（2014）采用7對SSR引物對國內(nèi)3個(gè)養(yǎng)殖群體及4個(gè)引進(jìn)親蝦子一代群體的遺傳多樣性進(jìn)行分析;Zhang等（2014）利用7個(gè)SSR分子標(biāo)記分析從新加坡和美國引進(jìn)凡納濱對蝦7個(gè)群體的種質(zhì)特性;吳怡迪等（2016）采用SSR分子標(biāo)記對凡納濱對蝦4個(gè)群體和1個(gè)美國引進(jìn)群體的遺傳結(jié)構(gòu)和遺傳多樣性進(jìn)行分析，旨在監(jiān)測各凡納濱對蝦群體的遺傳變異情況;楊銘等（2017）基于轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)開發(fā)出凡納濱對蝦SSR分子標(biāo)記，進(jìn)而對凡納濱對蝦進(jìn)行遺傳多樣性分析;李東宇等（2017）對凡納濱對蝦選育群體與雜交群體進(jìn)行遺傳多樣性分析，同時(shí)利用13個(gè)SSR分子標(biāo)記對2個(gè)子代群體進(jìn)行遺傳多樣性及遺傳分化研究，結(jié)果表明雜交群體較選育群體具有更豐富的遺傳多樣性;劉洪濤等（2018）選用15對多態(tài)性較高的SSR引物對凡納濱對蝦8個(gè)地理群體的遺傳多樣性和親緣關(guān)系進(jìn)行分析，以期為海南凡納濱對蝦的育種提供科學(xué)依據(jù);陳錦豪等（2019）選用8對SSR引物對廈門市凡納濱對蝦5個(gè)親蝦群體進(jìn)行遺傳多樣性分析，旨在明確凡納濱對蝦親蝦群體的遺傳結(jié)構(gòu)、種質(zhì)資源狀況及近交程度，為該地區(qū)凡納濱對蝦種質(zhì)資源的提純、保優(yōu)、復(fù)壯及遺傳選育提供參考依據(jù);黃小帥等（2019）利用SSR分子標(biāo)記分析凡納濱對蝦7個(gè)引進(jìn)群體子一代的遺傳多樣性，為后續(xù)挖掘種苗遺傳背景與其養(yǎng)殖性能的關(guān)聯(lián)性提供理論參考。【本研究切入點(diǎn)】在人工培育優(yōu)良品種的過程中，利用分子標(biāo)記監(jiān)測相鄰2個(gè)世代間的遺傳變異，或監(jiān)控近交對個(gè)體生長率和抗病力的影響，對保護(hù)凡納濱對蝦遺傳多態(tài)性、防止種質(zhì)資源退化，以及明確育種親本間的親緣關(guān)系具有重要意義。其中，利用SSR分子標(biāo)記對群體間進(jìn)行遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)差異性分析，不僅有助于對選育群體進(jìn)行遺傳多樣性監(jiān)測，還對親本群體選擇具有指導(dǎo)作用（Cruz et al.，2004）。廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院在引進(jìn)美國凡納濱對蝦原種的基礎(chǔ)上，通過近十年的群體繼代和家系選育，選育出桂海1號凡納濱對蝦耐寒家系（趙永貞，2014），但至今鮮見針對其連續(xù)世代選育群體進(jìn)行遺傳多樣性分析，育種親本間的親緣關(guān)系尚未明確。【擬解決的關(guān)鍵問題】以廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院凡納濱對蝦育種中心選育建立的凡納濱對蝦耐寒家系為試驗(yàn)材料，利用11對SSR引物對8個(gè)耐寒家系2016—2018年連續(xù)3年的凡納濱對蝦選育親本進(jìn)行群體遺傳多樣性分析，監(jiān)測相鄰2個(gè)世代選育群體間的遺傳變異情況及近親繁殖對個(gè)體生長速度和抗病性的影響，為凡納濱對蝦種質(zhì)改良提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 樣品來源及其基因組DNA提取

凡納濱對蝦樣本來源于廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院凡納濱對蝦育種中心2016—2018年用于選擇育種的親本群體，分別屬于3個(gè)世代，合計(jì)853個(gè)樣品（尾）。剪取凡納濱對蝦肌肉組織，經(jīng)液氮速凍后置于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。采用醋酸銨法提取凡納濱對蝦肌肉組織DNA：稱取肌肉組織100 mg，加入600.0 μL DNA提取緩沖液，剪碎后加入12.0 μL 20 mg/mL蛋白酶K（終濃度400 μg/mL），充分混勻后放入56 ℃水浴鍋中溫浴5 h或過夜;取出冷卻至室溫，加入200.0 μL 7.5 mmol/L醋酸銨溶液，顛倒混勻2 min，14000 r/min離心5 min，收集上清液，裝入新的離心管中。加入等體積預(yù)冷異丙醇，-80 ℃靜置15 min后14000 r/min離心5 min，沉淀用70%酒精洗滌2次;自然干燥后，加入100.0 μL滅菌ddH2O，加入1.0 μL 10 mg/mL胰RNA酶，37 ℃水浴30 min。采用1.0%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA完整性，以蛋白核酸分析儀檢測其濃度，并稀釋至100 ng/μL，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1. 2 SSR引物篩選及合成

根據(jù)本課題組的前期研究（彭敏等，2014），從GenBank收錄的14對SSR引物中選取11對能有效擴(kuò)增的SSR引物（表1），用于凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體的遺傳多樣性分析。其中，上游引物5'端分別加FAM、HEX和TAMAR等熒光標(biāo)記。所有SSR引物均委托生工生物工程（上海）股份有限公司合成。

1. 3 PCR擴(kuò)增及多態(tài)性分析

PCR反應(yīng)體系20.0 μL：2×ES Taq MasterMix 5.0 μL，10 μmol/L上、下游引物各0.4 μL，DNA模板2.0 μL，超純水補(bǔ)足至20.0 μL。擴(kuò)增程序：94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃ 45 s，48～62 ℃（表1）45 s，72 ℃ 45 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸5 min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物送至北京基諾博實(shí)生物技術(shù)有限公司，采用ABI 3130自動測序分析儀GeneScan進(jìn)行測序分析。在進(jìn)行大樣本測序分析前，每對SSR引物擴(kuò)增少量樣品進(jìn)行預(yù)測序分析。

1. 4 統(tǒng)計(jì)分析

采用GeneMarker 3.0.0對測序結(jié)果進(jìn)行分析，記錄各SSR位點(diǎn)不同個(gè)體的等位基因和基因型。使用PopGene 1.32計(jì)算每個(gè)SSR位點(diǎn)的等位基因頻率（Allele frequency）、等位基因數(shù)（Observed number of alleles，Na）、有效等位基因數(shù)（Effective allele number，Ne）、觀測雜合度（Observed heterozygosity，Ho）、期望雜合度（Expected heterozygosity，He）及Hardy-Weinberg平衡遺傳偏離概率（PHWE），根據(jù)Nei的方法計(jì)算不同群體間的遺傳距離、遺傳分化系數(shù)（Fst）及近交系數(shù)（Fis），并以PIC-Calc 0.6對獲得的等位基因頻率進(jìn)行多態(tài)信息含量（Polymorphism information content，PIC）計(jì)算（Nagy et al.，2012）。

2 結(jié)果與分析

2. 1 11對SSR引物的特異性擴(kuò)增結(jié)果

采用11對SSR引物對桂海1號凡納濱對蝦DNA混池進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，均能擴(kuò)增出特異性的目的條帶（圖1），與預(yù)期結(jié)果相符。

2. 2 凡納濱對蝦遺傳多樣性分析結(jié)果

11對SSR引物在凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體中共檢測到103個(gè)等位基因，各SSR位點(diǎn)的Na為6～14個(gè)，平均為9.3636個(gè);Ne為1.9734～4.9414個(gè)，平均為3.8355個(gè);Ho為0.1040～0.8070，平均為0.4794;He為0.4935～0.8647，平均為0.7074;PIC為0.4641～0.8509，平均為0.6708（表2）。

凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體在11個(gè)SSR位點(diǎn)上的遺傳多態(tài)性分析結(jié)果（表3）表明，2016年選育群體的Na為5～13個(gè)，平均為8.7272個(gè);Ne介于1.8121～7.1520個(gè)，平均為3.8676個(gè)。2017年選育群體的Na為5～11個(gè)，平均為7.3636個(gè);Ne介于2.1180～7.5242個(gè)，平均為3.7654個(gè)。2018年選育群體的Na為5～12個(gè)，平均為8.0000個(gè);Ne介于1.9335～7.0199個(gè)，平均為3.8010個(gè)。根據(jù)Botstein等（1980）的判斷標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)PIC>0.50時(shí)，為高度多態(tài)性;當(dāng)0.25

2. 3 凡納濱對蝦遺傳分化分析結(jié)果

凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體在不同SSR位點(diǎn)上的遺傳分化參數(shù)見表4。其中，凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體在11個(gè)SSR位點(diǎn)上的Fst為0.0011～0.0113，均小于0.0500，表明凡納濱對蝦群體的遺傳分化很小;凡納濱對蝦群體內(nèi)Fis介于-0.0101～0.8098，平均為0.3543，且除C11654位點(diǎn)為負(fù)值外，其余SSR位點(diǎn)均為正值，表明凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體的近交程度較高。

在凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體中，2016年選育群體與2017年選育群體和2018年選育群體間的Fst分別為0.0056和0.0037，其遺傳分化均達(dá)極顯著水平（P<0.01）;2017年選育群體與2018年選育群體間的Fst為0.0007，遺傳分化差異不顯著（P>0.05）。對凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體進(jìn)行分子方差分析（AMOVA），結(jié)果發(fā)現(xiàn)69.78%的遺傳變異來源于凡納濱對蝦個(gè)體內(nèi)，而29.96%的變異來源于凡納濱對蝦個(gè)體間（表5），即凡納濱對蝦個(gè)體內(nèi)的遺傳變異大于個(gè)體間的遺傳變異。

2. 4 UPGMA聚類分析結(jié)果

基于個(gè)體間的遺傳距離，通過PHYLIP v3.5對2016年選育群體（234尾凡納濱對蝦）進(jìn)行UPGMA聚類分析，結(jié)果表明234個(gè)樣品間的最大遺傳距離為3.5835，最小遺傳距離為0.0000，平均為1.4894。2017年選育群體（341尾凡納濱對蝦）的UPGMA聚類分析結(jié)果表明，341個(gè)樣品間的最大遺傳距離為3.6606，最小遺傳距離為0.0000，平均為1.0758。2018年選育群體（278尾凡納濱對蝦）的UPGMA聚類分析結(jié)果表明，278個(gè)樣品間的最大遺傳距離為3.6632，最小遺傳距離為0.0000，平均為1.0099。

3 討論

遺傳多樣性是物種適應(yīng)復(fù)雜多變環(huán)境、維持生存和進(jìn)化的基礎(chǔ)，遺傳變異程度直接影響物種進(jìn)化潛力及其對環(huán)境變化的適應(yīng)能力（O'Connell and Wright，1997;張文靜等，2003;崔蕾等，2012）。Na、PIC及遺傳雜合度（H）等遺傳參數(shù)均是檢測種群遺傳多樣性的主要指標(biāo)（頡曉勇等，2008;劉海情等，2012;李建林等，2015;葉寧等，2017）。其中，Na是衡量群體遺傳變異的重要指標(biāo)，其數(shù)值越接近所檢測到的等位基因絕對數(shù)，表明等位基因在群體中分布越均勻。PIC是描述SSR位點(diǎn)多態(tài)性的重要參數(shù)，反映子代所獲得的某個(gè)等位基因標(biāo)記來源于其親代同一個(gè)等位標(biāo)記的可能性（劉麗和劉楚吾，2006），即表征物種的遺傳變異程度。本研究結(jié)果表明，11個(gè)SSR位點(diǎn)在凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體中的Na為6～14個(gè)，平均為9.3636個(gè)，達(dá)到用于遺傳多樣性評估的標(biāo)準(zhǔn)，即每個(gè)SSR位點(diǎn)至少要有4個(gè)等位基因（Wajid et al.，2014）。Botstein等（1980）認(rèn)為，0.250.50代表該SSR位點(diǎn)呈高度多態(tài)性。在本研究的凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體中，2016年選育群體的PIC為0.4210～0.8470，2017年選育群體的PIC為0.4939～0.8545，2018年選育群體的PIC為0.4561～0.8422，3個(gè)世代選育群體的平均PIC分別為0.6689、0.6657和0.6650，均屬于高度多態(tài)性。在11個(gè)SSRE位點(diǎn)中，除了TUMXLv10.33為中度多態(tài)性位點(diǎn)，其余10個(gè)SSR位點(diǎn)均呈高度多態(tài)性。相對較高的突變率可導(dǎo)致SSR位點(diǎn)的PIC較高（Gyapay et al.，1994），說明桂海1號凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體均具有較豐富的遺傳變異。

H是衡量群體遺傳變異的最適參數(shù)，是指所檢測SSR位點(diǎn)上雜合子基因型占該位點(diǎn)所有基因型的比例，主要反映群體的遺傳變異程度（Shikano and Taniguchi，2002;李莉等，2006）。H和PIC均能反映群體內(nèi)的個(gè)體遺傳變異程度，且數(shù)值高低與遺傳變異程度呈正相關(guān)。本研究結(jié)果表明，2016年選育群體的Ho介于0.1288～0.7632，平均為0.3975，He介于0.4492～0.8621，平均為0.7057;2017年選育群體的Ho介于0.1026～0.8673，平均為0.5224，He介于0.5286～0.8684，平均為0.7057;2018年選育群體的Ho介于0.0846～0.7698，平均為0.4876，He介于0.4837～0.8592，平均為0.7029。說明凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體具有較高的遺傳多樣性水平。Ho低于He，則雜合度偏離指數(shù)（D）為負(fù)值（唐江等，2018），表明凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體存在雜合子缺失現(xiàn)象，與Valles-Jimenez等（2004）的研究結(jié)果一致。雜合子缺失現(xiàn)象可能是研究對象數(shù)量有限、近親雜交或人為干擾等因素引起稀有堿基缺失所致（Antoro et al.，2006）。Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)是評估樣本代表性及其基因分型質(zhì)量的重要工具（Crane et al.，2004;陳靜等，2018）。本研究中，凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體有嚴(yán)重偏離Hardy-Weinberg平衡狀態(tài)的傾向，表明凡納濱對蝦群體遺傳結(jié)構(gòu)處于相對不穩(wěn)定的狀態(tài)。由于群體小、近親交配及等位基因突變等均可導(dǎo)致所檢測種群基因型偏離Hardy-Weinberg平衡（宋煒等，2017），因此，凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體樣本小及選育過程中存在近親繁殖可能是造成偏離Hardy-Weinberg平衡的主要原因。

Fst是反應(yīng)群體間遺傳分化的重要指標(biāo)（李建林等，2015;于思夢等，2017），而Fis是衡量群體遺傳動態(tài)的重要指標(biāo)（劉海情等，2012）。凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體在11個(gè)SSR位點(diǎn)上的Fst為0.0011～0.0113，均小于0.0500，表明凡納濱對蝦群體的遺傳分化很小;凡納濱對蝦群體內(nèi)的Fis介于-0.0101～0.8098，平均為0.3543，且除C11654位點(diǎn)為負(fù)值外，其余SSR位點(diǎn)均為正值，表明凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體的近交程度較高，雜合子缺失可能與近親交配有關(guān)。AMOVA分析結(jié)果表明，69.78%的遺傳變異來源于凡納濱對蝦個(gè)體內(nèi)，而29.96%的變異來源于凡納濱對蝦個(gè)體間，說明凡納濱對蝦個(gè)體內(nèi)的遺傳變異大于個(gè)體間的遺傳變異。綜上所述，本研究中的凡納濱對蝦連續(xù)3個(gè)世代選育群體親緣關(guān)系較近，可能與凡納濱對蝦群體存在近交現(xiàn)象及群體樣本小有關(guān)，但具體原因有待進(jìn)一步探究。

4 結(jié)論

桂海1號凡納濱對蝦各世代選育群體尚具有較豐富的遺傳變異，但群體遺傳結(jié)構(gòu)處于不穩(wěn)定狀態(tài)。因此，今后應(yīng)通過人工選育方式保留有利突變、淘汰有害突變，同時(shí)避免近親繁殖，或引進(jìn)優(yōu)質(zhì)品種進(jìn)行雜交以擴(kuò)充基因庫，保護(hù)凡納濱對蝦的遺傳多樣性，防止種質(zhì)退化。

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（責(zé)任編輯 蘭宗寶）