蒙醫(yī)五味甘露浴對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠肝GSH、GSH-Px、SOD活性及MDA含量的影響

昂格力瑪 水玲 伊茹娜 斯琴 陳英松

【摘 要】 目的：觀察蒙醫(yī)五味甘露浴對佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）大鼠的肝臟GSH、GSH-Px、SOD活性，MDA含量的影響。方法：將30只SD雄性大鼠隨機(jī)分為空白組，模型組，蒙醫(yī)五味甘露浴組，每組10只。模型組，蒙醫(yī)五味甘露浴組兩組大鼠進(jìn)行造模，無菌條件下在右后足趾部注射1 mL的CFA（完全弗氏佐劑）致炎，空白組注射同劑量的生理鹽水。造模后第3 d開始對蒙醫(yī)五味甘露浴組進(jìn)行五味甘露浴治療，1次/d，30 min/次，連續(xù)治療15 d，溫度為（40±2） ℃。空白組和模型組做溫水?。?5±2） ℃對照，采用ELISA法檢測大鼠肝臟GSH，GSH-Px，SOD活性及MDA含量。結(jié)果：與正常組相比，模型組SOD、GSH、GSH-Px的活性明顯下降，MDA的含量明顯增加（P<0.05）。與模型組相比，蒙醫(yī)五味甘露浴組SOD、GSH、GSH-Px的活性明顯升高，MDA的含量明顯減少（P<0.05）。結(jié)論：蒙醫(yī)五味甘露浴可通過調(diào)節(jié)AA大鼠肝臟GSH、GSH-Px、SOD活性，MDA的含量，起到對軟骨保護(hù)、對機(jī)體抗氧化作用。

【關(guān)鍵詞】 蒙醫(yī)五味甘露浴;佐劑性關(guān)節(jié)炎;自由基

【中圖分類號】R285.5 ? 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A ? ?【文章編號】1007-8517（2020）10-0041-03

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid Arthritis，RA）是一種慢性自身免疫性疾病，伴隨著復(fù)雜的炎癥介質(zhì)導(dǎo)致關(guān)節(jié)的損害、滑膜炎癥、軟骨和骨的損壞，導(dǎo)致人類和動(dòng)物嚴(yán)重的機(jī)體功能障礙[1]。目前研究表明免疫學(xué)指標(biāo)的檢測對于類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的價(jià)值較高，能夠較好地輔助已有的實(shí)驗(yàn)室診斷[2]。風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎屬蒙醫(yī)“協(xié)日烏素病”范疇，蒙醫(yī)稱關(guān)節(jié)“協(xié)日烏素病”。蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為飲食起居不當(dāng)、長時(shí)間在寒濕環(huán)境中生活、氣候過于寒涼、陰雨連綿、感染引起的一種罕見病，起病緩慢，病程較長，易于復(fù)發(fā)，難于控制的一種慢性關(guān)節(jié)疾病[3]。臨床實(shí)驗(yàn)顯示，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，蒙醫(yī)五味甘露對風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療有一定的療效。蒙醫(yī)五味甘露浴具有較好地免疫調(diào)節(jié)作用[4]，具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用[5]。蒙醫(yī)五味甘露浴是蒙古族特色療法之一，由小白蒿、水柏枝、麻黃、杜鵑葉、刺柏等5種藥物組成。直接從體外給溫?zé)岽碳?，以達(dá)到治療疾病的目的。浴具有悠久的歷史，資源豐富，療效明顯，副作用小等特點(diǎn)[6]。佐劑性關(guān)節(jié)炎模型的研究日漸增多，其抗氧化和抗炎作用受到廣泛關(guān)注。蒙醫(yī)五味甘露浴劑，具有舒筋散結(jié)、通絡(luò)止痛、益氣補(bǔ)腎、祛燥黃水等功效。臨床上主要治療四肢僵直或拘攣，關(guān)節(jié)腫痛、肌肉萎縮等“黃水”疾病。方中刺柏葉味甘、澀、性涼、輕、鈍，用以清腎熱，燥黃水;水柏芝味甘，性涼、鈍、重、固，以清熱，斂毒、祛黃水、清肉毒;小白蒿味苦，性涼、鈍、澀、燥，有通活血脈、祛燥黃水、活血化瘀、益腎壯腰等功效。麻黃味苦、澀，性涼、鈍、輕、澀、燥，有清熱，除血蟲，破痞消腫，發(fā)汗止痛[7]之效;照白山味甘、苦、澀，性溫、輕、大毒，有祛巴達(dá)干，祛痰等功效。

本實(shí)驗(yàn)采用CFA （完全弗氏佐劑）誘導(dǎo)的佐劑性關(guān)節(jié)炎（adjuvant arthritis， AA）模型大鼠。觀察治療前后大鼠肝臟GSH、GSH-Px、SOD活性及MDA含量的變化，探討蒙醫(yī)五味甘露浴的抗氧化，疏通氣血作用。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器 蒙醫(yī)五味甘露浴劑（批號：720121110，內(nèi)蒙古自治區(qū)蒙中醫(yī)醫(yī)院中心制劑室提供）;完全弗氏佐劑（CFA，Sigma公司提供）;GSH（谷胱甘肽），GSH-Px（谷胱甘肽過氧化物酶），SOD（超氧化物歧化酶），MDA（丙二醛），ELISA檢測試劑盒，北京新亞太生物科技有限公司提供，批號分別為DZE30786，DZE30787，DZE30267，DZE30266;

80-2式離心機(jī)：金壇市化城敏科實(shí)驗(yàn)儀器廠;全自動(dòng)多功能酶標(biāo)儀： MULTISKAN MK3，Thermo，USA;電熱恒溫培養(yǎng)箱：DH4000A，天津泰斯特;MINI shaker：MH-1， kylin-Bell Lab Instruments QILINBEIER。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 取7周齡，清潔級雄性SD大鼠[SCxK（軍）2012-0004]30只，體重180～200 g，由北京實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司提供，在黑暗與光明周期為12 h，溫度為（24±2）℃的環(huán)境，自由飲食水進(jìn)行3 d適應(yīng)性飼養(yǎng)。

1.3 分組與造模 將30只SD大鼠，隨機(jī)分為空白組、模型組、蒙醫(yī)五味甘露浴組，每組10只。對模型組，蒙醫(yī)五味甘露浴組大鼠進(jìn)行造模。無菌條件下在大鼠右后足趾注射0.1 mL的CFA （內(nèi)含0.1℅滅活結(jié)核桿菌） 致炎，空白組注射同劑量的0.9%的生理鹽水，之后針眼處涂抹紫藥水[6]。

1.4 治療方案 空白組在第3天開始進(jìn)行溫水浴對照，1次/d，30 min/次，連續(xù)治療15 d，藥浴方法為在50 cm×30 cm×20 cm的半透明塑料容器中加入溫度為（25±2）℃的清潔飲用水1000 mL，將大鼠的四肢和尾部浸泡在溫水中，治療結(jié)束后用清潔毛巾擦拭干凈后放入鼠籠中。

模型組在造模之后的浴療方法同空白組。

蒙醫(yī)五味甘露浴組在造模后第3天開始進(jìn)行五味甘露浴治療，藥浴濃度為33.4%，1次/d，30 min/次，連續(xù)治療15 d，藥浴方法同空白組，藥浴溫度為（40±2） ℃。

1.5 取材 末次治療后24 h，用戊巴比妥鈉腹腔麻醉大鼠，切開腹腔取下完整肝臟并稱重后置于凍存管，用液氮快速冷凍，放入-80 ℃冰箱保存待測。

1.6 檢測方法 采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測大鼠肝臟GSH，GSH-Px，SOD活性及MDA含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間單因素方差分析法，LSD-T檢驗(yàn)，不服從正態(tài)分布或者方差不齊的用非參數(shù)檢驗(yàn)，以P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠肝勻漿MDA含量和SOD、OGSH-Px、GSH活性的影響。

與正常組相比，模型組SOD、GSH、GSH-Px的活性明顯下降（P<0.05），MDA的含量明顯增加（P<0.05）。五味組與模型組相比蒙醫(yī)五味甘露浴組SOD、GSH、GSH-Px的活性明顯升高（P<0.05），MDA的含量明顯減少（P<0.05）。見表1，如圖1所示。

2.2 各組大鼠肝指數(shù)變化 與空白組比較，模型組大鼠活動(dòng)減少、體重減輕，肝臟指數(shù)明顯增加（P<0.05），且隨著造模時(shí)間的延長，模型組大鼠炎癥的加重，表現(xiàn)為原發(fā)側(cè)足趾腫脹進(jìn)行性加重，且出現(xiàn)漸進(jìn)性的繼發(fā)性足腫脹和前足腫脹，逐漸行動(dòng)不便、站立不穩(wěn)，肝臟指數(shù)逐漸增加。與模型組比較，五位組大鼠肝臟指數(shù)明顯降低（P<0.05）。如圖2所示。

3 討論

蒙醫(yī)五味甘露浴是蒙古族特色療法之一，由小白蒿、水柏枝、麻黃、杜鵑葉、刺柏等5種藥物組成。直接從體外給溫?zé)岽碳ぃ赃_(dá)到治療疾病的目的。浴具有悠久的歷史，資源豐富，療效明顯，副作用小等特點(diǎn)[7]。佐劑性關(guān)節(jié)炎模型的研究日漸增多，其抗氧化和抗炎作用受到廣泛關(guān)注。蒙醫(yī)五味甘露浴劑，具有舒筋散結(jié)、通絡(luò)止痛、益氣補(bǔ)腎、祛燥黃水等功效。臨床上主要治療四肢僵直或拘攣，關(guān)節(jié)腫痛、肌肉萎縮等“黃水”疾病。方中刺柏葉味甘、澀、性涼、輕、鈍，用以清腎熱，燥黃水;水柏芝味甘，性涼、鈍、重、固，以清熱，斂毒、祛黃水、清肉毒;小白蒿味苦，性涼、鈍、澀、燥，以通活血脈、祛燥黃水、活血化瘀、益腎壯腰等功效。麻黃味苦、澀，性涼、鈍、輕、澀、燥，以清熱，除血蟲，破痞消腫，發(fā)汗止痛[8];照白山味甘、苦、澀，性溫、輕、大毒。以祛巴達(dá)干，祛痰等功效。

肝臟是機(jī)體物質(zhì)代謝的重要器官，其中的自由基代謝及抗氧化酶變化較為明顯。SOD是保護(hù)肝臟所必需的蛋白質(zhì)，對預(yù)防、修復(fù)氧化應(yīng)激引起肝損傷中具有重要的作用，也是體內(nèi)重要的防御自由基毒害的抗氧化酶，分解過氧化氫和脂質(zhì)過氧化物，阻斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護(hù)細(xì)胞免受傷。有文獻(xiàn)顯示RA患者體內(nèi)SOD含量低于正常人，SOD和MDA是相互對立的氧自由基相關(guān)因子，當(dāng)體內(nèi)SOD含量偏低時(shí)，不能防御自由基，分解不了過氧化氫和脂質(zhì)過氧化物，不能阻斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，因此MDA會增加。MDA是脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，是造成細(xì)胞膜損傷的物質(zhì)基礎(chǔ)，其含量可以反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映自由基對細(xì)胞的損傷程度。MDA增多會引起生命大分子蛋白質(zhì)、核酸等發(fā)生交聯(lián)聚合，故有細(xì)胞毒性。GSH是一種低分子清除劑，其量的多少是衡量機(jī)體抗氧化能力大小的重要因素。GSH含量增多會引起體內(nèi)過量的氧自由基造成肝細(xì)胞膜脂質(zhì)的過氧化，損傷抗氧化酶。GSH-Px是體內(nèi)催化過氧化氫分解的重要的酶，它特意催化GSH對過氧化氫的還原反應(yīng)，可以起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用[9]，GSH-Px水平的高低反映著機(jī)體抗氧化能力，GSH-Px水平下降表明機(jī)體抗氧化能力的下降，導(dǎo)致機(jī)體自由基生成大量增加。

本實(shí)驗(yàn)中，AA模型組大鼠肝臟GSH、GSH-Px和SOD活性顯著降低，而MDA的濃度增加，說明AA模型組大鼠肝臟組織中存在氧化應(yīng)激作用。過量的氧自由基造成肝細(xì)胞膜脂質(zhì)的過氧化，損傷抗氧化酶，引起GSH、GSH-Px和SOD的催化作用降低甚至失活。還有研究發(fā)現(xiàn)RA患者抗氧化能力下降，在急性和慢性炎癥RA患者滑膜液內(nèi)O2的增長超過了SOD的清除能力，且SOD水平低于正常人，同時(shí)脂質(zhì)過氧化損傷增加。大量產(chǎn)生的自由基促進(jìn)軟骨的破壞，加重RA關(guān)節(jié)損傷。

與空白組比，模型組肝臟指數(shù)明顯增長，與模型組比，五味組肝臟指數(shù)明顯下降，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。具體原因還有待進(jìn)一步研究。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明蒙醫(yī)五味甘露浴具有抗氧化作用，能提高AA體內(nèi)降低的抗氧化能力，減輕細(xì)胞的過氧化損傷，同時(shí)能保護(hù)好AA大鼠軟骨。實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示蒙醫(yī)五味甘露浴對AA大鼠有抗氧化作用和對其關(guān)節(jié)有保護(hù)作用。參考文獻(xiàn)

[1]劉明強(qiáng).TCDCA對佐劑性關(guān)節(jié)炎模型大鼠的治療作用及其作用機(jī)制研究[D].呼和浩特市：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，2012.

[2]畢宇.類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床檢驗(yàn)診斷性能[J].養(yǎng)生保健指南，2019（22）：83.

[3]陳巴乙拉，王順.蒙醫(yī)傳統(tǒng)五味甘露浴治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎100例[J].中國民族醫(yī)藥雜志，2013，19（13）：18.

[4]陳英松，水玲，烏云格日樂，等.蒙醫(yī)五味甘露浴對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠血清白介素的影響[J].中國民族民間醫(yī)藥，2015，23（15）：1-2.

[5]張麗霞，水玲，陳英松.蒙醫(yī)五味甘露浴對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠5-HT、DA、NE的影響[J].中國民族民間醫(yī)藥，2015，23（22）：9-10.

[6]韋婷，劉宇，王天虹，等.蒙醫(yī)五味甘露浴散加減方對佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠血清RF和滑膜組織JNKl的影響[J].西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2015，41（6）：708-712.

[7]白樹梅，陳英松.簡述蒙醫(yī)五味甘露[J].中國蒙醫(yī)藥，2016（5）：22-25.

[8]納順達(dá)來，塞西婭.試述蒙醫(yī)五味甘露浴[J].中國民族醫(yī)藥，2006，12（6）：47-48.

[9]盧俊，陳英松，阿古拉，等.蒙醫(yī)溫針對大鼠疲勞模型肝MDA、GSH含量及GSH-Px、SOD活性的影響[M].蒙醫(yī)藥學(xué)研究，2018（7）：174-179.

（收稿日期：2020-02-19 編輯：陶希睿）