維A 酸對(duì)糖尿病腎病大鼠血中MCP-1及尿中足細(xì)胞的影響*

劉建林 李惠 牛聰 王文政 胡春艷 陳明亮

（1河南大學(xué)第一附屬醫(yī)院腎內(nèi)科 開(kāi)封475001；2河南大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 開(kāi)封475004）

糖尿病是一種以高血糖為臨床特征的代謝性疾病，多尿、多飲、多食、消瘦是其主要的臨床特征[1]。糖尿病合并多種并發(fā)癥，其中以糖尿病腎病的危害性、嚴(yán)重性最大，糖尿病腎病由于機(jī)體長(zhǎng)時(shí)間處于高血糖狀態(tài)引起腎血流動(dòng)力學(xué)改變，引發(fā)微血管病變，進(jìn)而導(dǎo)致腎小球硬化，腎臟結(jié)構(gòu)改變，是造成胰島素依賴(lài)性糖尿?。↖DDM）患者死亡的主要原因[2]。在血管病變中，炎癥為主要影響因素，單核細(xì)胞趨化蛋白-1（Monocyte Chemotactic Protein-1, MCP-1）作為細(xì)胞趨化因子，是炎癥反應(yīng)的重要介導(dǎo)細(xì)胞因子。 在腎小球的過(guò)濾中，由于腎小球基底膜與足細(xì)胞相連，使足細(xì)胞在其過(guò)濾中起到重要的作用[3]。 本研究采用維A 酸對(duì)糖尿病腎病大鼠進(jìn)行治療，旨在探討維A 酸對(duì)糖尿病腎病大鼠血中MCP-1及尿中足細(xì)胞的影響。 現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院提供的健康大鼠20只，隨機(jī)將其分為對(duì)照組和觀察組，各10只，另設(shè)正常組10只。 年齡2～7周，平均（3.45±2.13）周，體質(zhì)量150～200g。對(duì)照組和正常組采用適量食用油進(jìn)行灌服， 觀察組使用維A 酸（國(guó)藥準(zhǔn)字H10950191）40～80mg/d， 灌服8周， 所有動(dòng)物都正常進(jìn)食食用水。 本研究經(jīng)過(guò)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 血中MCP-1檢測(cè)方法 對(duì)所有大鼠在實(shí)驗(yàn)每周進(jìn)行血糖測(cè)定，在第8周進(jìn)行股動(dòng)脈抽血進(jìn)行MCP-1含量的測(cè)定。用酶聯(lián)免疫吸附法進(jìn)行MCP-1含量檢測(cè)。 用鼠尾血進(jìn)行血糖測(cè)定。

1.2.2 尿中足細(xì)胞檢測(cè)方法 在試驗(yàn)結(jié)束前1天對(duì)所有大鼠的24h 尿液進(jìn)行收集，根據(jù)相關(guān)研究方法進(jìn)行足細(xì)胞的測(cè)定。使用間接免疫熒光法，進(jìn)行腎小球足細(xì)胞特異性標(biāo)記蛋白（PCX）的測(cè)定[4]。 PCX陽(yáng)性的細(xì)胞為足細(xì)胞。

1.3 觀察指標(biāo) 對(duì)比各組大鼠血清中MCP-1的變化情況；各組24h 尿蛋白含量；兩組大鼠尿液中足細(xì)胞及腎小球中位硬化指數(shù)；進(jìn)行相關(guān)性分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用SPSS25.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。 計(jì)量資料以（±s）表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用SNK-q 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson 相關(guān)性分析，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清中MCP-1的變化情況比較 第8周，對(duì)照組和觀察組大鼠血清中MCP-1表達(dá)水平高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組血清中MCP-1水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；對(duì)照組和觀察組2周、4周、8周的血糖值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但均高于正常組（P＜0.05）。 見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清中MCP-1的變化情況比較（±s）

表1 各組大鼠血清中MCP-1的變化情況比較（±s）

注：與正常組比較，*P＜0.05；與正常組比較，▲P＜0.05；與觀察組比較#P＜0.05；與正常組比較，△P＜0.05。

組別 n 周數(shù) 血中MCP-1（pg/ml） 血糖（mmol/L）正常組--3.125±0.044對(duì)照組--觀察組1010101010101010102482482484.756±0.066#△--3.411±0.111▲5.711±0.5816.112±0.4235.877±0.55130.675±2.341*28.991±3.211*31.542±2.046*30.441±2.415*29.114±3.521*29.667±3.564*

2.2 兩組大鼠尿液中足細(xì)胞數(shù)及腎小球中位硬化指數(shù)比較 在同一時(shí)間段內(nèi)，觀察組大鼠尿液中足細(xì)胞數(shù)明顯低于對(duì)照組， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；隨著時(shí)間的進(jìn)展，尿液中足細(xì)胞含量逐漸增多，組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。 見(jiàn)表2。

表2 兩組大鼠尿液中足細(xì)胞數(shù)及腎小球中位硬化指數(shù)比較（±s）

表2 兩組大鼠尿液中足細(xì)胞數(shù)及腎小球中位硬化指數(shù)比較（±s）

注：與觀察組比較， *P＜0.05，△P＜0.05；與第6周比較，#P＜0.05，▲P＜0.05。

組別 n 尿液足細(xì)胞數(shù)（個(gè)/ml）腎小球中位硬化指數(shù)6周 12周對(duì)照組觀察組6周 12周10101.27±0.75△0.33±0.273.11±1.41*#1.55±0.82#0.130.110.54*#0.26▲

2.3 各組24h 尿蛋白含量比較 觀察組24h 尿蛋白量為（15.36±2.03）mg/24h，對(duì)照組為（33.12±2.77）mg/24h，正常組為（8.01±0.41）mg/24h，對(duì)照組24h 尿蛋白測(cè)定值明顯高于正常組和觀察組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）， 觀察組明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.4 相關(guān)性分析 腎小球硬化指數(shù)與尿足細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)（r=0.66，P＜0.01））；尿足細(xì)胞數(shù)與24h 尿蛋白含量為正相關(guān)（r=0.52，P＜0.01）。

3 討論

MCP-1是存在與于核因子-κB（NF-κB）和轉(zhuǎn)錄活化蛋白-1（AP-1）的結(jié)合位點(diǎn)，與NF-κB 的DNA序列進(jìn)行結(jié)合，進(jìn)行基因激活的轉(zhuǎn)錄[5]。 巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞等都存在MCP-1。 在糖尿病患者存在高血糖時(shí)，蛋白非酶糖化產(chǎn)物、氧化應(yīng)激、IL-1等都會(huì)對(duì)MCP-1的表達(dá)產(chǎn)生影響， 導(dǎo)致表達(dá)上升。 MCP-1在炎癥反應(yīng)中也起著重要的介導(dǎo)作用，由于具有趨化作用，導(dǎo)致單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞等在循環(huán)中使動(dòng)脈壁啟動(dòng)炎癥反應(yīng)，單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞相互轉(zhuǎn)換，且會(huì)誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞向內(nèi)膜下間隙遷移，出現(xiàn)異常增殖導(dǎo)致粥樣斑塊形成[6]。

足細(xì)胞也就是腎小球上皮細(xì)胞，是腎小球?yàn)V過(guò)膜的重要部分。 在出現(xiàn)損傷脫落后，其腎小球內(nèi)的數(shù)量和密度就會(huì)出現(xiàn)減少，使腎小球基底膜暴露，出現(xiàn)濾過(guò)膜機(jī)械障礙，以及電荷屏障功能異常，而慢性腎功能衰竭中糖尿病腎病是引起其發(fā)病的常見(jiàn)原因[7～9]。 表明足細(xì)胞與糖尿病腎病的發(fā)展有著重大關(guān)系。 而足細(xì)胞的丟失會(huì)導(dǎo)致患者出現(xiàn)蛋白尿，而蛋白尿的出現(xiàn)提示病變的出現(xiàn)， 可為糖尿病腎病的病情發(fā)展提供可靠的參考指標(biāo)[10]。本研究結(jié)果顯示，在第8周，對(duì)照組和觀察組大鼠血清中MCP-1表達(dá)水平明顯高于正常組（P＜0.05）；觀察組明顯低于對(duì)照組，（P＜0.05）。 對(duì)照組和觀察組的血糖值在2周、4周、8周比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但兩組都明顯高于正常組（P＜0.05）；在同一時(shí)間段內(nèi)，觀察組大鼠尿液中足細(xì)胞明顯低于對(duì)照組（P＜0.05）；隨著時(shí)間的進(jìn)展，尿液中足細(xì)胞含量逐漸增多（P＜0.05）；對(duì)照組24h 尿蛋白含量明顯高于正常組和觀察組（P＜0.05），觀察組高于正常組（P＜0.05）；腎小球硬化指數(shù)與尿足細(xì)胞數(shù)呈正相關(guān)（rs=0.66，P＜0.01）， 尿足細(xì)胞數(shù)與24h 尿蛋白定量為正相關(guān)（r=0.52，P＜0.01）。 表明維A 酸可能作為蛋白尿藥物存在，對(duì)炎癥因子的形成也有一定的抑制作用。綜上所述， 維A 酸對(duì)糖尿病腎病大鼠血中MCP-1表達(dá)水平有一定抑制作用，并能改善蛋白尿的產(chǎn)生，提示維A 酸對(duì)糖尿病腎病大鼠血中MCP-1及尿中足細(xì)胞有較好的影響。