板藍(lán)根抗病毒成分提取工藝研究

王林華

摘? 要：本文采用正交試驗(yàn)法對(duì)板藍(lán)根抗病毒成分的工藝進(jìn)行研究，提高其提取率，以便于充分發(fā)揮藥效。

關(guān)鍵詞：板藍(lán)根;靛玉紅;提取工藝

板藍(lán)根是十字花科菘藍(lán)屬植物菘藍(lán)的干燥根，是中國(guó)傳統(tǒng)中藥。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，味苦，性寒，具有清熱解毒、涼血利咽的功效[1-2]。在臨床上板藍(lán)根常用于病毒性疾病及細(xì)菌感染性疾病。隨著對(duì)板藍(lán)根研究的深入，人們從板藍(lán)根中提取分離的成分越來(lái)越多，尤其是脂溶性成分，在抗病毒方面具有十分重要的作用[3]。

1 材料

AR2140型電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司），1260系列高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫）。板藍(lán)根均自山東省，經(jīng)鑒定符合要求。靛玉紅對(duì)照品（中國(guó)食品藥品鑒定研究院），甲醇為色譜純，冰醋酸為分析純，水為屈臣氏水。

2方法與結(jié)果

2.1靛玉紅分析方法的建立

2.1.1色譜條件

色譜柱：Agilent SB-C18柱（250mm×4.6mm）

檢測(cè)波長(zhǎng)：288nm

柱溫：25℃

進(jìn)樣量：20μl

流速：1.0ml/min

流動(dòng)相：甲醇-0.1%冰醋酸（80：20）

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備

取靛玉紅對(duì)照品約10mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20min使溶解，放至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻;從中取1ml，置500ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml溶液中含靛玉紅0.08μg）。

2.1.3 供試品溶液的制備

取供試品粉末約0.05g，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇適量，超聲處理20min使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，用微孔濾膜（0.22μm）濾過(guò)，濾液另器保存，即得。

2.1.4 線性關(guān)系考察

精密吸取對(duì)照品溶液0，1.0，2.0，2.5，3.75，5ml，分別置5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。以對(duì)照品峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，對(duì)照品濃度（X）為橫坐標(biāo)，得回歸方程Y=5499X+3.5879，r=0.9996，表明靛玉紅濃度在0～0.08μg/ml范圍內(nèi)對(duì)峰面積呈良好線性關(guān)系。

2.1.5 精密度試驗(yàn)

取供試品溶液，于所建立的色譜條件下進(jìn)樣6次，記錄對(duì)照品峰面積，并計(jì)算RSD =1.16%，小于2%，表明供試品含量測(cè)定方法的精密度良好。

2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

在本試驗(yàn)條件下，取供試品溶液分別在室溫放置0，2，4，6，10，12h，于所建立的色譜條件下進(jìn)樣，記錄峰面積并計(jì)算RSD=1.50%，表明供試品溶液至少在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品共6份，每份約0.5g，精密稱定，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，于所建立的色譜條件下進(jìn)樣，記錄峰面積，并計(jì)算RSD=0.80%，小于2%，表明含量測(cè)定方法重復(fù)性良好。

2.1.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密吸取已知含量的供試品溶液6份，分別精密加入0.08μg的靛玉紅對(duì)照品，依法進(jìn)行含量測(cè)定，按公式計(jì)算平均回收率為99.26%，RSD=0.47%，表明此方法可行。

2.2 提取工藝研究

2.2.1溶劑用量、提取次數(shù)、提取時(shí)間的優(yōu)選

2.2.1.1藥材吸醇量考察

加醇量是影響提取效率的重要因素之一，加醇量太少會(huì)導(dǎo)致提取不完全，過(guò)多則會(huì)導(dǎo)致溶劑的浪費(fèi)，提高生產(chǎn)成本。藥材吸醇率的考察意義在于更科學(xué)的確定加醇量。

按處方比例稱取藥材，共三份，各100g，加800ml 70%乙醇浸泡，以藥材完全浸泡透芯為指標(biāo)，每隔30min觀察一次，直至藥材全部浸透，濾出全部未被吸收的乙醇溶液，測(cè)量體積，計(jì)算吸醇量。結(jié)果見表1。

藥材吸醇量結(jié)果表明：平均吸醇量為98ml，故確定加醇量為6倍、8倍、10倍。

2.2.1.2乙醇濃度的選擇

根據(jù)文獻(xiàn)資料，確定乙醇濃度為70%、75%、80%。

2.2.1.3 溶劑量選擇

處方藥材的平均吸醇量約藥材質(zhì)量的1倍，加溶劑量太大不但浪費(fèi)溶劑，又使成本過(guò)高，故選擇溶劑量為6倍、8倍、10倍。

2.2.1.4提取次數(shù)選擇

按常規(guī)方法，選擇提取次數(shù)依次為：1次、2次、3次。

2.2.1.5提取時(shí)間的選擇

按常規(guī)方法，選擇煎煮時(shí)間依次為1h、2h、3h。

2.2.2正交試驗(yàn)

按處方比例稱取藥材，共9份，各100g，以提取物中靛玉紅含量為考察指標(biāo)，優(yōu)化乙醇回流提取工藝。

采用L9（34）的正交設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)，按因素水平表（表2）設(shè)計(jì)的條件進(jìn)行回流提取，提取液濾過(guò)，濾液合并，減壓回收乙醇至無(wú)醇味，濃縮，干燥至恒重，依法測(cè)定干膏中靛玉紅的含量，計(jì)算提取率。正交試驗(yàn)表見表3，方差分析表見表4。

結(jié)果表明，以靛玉紅的含量為考核指標(biāo)，影響乙醇提取工藝的因素作用順序?yàn)椋禾崛r(shí)間>提取次數(shù)>醇濃度>加醇量，其中提取時(shí)間的影響具有極顯著性（P<0.05），A、B和D因素的影響沒(méi)有顯著性，考慮到要用最經(jīng)濟(jì)和最常規(guī)的方案，確定提取工藝應(yīng)為A2B2C2D2，即加8倍于藥材量的濃度為75%的乙醇提取二次，每次2h。

3討論

3.1 前期研究中靛玉紅的最大吸收波長(zhǎng)在280nm和530nm，由于采用530nm波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)，液相圖譜干擾較大，故采用280nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 提取工藝中乙醇濃度根據(jù)文獻(xiàn)資料[4～5]，并結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)最終確定正交試驗(yàn)乙醇濃度為70～80%。

參考文獻(xiàn)

[1]? 王建敏，李偉.板藍(lán)根顆粒中有效成分的測(cè)定及藥理作用研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2019，16（18）：49-52.

[2]? 常寶勤，李梅梅，藺華吉，等.板藍(lán)根中生物堿靛藍(lán)、靛玉紅的提取與分析[J].檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)，2019，22：40-43.

[3]? 黃遠(yuǎn)，董福越，李楚源.板藍(lán)根中主要化學(xué)成分含量測(cè)定方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥業(yè)，2020，29（7）：150-156.

[4]? 王璐璐，鄭穩(wěn)生.板藍(lán)根中有效成分提取方法的研究[J].中成藥，2005，27（12）：1387-1390.

[5]? 史曉昱.板藍(lán)根提取工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究[D].山西：山西醫(yī)科大學(xué)，2007.