紫蘇葉對(duì)高尿酸血癥模型小鼠的影響

張蕾 郝婧瑋 景云榮

摘要：尿酸過高是高尿酸血癥的典型特征，為了研究紫蘇葉對(duì)高尿酸血癥的治療效果，通過灌胃酵母膏與氧嗪酸鉀復(fù)配物來建立高尿酸血癥小鼠模型，檢測紫蘇葉對(duì)小鼠體內(nèi)的尿酸（UA）、肌酐（Cr）和尿素（Urea）含量的影響及對(duì)腎組織的保護(hù)作用。結(jié)果表明，與模型組相比，紫蘇葉低濃度和高濃度給藥組小鼠的腎指數(shù)、UA、Cr和Urea水平均有不同程度的下降，且有劑量依賴性。通過觀察腎臟組織學(xué)形態(tài)發(fā)現(xiàn)，與模型組相比，紫蘇葉給藥組小鼠腎小管管腔擴(kuò)張現(xiàn)象有所緩解，說明紫蘇葉可以降低血清中UA水平，促進(jìn)腎臟對(duì)尿酸的排泄作用，對(duì)腎組織具有一定的保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞：紫蘇葉;高尿酸血癥;腎組織;尿酸含量;腎臟指數(shù)

尿酸是人體嘌呤代謝的終末產(chǎn)物，體內(nèi)的嘌呤代謝紊亂，導(dǎo)致尿酸生成過多或排泄減少，造成體內(nèi)尿酸蓄積而形成高尿酸血癥。高尿酸血癥的發(fā)生與高血壓、高血脂、動(dòng)脈粥樣硬化、肥胖、糖尿病等疾病密切相關(guān)，目前，隨著人們生活質(zhì)量的不斷提高，飲食結(jié)構(gòu)和生活習(xí)慣也隨之發(fā)生改變，高尿酸血癥的發(fā)病率逐漸提高，并且患病的年齡也逐漸呈現(xiàn)低齡化，已經(jīng)成為一種嚴(yán)重影響人們生活質(zhì)量，甚至是威脅人類健康的代謝性疾病[1-2]。

紫蘇（Perilla frutescens）為唇形科塔花族雙子葉植物，枝葉茂盛時(shí)收割，攤在地上或懸于通風(fēng)處陰干，干后將葉摘下，具有抗氧化、抑制神經(jīng)氨酸酶、抑菌等功效[3-6]。但目前紫蘇葉在高尿酸血癥方面的治療還未見報(bào)道，因此，本研究將紫蘇葉作用于高尿酸血癥模型小鼠來探討其對(duì)高尿酸血癥的作用效果，旨在為新型藥物的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑及儀器

無特定病原體動(dòng)物（SPF）級(jí)雄性昆明小鼠40只，體質(zhì)量為（20±5） g;氧嗪酸鉀、尿酸（UA）檢測試劑盒、肌酐（Cr）檢測試劑盒、尿素（Urea）檢測試劑盒、紫蘇葉，均購自上海源葉生物科技有限公司;酵母膏，購自上海麥克林生化科技有限公司;酶標(biāo)儀，購自北京普朗新技術(shù)有限公司;YD-1508R全自動(dòng)組織切片機(jī)，購自金華市益迪醫(yī)療設(shè)備有限公司）。

1.2 分組及給藥

將40只小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只。分別為空白對(duì)照組、模型（高尿酸血癥）組、紫蘇葉低劑量（200 mg/kg）組和紫蘇葉高劑量（400 mg/kg）組，給藥量為0.2 mL/10 g小鼠體質(zhì)量。空白對(duì)照和模型組灌胃等量生理鹽水作為安慰劑，給藥組連續(xù)給藥4周，末次給藥后禁食不禁水，采用眼球取血的方式提取小鼠血清。

1.3 高尿酸血癥小鼠模型的建立

除空白對(duì)照組外，其他小鼠用于制備高尿酸血癥模型。試驗(yàn)期間每日對(duì)小鼠進(jìn)行稱質(zhì)量。通過給予造模劑酵母膏[15 g/（kg bw·d）]與氧嗪酸鉀[200 mg/（kg bw·d）]的復(fù)配劑，抑制尿酸酶活性，抑制小鼠體內(nèi)尿酸分解，增高血清尿酸水平，完成高尿酸小鼠模型。建模成功的小鼠隨機(jī)分為模型組、紫蘇葉低濃度給藥組和紫蘇葉高濃度給藥組。

1.4 小鼠血液指標(biāo)檢測

給藥4周后，末次給藥后禁食不禁水，采用眼球取血的方式，取血置于離心機(jī)，3 000 r/min離心 20 min，取上層血清檢測尿酸、尿素和肌酐水平。

1.5 腎臟指數(shù)

給藥期間每日稱小鼠質(zhì)量，處死后取腎臟稱質(zhì)量，腎質(zhì)量（mg）與體質(zhì)量（g）的比值為腎臟指數(shù)。

1.6 腎組織病理檢查

小鼠眼球取血處死后，取出腎臟組織，用10%中性甲醛溶液固定，進(jìn)行常規(guī)脫水、石蠟包埋切片、蘇木精-伊紅（HE）染色，置于光學(xué)顯微鏡下觀察病理學(xué)變化。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。各組小鼠體質(zhì)量、小鼠血UA水平以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的形式表示，組間比較采用單因素方差分析。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫蘇葉對(duì)高尿酸血癥小鼠尿酸、肌酐和尿素水平的影響

由表1可知，與空白對(duì)照組相比，模型組的尿酸、肌酐、尿素含量明顯偏高且與空白對(duì)照組相比具有顯著性差異（P<0.01），當(dāng)灌胃給藥4周后，低劑量給藥組小鼠的尿酸、肌酐、尿素水平均低于模型組;高劑量給藥組小鼠的尿酸、肌酐、尿素水平均遠(yuǎn)低于模型組（P<0.01）且與空白對(duì)照組相差不多。

2.2 紫蘇葉對(duì)高尿酸血癥小鼠的腎臟指數(shù)

由表2可知，與空白對(duì)照組相比，模型組腎指數(shù)顯著降低;與模型組相比，紫蘇葉給藥組小鼠的腎指數(shù)顯著下降（P<0.05）。

2.3 紫蘇葉對(duì)高尿酸血癥小鼠的腎臟組織學(xué)形態(tài)的影響

空白對(duì)照組小鼠腎小管上皮細(xì)胞形態(tài)飽滿，排列整齊，未見腎小球擴(kuò)張，且管腔清晰，無炎癥及纖維化出現(xiàn)。模型組小鼠腎小球數(shù)量上未見差異，但腎小管管腔明顯擴(kuò)張，上皮細(xì)胞開始皮化、萎縮、壞死，有炎癥。低劑量給藥組小鼠腎小管管腔仍出現(xiàn)擴(kuò)張現(xiàn)象，但程度比模型組有所緩解，但與正常組相比還是存在明顯差異，高劑量給藥組小鼠腎小管管腔擴(kuò)張明顯改善，與空白對(duì)照組差異較?。▓D1）。

3 討論與結(jié)論

尿酸是人類嘌呤化合物的終末代謝產(chǎn)物，人體內(nèi)的嘌呤代謝紊亂容易導(dǎo)致血液中尿酸增多，進(jìn)而引起一種代謝性疾病稱為高尿酸血癥。目前研究發(fā)現(xiàn)高尿酸血癥與多種疾病有關(guān)，如高血壓、高甘油三酯血癥、冠心病、代謝綜合征等，病情發(fā)展非常迅速，死亡率明顯提高;其直接毒性、繼發(fā)炎癥反應(yīng)等會(huì)導(dǎo)致人體內(nèi)的多種器官系統(tǒng)損害[7]，高尿酸血癥的發(fā)生嚴(yán)重威脅人類的生命健康。目前高尿酸血癥治療仍以藥物治療為主，因此，選用一種對(duì)肝腎組織損害小的藥用成分對(duì)于此病的治療具有非常重要的意義。目前關(guān)于建立高尿酸血癥模型的研究較多，戴惠嚀等在研究葵花盤粉有效成分對(duì)小鼠高尿酸血癥的治療作用試驗(yàn)中，采用膝關(guān)節(jié)腔注射微晶型尿酸鈉的方法建立模型[8];曾金祥等在研究車前子醇提物降低急性高尿酸血癥小鼠血尿酸水平及機(jī)制研究試驗(yàn)中，采用尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀鹽為化學(xué)誘導(dǎo)劑，建立了高尿酸血癥小鼠模型[9];譚明亮等在研究茶多酚對(duì)高尿酸血癥小鼠尿酸水平的影響及機(jī)制研究試驗(yàn)中，采用灌胃的方法建立模型檢測小鼠尿酸水平，均發(fā)現(xiàn)高于造模前，說明高尿酸血癥小鼠造模成功[10]。本研究通過灌胃酵母膏與氧嗪酸鉀復(fù)配的造模劑，來抑制尿酸酶活性，控制小鼠體內(nèi)尿酸分解，增高血清尿酸水平來建立高尿酸血癥小鼠模型。造模成功后連續(xù)給藥4周，與模型組相比，紫蘇葉低濃度給藥組和高濃度給藥組小鼠血清中尿酸、尿素以及肌酐水平均有不同程度的降低。

導(dǎo)致高尿酸血癥的原因主要有2個(gè)方面，一是攝入過多高嘌呤食物，或者是體內(nèi)與嘌呤代謝相關(guān)的酶發(fā)生異常有關(guān);二是腎功能發(fā)生異常，導(dǎo)致體內(nèi)尿酸的排出量減少，在體內(nèi)積聚過多，使尿酸無法排出體外。在臨床上，血清肌酐和尿素水平升高則提示腎臟損傷[11]，戴惠嚀等將葵花盤粉提取物作用于高尿酸模型小鼠體內(nèi)時(shí)也發(fā)現(xiàn)葵花盤粉可以改善小鼠腎細(xì)胞的破壞[8];王蓉等研究發(fā)現(xiàn)桂枝湯可以明顯改善高尿酸血癥小鼠腎組織的腎小管擴(kuò)張、腎小管上皮細(xì)胞增生現(xiàn)象[12]，本研究結(jié)果與之相似，本研究通過HE染色法觀察不同濃度的紫蘇葉對(duì)高尿酸血癥小鼠的腎臟的保護(hù)作用，結(jié)果顯示給藥組小鼠的腎小管的管腔明顯擴(kuò)張，灌胃給藥后管腔擴(kuò)張縮小，且上皮細(xì)胞空化、萎縮以及壞死的現(xiàn)象明顯改善，尤其在紫蘇葉高濃度給藥組效果更顯著。

綜上所述，紫蘇葉可以降低血清中尿酸水平，促進(jìn)腎臟對(duì)尿酸的排泄的作用，對(duì)腎組織具有一定的保護(hù)作用，但該藥物具體的治療高尿酸血癥的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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