橙皮素對(duì)倉(cāng)鼠頸動(dòng)脈粥樣硬化和脂質(zhì)代謝的作用機(jī)制*

覃瑛，李曉杰，許鍵煒，馮戎，周誼霞**

(1.貴州醫(yī)科大學(xué) 護(hù)理學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550004； 3.貴州省人民醫(yī)院 健康管理體檢中心，貴州 貴陽(yáng) 550004)

心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是造成我國(guó)和全球居民疾病死亡的主要原因，預(yù)計(jì)到2030年，全球CVD死亡人數(shù)將達(dá)2 500萬(wàn)[1-2]。動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，As)是各類CVD共同的病理基礎(chǔ)。生活方式管理是預(yù)防和治療動(dòng)脈粥樣硬化性疾病(atherosclerotic diseases，ASCVD)的基礎(chǔ)策略，能夠獲得最大化的效益成本比，主要包括健康均衡飲食、規(guī)律有氧運(yùn)動(dòng)、維持正常體質(zhì)量等[3]，飲食攝入是ASCVD管理中的一個(gè)關(guān)鍵的可調(diào)節(jié)因素。多項(xiàng)研究結(jié)果顯示，植物性飲食可改善ASCVD可控的高血脂、高血壓、高血糖等危險(xiǎn)因素，具有非常好的心血管保護(hù)效應(yīng)[4-6]。因此，發(fā)掘具有調(diào)節(jié)機(jī)體脂質(zhì)代謝作用的天然植物和明確其發(fā)揮作用的天然活性成分、并研究其具體的調(diào)控機(jī)制已成為近年來(lái)的研究重點(diǎn)和熱點(diǎn)。橙皮素(hesperetin，HES)是一種天然黃酮類物質(zhì)，廣泛存在于蕓香科柑橘屬植物果中，研究表明HES具有抗炎、抗氧化、抗病毒及抗腫瘤等多種生物活性[7]。目前，關(guān)于HES調(diào)節(jié)血脂、對(duì)As形成的作用等相關(guān)研究?jī)H有一些散見(jiàn)報(bào)道。Kim等[8-9]先后發(fā)現(xiàn)HES能降低高脂血癥大鼠和倉(cāng)鼠模型中的血脂水平；朱小琴等[10]觀察到HES對(duì)ApoE-/-小鼠頸動(dòng)脈As模型也具有降脂作用，且能改善As病變；但這些研究均未從分子水平對(duì)HES的降血脂機(jī)制進(jìn)行探討，并且小鼠和大鼠脂代謝機(jī)制與人類也有一定的差別[11]。因此，HES對(duì)As的作用還有待在擬人化的As動(dòng)物模型上進(jìn)一步研究。本研究通過(guò)“頸動(dòng)脈部分結(jié)扎加高脂飲食喂養(yǎng)”的方式建立擬人化倉(cāng)鼠頸動(dòng)脈As模型，檢測(cè)HES對(duì)倉(cāng)鼠頸動(dòng)脈As模型肝臟中低密度脂蛋白受體(low density lipoprotein receptor，LDLR)、3-羥基-3-甲基-戊二酰輔酶A還原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-CoA reductase，HMGCR)及膽固醇7α-羥化酶(cholesterol 7α-hydroxylase，CYP7A1)的基因表達(dá)水平的影響，探究HES在調(diào)控脂質(zhì)代謝和As形成中的作用，并從分子水平對(duì)其調(diào)控機(jī)制進(jìn)行分析和闡釋，為拓寬對(duì)HES健康效益的認(rèn)識(shí)和合理利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1主要試劑和儀器 HES為黃色粉末、純度為97%(上海麥克林生化科技有限公司，批號(hào)C10358475)，羧甲基纖維素鈉(sodium carboxymethyl cellulose，CMCNa)(北京索萊寶生物科技有限公司，批號(hào)C8620)，總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)測(cè)定試劑盒(中生北控生物科技股份有限公司，批號(hào)分別為182041、197971、191321、191271)，大鼠腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α，TNF-α)ELISA 試劑盒、大鼠白介素-6(interleukin-6，IL-6)ELISA 試劑盒、大鼠單核細(xì)胞趨化蛋-1(monocyte chemotactic protein 1，MCP-1)ELISA 試劑盒(北京四正柏生物科技有限公司，批號(hào)均為20200110)，總RNA提取試劑、反轉(zhuǎn)錄試劑盒、熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-qPCR)試劑盒(北京康潤(rùn)誠(chéng)業(yè)生物科技有限公司，批號(hào)分別為P118-05、A224-05、A305-05)；小動(dòng)物手術(shù)器械(上海醫(yī)療器械有限公司)，冷凍離心機(jī)(美國(guó)Thermo Fisher公司，型號(hào)Heraeus Fresco 21)，多功能酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司，型號(hào)ELX800uv)，RT-qPCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司，型號(hào)CFX96)，石蠟切片機(jī)(上海徠卡儀器有限公司，型號(hào)RM2016)，正置光學(xué)顯微鏡(日本Nikon公司，型號(hào)Nikon Eclipse E100)，組織研磨器(上海凈信實(shí)業(yè)發(fā)展有限公司，型號(hào)MY-20)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組 SPF級(jí)倉(cāng)鼠由河北醫(yī)科大學(xué)脂代謝研究室饋贈(zèng)，許可證編號(hào)[SCXK(京)2012-0001]，飼養(yǎng)并繁殖于貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予清潔自來(lái)水和標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食和飲水，室內(nèi)環(huán)境溫度為22～24 ℃、濕度為50%～60%，12 h明暗交替循環(huán)(7 ∶00-19 ∶00)。選取30只8周齡雄性倉(cāng)鼠為研究對(duì)象，體質(zhì)量102.62～128.20 g。研究方案經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核并批準(zhǔn)，倫理審查編號(hào)1800812。按照簡(jiǎn)單隨機(jī)化法，將30只倉(cāng)鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組)、頸動(dòng)脈As模型組(Model組)、HES低劑量組(L-HES組)、HES中劑量組(M-HES組)及HES高劑量組(H-HES組)，每組6只。

1.2 方法

1.2.1動(dòng)物造模及給藥 參照文獻(xiàn)[12]，采用結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈部分分支加高脂飲食喂養(yǎng)方法建立頸動(dòng)脈As模型。手術(shù)操作由固定的2人完成。所有手術(shù)器械高壓滅菌，鋪無(wú)菌臺(tái)巾；倉(cāng)鼠麻醉后以仰臥位固定頭和四肢，頸部皮膚備皮與消毒。做頸部正中切口約2 cm，逐層切開(kāi)，用顯微鑷鈍性分離左側(cè)頸總動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈、枕動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈及其分支甲狀腺上動(dòng)脈；用5～0縫線結(jié)扎頸內(nèi)動(dòng)脈、枕動(dòng)脈、頸外動(dòng)脈，保留甲狀腺上動(dòng)脈。小心將頸部組織復(fù)位，逐層縫合皮下組織與皮膚，用碘伏消毒皮膚手術(shù)切口；待倉(cāng)鼠清醒后將其送回動(dòng)物房飼養(yǎng)。術(shù)后1周內(nèi)每日用碘伏消毒手術(shù)切口預(yù)防感染；恢復(fù)1周后，NC組繼續(xù)喂飼基礎(chǔ)飼料，Model組及HES各劑量組喂飼高脂飼料以建立頸動(dòng)脈As模型。同時(shí)，L-HES組、M-HES組、H-HES組倉(cāng)鼠分別按50、100、150 mg/kg劑量灌胃給藥[10]，1次/d、連續(xù)干預(yù)6周。NC組及Model組給予相同體積的0.5%羧甲基纖維素鈉。

1.2.2動(dòng)物處理及標(biāo)本收集 實(shí)驗(yàn)期間密切觀察動(dòng)物的精神狀態(tài)、活動(dòng)、飲水飲食變化及毛發(fā)體態(tài)變化等行為學(xué)情況，每天記錄攝食量，每周定時(shí)稱取體質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)第7周結(jié)束時(shí)，倉(cāng)鼠過(guò)夜禁食不禁水12 h，行內(nèi)眥靜脈叢采血，4 ℃溫度下4 000 r/min離心10 min，離心2次，分離血清。麻醉倉(cāng)鼠后處死，行心臟灌流，取出肝臟，將肝臟剪成約100 mg的小塊投入液氮速凍后-80 ℃保存。分離左側(cè)頸總動(dòng)脈，向下分離至主動(dòng)脈弓處，向上至頸內(nèi)頸外動(dòng)脈分叉處，取出左頸總動(dòng)脈，置于4% PFA中固定保存，用于病理形態(tài)學(xué)檢測(cè)。

1.2.3血脂及血清炎性因子的測(cè)定 血清TC、TG、LDL-C、HDL-C和TNF-α、IL-6及MCP-1的測(cè)定按相應(yīng)的試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.2.4頸動(dòng)脈病理學(xué)觀察 將新鮮頸動(dòng)脈組織迅速放入4%多聚甲醛中固定過(guò)夜，經(jīng)梯度酒精脫水、二甲苯透明、浸蠟、石蠟包埋后，制作厚度為5 μm的石蠟切片。行HE染色后顯微鏡下觀察拍照、分析。

1.2.5肝臟中LDLR、HMGCR和CYP7A1 mRNA表達(dá)水平檢測(cè) 采用RT-qPCR法，稱取約100 mg肝臟組織，用TRIGene試劑提取總RNA；根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)合成cDNA，使用SYBR green染料法進(jìn)行RT-qPCR法檢測(cè)肝臟中LDLR、HMGCR和CYP7A1 mRNA表達(dá)水平，反應(yīng)總體系為20 μL。以GAPDH為內(nèi)參基因。5′-3′引物序列LDLR-F為T(mén)CGCTCTGGTCATCCTCCTTGTC、LDLR-R為GAGTTCGTCTTCCGTGGTCTTCTG，HMGCR-F為AATTGGAGTTGGCACCATGTCAGG、HMGCR-R為ACGAAGTAGTTGGCAAGCACAGAC，CYP7A1-F為CACTTGTTCAAGGCGGCACATAAG、CYP7A1-R為GCGTAGACGTATCAGTTCCGAGAC，GAPDH-F為AAGGCACAGTCAAGGCTGAGAATG、GAPDH-R為CTCCACAACATACTCGGCACCAG。反應(yīng)條件為：UNG酶處理50 ℃ 5 min，95 ℃預(yù)變性2 min，95 ℃變性15 s、60 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，40個(gè)循環(huán)。目的基因的mRNA相對(duì)表達(dá)量用2-ΔΔCt法分析。ΔCt值=Ct目的基因-CtGAPDH; ΔΔCt=ΔCt實(shí)驗(yàn)組-ΔCt對(duì)照組。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般情況、攝食量及體質(zhì)量變化

除NC組倉(cāng)鼠外，其余倉(cāng)鼠均成功實(shí)施手術(shù)，于術(shù)后1～2 h內(nèi)逐漸蘇醒。實(shí)驗(yàn)期間，NC組倉(cāng)鼠精神良好、活動(dòng)敏捷、毛發(fā)柔順有光澤，Model組倉(cāng)鼠精神萎靡、不喜活動(dòng)、毛發(fā)凌亂，與Model組相比，各HES劑量組倉(cāng)鼠上述情況有一定的好轉(zhuǎn)；Model組倉(cāng)鼠每天攝食量[(6.70±0.02)g]較NC組[(8.51±0.16)g]少(P<0.05)，各HES劑量組倉(cāng)鼠的攝食量與Model組相近(P>0.05)。各組倉(cāng)鼠基線體質(zhì)量在同一水平(P>0.05)，實(shí)驗(yàn)期間各組倉(cāng)鼠體質(zhì)量緩慢上升，但各組倉(cāng)鼠最后體質(zhì)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 各組倉(cāng)鼠實(shí)驗(yàn)期間體質(zhì)量變化Tab.1 Body weight changes of experimental

2.2 血脂水平

結(jié)果顯示，HES干預(yù)6周后，與NC組比較，Model組倉(cāng)鼠血清TC、TG、LDL-C及HDL-C水平明顯升高(P<0.05)；各HES劑量組與Model組相比，血清TC、TG及LDL-C水平明顯降低(P<0.05)，HDL-C水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

注：(1)與NC組相比，P<0.05；(2)與Model組相比，P<0.05。圖1 HES對(duì)實(shí)驗(yàn)倉(cāng)鼠血脂水平的影響Fig.1 The effect of HES on serum lipid levels of experimental hamsters

2.3 血清炎性因子水平

結(jié)果顯示，HES干預(yù)6周后，與NC組比較，Model組倉(cāng)鼠血清TNF-α、IL-6及MCP-1含量均明顯升高(P<0.05)；與Model組比較，L-HES及M-HES組倉(cāng)鼠血清TNF-α、MCP-1水平明顯降低(P<0.05)，L-HES組倉(cāng)鼠血清IL-6水平明顯降低(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

2.4 頸總動(dòng)脈HE染色

實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)勁總動(dòng)脈組織學(xué)結(jié)果顯示，NC組血管各層結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)膜無(wú)增厚，中膜平滑肌細(xì)胞以及彈性纖維走形規(guī)則、一致，未見(jiàn)明顯異常；Model組血管內(nèi)膜中膜明顯增厚，管腔狹窄，內(nèi)膜中膜分界欠清晰，中膜血管平滑肌細(xì)胞以及彈性纖維排列紊亂，內(nèi)膜及中膜多見(jiàn)針空狀膽固醇結(jié)晶形成，局部可見(jiàn)小灶性壞死鈣化；L-HES及M-HES組血管各層結(jié)構(gòu)清晰，內(nèi)膜輕度增厚，管腔狹窄程度較Model組減輕，中膜血管平滑肌細(xì)胞腫脹，胞質(zhì)略疏松，無(wú)明顯其他異常；H-HES組血管內(nèi)膜增厚程度高于L-HES及M-HES組，但較Model組明顯減輕，管腔狹窄程度明顯輕于Model組，內(nèi)膜中膜可見(jiàn)散在針空狀膽固醇結(jié)晶形成。見(jiàn)圖3。

2.5 肝臟中LDLR、HMGCR和CYP7A1 mRNA表達(dá)水平

結(jié)果顯示，與NC組比較，Model組倉(cāng)鼠肝臟中LDLR和CYP7A1 mRNA表達(dá)水平降低(P<0.05)，HMGCRmRNA表達(dá)水平升高(P<0.05)；與Model組比較，L-HES組及M-HES組LDLRmRNA水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，各HES劑量組HMGCRmRNA降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，CYP7A1 mRNA水平升高、且L-HES組表達(dá)高于M-HES及H-HES組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見(jiàn)圖4。

注：(1)與NC組相比，P<0.05；(2)與Model組相比，P<0.05。圖2 HES對(duì)實(shí)驗(yàn)倉(cāng)鼠血清炎性因子水平的影響Fig.2 The effect of HES on serum inflammatory cytokine levels of experimental hamsters

注：藍(lán)色箭頭示壞死鈣化灶，紅色箭頭示針空狀膽固醇結(jié)晶形成，黑色箭頭示平滑肌細(xì)胞腫脹、胞質(zhì)疏松。圖3 各組倉(cāng)鼠頸總動(dòng)脈組織學(xué)表現(xiàn)(HE染色)Fig.3 The effect of HES on carotid arteries of experimental hamsters in each group(HE stain)

注：(1)與NC組相比，P<0.05；(2)與Model組相比，P<0.05；(3)與L-HES組相比，P<0.05圖4 HES對(duì)實(shí)驗(yàn)倉(cāng)鼠肝臟中LDLR、HMGCR和CYP7A1 mRNA表達(dá)水平的影響Fig.4 The effect of HES on expression levels of hepatic LDLR, HMGCR and CYP7A1 mRNA of experimental hamsters

3 討論

HES廣泛存在于柑橘屬植物果實(shí)中，來(lái)源廣泛、獲取便利，其藥用活性已吸引諸多研究者的關(guān)注。本研究通過(guò)“頸動(dòng)脈部分結(jié)扎+高脂飲食喂養(yǎng)”的方式建立倉(cāng)鼠頸動(dòng)脈As模型，探討HES對(duì)As和脂質(zhì)代謝的作用，結(jié)果表明HES能夠有效降低As倉(cāng)鼠血清TC、TG及LDL-C水平，對(duì)HDL-C水平無(wú)明顯影響；研究還發(fā)現(xiàn)HES可上調(diào)高脂飲食倉(cāng)鼠肝臟中脂代謝相關(guān)因子LDLR和CYP7A1的基因表達(dá)，下調(diào)HMGCR的基因表達(dá)，從基因轉(zhuǎn)錄水平闡釋了HES呈現(xiàn)良好降脂效應(yīng)的機(jī)制；同時(shí)發(fā)現(xiàn)HES可通過(guò)調(diào)脂及抗炎途徑減輕As病變。

As的防治一直是醫(yī)療衛(wèi)生工作中的重點(diǎn)，截至目前，As的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。As動(dòng)物模型是研究As斑塊形成及進(jìn)展的分子機(jī)制的重要手段，也是評(píng)價(jià)新型抗As藥物的有力工具。倉(cāng)鼠的脂代謝機(jī)制與人類非常接近，包括高表達(dá)膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、在小腸而非肝臟編輯腸載脂蛋白B、以低密度脂蛋白為主的血漿脂蛋白譜、低密度脂蛋白受體基因與人類的同源性高、As斑塊形成機(jī)制及病理特征與人類相似等[13]，此外倉(cāng)鼠還具有繁殖速度快、抵抗力強(qiáng)、方便操作的特點(diǎn)，在脂代謝紊亂的相關(guān)疾病研究上極具優(yōu)勢(shì)。本研究結(jié)果顯示倉(cāng)鼠經(jīng)高脂飲食喂飼6周后，其TC、TG、LDL-C和HDL-C水平明顯上升，與研究報(bào)道的人類攝入高脂飲食后血脂的變化情況一致[14]，充分說(shuō)明倉(cāng)鼠對(duì)高脂飲食高度易感且與人類相似。因此，本研究選擇倉(cāng)鼠作為As模式動(dòng)物有充分的理論依據(jù)支撐，為保證研究結(jié)論的可靠性奠定了基礎(chǔ)。近年來(lái)越來(lái)越多的研究運(yùn)用復(fù)合因素造模法建立頸動(dòng)脈As模型[15-16]。本研究嘗試以頸動(dòng)脈部分結(jié)扎加高脂飲食喂養(yǎng)的方式建立擬人化的倉(cāng)鼠頸動(dòng)脈As模型，HE染色結(jié)果顯示：Model組倉(cāng)鼠頸動(dòng)脈血管內(nèi)膜中膜明顯增厚，管腔明顯狹窄，內(nèi)膜中膜分界欠清晰，中膜血管平滑肌細(xì)胞以及彈性纖維排列紊亂，多見(jiàn)針空狀膽固醇結(jié)晶形成，局部可見(jiàn)小灶性壞死鈣化，表明成功制備了頸動(dòng)脈As模型。與傳統(tǒng)的球囊拉傷造成的直接機(jī)械性內(nèi)膜剝脫相比，頸動(dòng)脈部分結(jié)扎通過(guò)引起局部血流動(dòng)力學(xué)的改變，間接引起內(nèi)皮細(xì)胞損傷，內(nèi)膜相對(duì)完整，少見(jiàn)血栓發(fā)生，引起As的病理改變與人類接近[12]；同時(shí)，該方法操作簡(jiǎn)單、可重復(fù)性高、實(shí)驗(yàn)成本低、成功率高，值得推廣應(yīng)用。

本研究結(jié)果表明HES能有效降低血清中TC、LDL-C及TG水平，與相關(guān)的研究結(jié)果一致[9-10]，但以往的研究未對(duì)HES調(diào)控脂質(zhì)代謝的分子機(jī)制做深入探究。為了充分認(rèn)識(shí)HES的降血脂效應(yīng)，有必要從分子水平對(duì)其調(diào)節(jié)機(jī)制進(jìn)行分析闡釋。肝臟是調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的中樞器官，因此，本研究進(jìn)一步采用RT-qPCR技術(shù)對(duì)倉(cāng)鼠肝臟中調(diào)節(jié)脂代謝關(guān)鍵的分子的基因表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HES干預(yù)可上調(diào)肝臟中LDLR、CYP7A1的基因表達(dá)水平，同時(shí)下調(diào)HMGCR的基因表達(dá)水平。LDLR是一種膜蛋白，可以與血漿中的LDL特異性結(jié)合，經(jīng)過(guò)細(xì)胞的內(nèi)吞作用將LDL轉(zhuǎn)運(yùn)至肝臟內(nèi)進(jìn)行降解，是清除血漿中LDL的主要途徑[17]。Bawazeer，Morin等[18-19]多個(gè)研究者均報(bào)道了在人肝癌細(xì)胞系HepG2中，HES可增加LDLRmRNA的表達(dá)。綜合體內(nèi)體外研究結(jié)果可知：HES能通過(guò)上調(diào)LDLR基因表達(dá)發(fā)揮降低血漿中LDL-C的作用。HMGCR是膽固醇合成中的限速酶。Kim等[9]發(fā)現(xiàn)HES可抑制高膽固醇血癥倉(cāng)鼠肝臟中的HMGCR酶活性，這與本研究的結(jié)果相契合，說(shuō)明HES可通過(guò)抑制HMGCR基因表達(dá)，減少肝臟中膽固醇的合成，從而降低血脂水平。機(jī)體不能將膽固醇徹底分解，膽固醇在肝臟轉(zhuǎn)變?yōu)槟懼?，隨膽汁入腸道，這是膽固醇代謝的主要去路，能夠排出體內(nèi)約50%的膽固醇，CYP7A1為膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸過(guò)程中的限速酶。Ling等[20]發(fā)現(xiàn)柑橘皮中的總黃酮類物質(zhì)可增加高脂血癥倉(cāng)鼠肝臟中CYP7A1的含量，這與本研究的結(jié)果是相符的，說(shuō)明HES能促進(jìn)膽固醇的轉(zhuǎn)化和排泄，減少膽固醇在體內(nèi)的蓄積。綜上，本課題組認(rèn)為HES可參與肝臟膽固醇代謝的多條途徑，通過(guò)影響膽固醇代謝過(guò)程中的關(guān)鍵分子的基因表達(dá)，呈現(xiàn)良好的降血脂效應(yīng)。

As是CVD的病理基礎(chǔ)，不穩(wěn)定的As斑塊破裂、血小板聚集和血栓形成會(huì)導(dǎo)致血管狹窄或阻塞，從而導(dǎo)致急性CVD的發(fā)生。脂質(zhì)浸潤(rùn)和炎癥反應(yīng)是As形成的2個(gè)重要環(huán)節(jié)。大量LDL在血管壁的蓄積在是引發(fā)As病變形成的始動(dòng)環(huán)節(jié)，炎癥貫穿于As斑塊形成、發(fā)展、斑塊破裂、發(fā)生血栓性并發(fā)癥的全過(guò)程。TNF-α、IL-6和MCP-1是被廣泛認(rèn)可的反應(yīng)血管炎癥的標(biāo)志物，因此，許多研究將其作為評(píng)價(jià)藥物發(fā)揮抗炎作用的觀測(cè)指標(biāo)。本研究結(jié)果顯示，HES干預(yù)能降低倉(cāng)鼠血清中炎性因子TNF-α、IL-6和MCP-1的含量，表明HES具有較好的抗炎癥作用，這與研究報(bào)道的HES能抑制心肌梗死小鼠模型和糖尿病大鼠模型中的炎癥反應(yīng)的研究結(jié)論相符合[21-22]。體內(nèi)外研究指出：HES的抗炎作用與抑制NF-κB信號(hào)通路有關(guān)[23-24]，這也是大多數(shù)黃酮類化合物發(fā)揮抗炎效應(yīng)的主要機(jī)制[25]。迄今為止，理論上As的2大治療手段分別為干預(yù)脂質(zhì)代謝和炎癥反應(yīng)。如前所述，本研究觀察到HES具有良好的降血脂作用和抗炎效應(yīng)，提示HES具有抗As的潛力。為了明確HES對(duì)As形成的作用，本課題組采用HE染色對(duì)各組實(shí)驗(yàn)倉(cāng)鼠頸動(dòng)脈組織的病理學(xué)形態(tài)進(jìn)行了觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各HES劑量組倉(cāng)鼠頸動(dòng)脈中病理改變均得到改善，且L-HES及M-HES的改善效果更為明顯，僅有內(nèi)膜輕度增厚，血管平滑肌腫脹，胞質(zhì)略疏松，而無(wú)明顯其他異常，這表明HES具有較好的抗As形成的作用，驗(yàn)證了之前的科學(xué)假說(shuō)。綜合現(xiàn)有的研究報(bào)道，認(rèn)為HES具有較好的心血管保護(hù)效應(yīng)。

綜上所述，HES具有抗As的潛力，具有較好的抗As形成的作用，也具有較好的心血管保護(hù)效應(yīng)。HES能通過(guò)調(diào)控肝臟中脂質(zhì)代謝相關(guān)的關(guān)鍵因子的基因表達(dá)而發(fā)揮降血脂的作用，通過(guò)降血脂和抗炎癥效應(yīng)減輕As病變，具有廣闊的應(yīng)用前景。