甘肅省市售牛羊肉中雌激素殘留狀況分析

李維紅　熊琳　高雅琴　楊曉玲

摘要：以甘肅省蘭州市、靖遠(yuǎn)縣、臨夏州、張掖地區(qū)牛羊肉為試驗(yàn)材料，分析了甘肅省市售牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、戊酸雌二醇和苯甲酸雌二醇等4種雌激素殘留狀況。結(jié)果表明，80份樣品中（4個(gè)地方牛羊肉各10份）所測(cè)定的4種雌激素均未檢出，甘肅省市售牛羊肉中無(wú)論是天然的雌二醇還是己烯雌酚、戊酸雌二醇和苯甲酸雌二醇3種人工合成雌激素均沒有殘留。

關(guān)鍵詞：牛羊肉；雌激素；殘留；甘肅省

中圖分類號(hào)：R155.5+5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2016）06-1538-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.06.044

激素類藥物具有提高牛羊的繁殖性能、促進(jìn)生長(zhǎng)，改善牛羊肉品質(zhì)、促進(jìn)泌乳羊的產(chǎn)奶量等作用[1]。激素通過(guò)食物鏈在人體內(nèi)積累，可誘發(fā)癌變，對(duì)生殖與神經(jīng)等系統(tǒng)帶來(lái)影響，還可造成嚴(yán)重的環(huán)境污染問(wèn)題[2]，并能使男性生殖器官發(fā)生異常與病變以及使女性乳腺癌和子宮內(nèi)膜發(fā)生異位[3]。因此，對(duì)牛羊肉的監(jiān)測(cè)也是保證食品安全的措施之一。在己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇中，雌二醇是惟一的天然型雌激素，其余3種均為人工合成雌激素。本研究采用HPLC法對(duì)甘肅省市售牛羊肉中己烯雌酚、雌二醇、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇4種雌激素殘留狀況進(jìn)行分析，以期了解甘肅省市售牛羊肉中4種雌激素的殘留狀況。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源

分別于甘肅省蘭州市、靖遠(yuǎn)縣、臨夏州、張掖地區(qū)的屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市采集牛羊肉樣品各10份，共計(jì)80份。

1.2 試劑

甲醇（色譜純）、磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑上海有限公司）；雌二醇（Sigma-Alorich公司）、己烯雌酚（Sigma-Alorich公司）、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）。

雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取50 mg雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)品，分別用甲醇定容在50 mL容量瓶中，即得到每個(gè)單標(biāo)的儲(chǔ)備液為1 mg/mL。然后分別吸取2.5 mL雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液混合，再將混合儲(chǔ)備液用甲醇分別稀釋至0.4、0.5、1.0 mg/mL，保存于4 ℃?zhèn)溆肹4]。

1.3 儀器及條件

Waters e2695高效液相色譜儀，配有2998 PAD檢測(cè)器；超聲波清洗器；離心機(jī)（10 000 r/min）；色譜柱：C18，ODS（5 μm，4.6 mm×150 mm）；流動(dòng)相：甲醇∶磷酸氫二鈉=80∶20（V/V）；流速：1.0 mL/min；柱溫：40 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。分別取雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的單個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品及0.4、0.5、1.0 mg/mL的混合標(biāo)樣經(jīng)0.45 μm的有機(jī)濾膜過(guò)濾，取10 μL依次進(jìn)行HPLC中，先用標(biāo)準(zhǔn)品的出峰時(shí)間定性，再用混合標(biāo)樣做定量標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

1.4 測(cè)定方法

稱取粉碎樣品5.0 g置于20 mL帶蓋離心管中，加甲醇10.0 mL，超聲萃取20 min后4 000 r/min離心10 min。殘?jiān)性偌?0.0 mL甲醇，再超聲萃取20 min，4 000 r/min離心10 min，合并上清液于80 ℃水浴蒸干。用20 mL甲醇溶解殘?jiān)?，?jīng)0.22 μm 1次性有機(jī)濾膜過(guò)濾，準(zhǔn)備上機(jī)。

1.5 計(jì)算公式

X=2C/mV

式中，X為樣品中某一種雌激素的含量；C為在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出來(lái)的某一種雌激素的濃度（μg/mL）；V為進(jìn)樣體積（μL）；m為樣品質(zhì)量（g）。

2 結(jié)果與分析

由表1可知，雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇濃度在0～100 ng/mL之間，濃度與峰面積之間有較好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)分別為0.999 5、0.999 3、0.999 2和0.999 4。4種雌激素的檢出限分別為1.5、3.0、1.0和2.0 ng/mL。用1.0 mg/mL加標(biāo)樣品提取液進(jìn)樣10 μL，進(jìn)樣6次求出變異系數(shù)（表2），分別為0.36%、0.35%、0.12%和0.78%。以羊肉樣品為樣本，添加0.4、0.5、1.0 μg/mL 3個(gè)濃度水平的標(biāo)樣測(cè)定回收率，其范圍為85.96%～101.56%，符合標(biāo)準(zhǔn)要求（80%～120%）（表3）。

該方法的線性范圍、精密度和回收率均良好，能夠滿足分析要求。依據(jù)上述方法，對(duì)甘肅省蘭州市、靖遠(yuǎn)縣、臨夏州、張掖地區(qū)的屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市的80份牛羊肉樣品進(jìn)行了雌二醇、己烯雌酚、苯甲酸雌二醇和戊酸雌二醇的檢測(cè)，從表4可以看出，無(wú)論是天然型雌二醇還是人工合成雌激素均未檢出。

3 小結(jié)與討論

肉中天然雌激素以雌二醇為代表，其濃度約為10 ng/g[5]。80份樣品中無(wú)論是天然型雌二醇還是人工合成其余3種雌激素均未檢出。80份樣品來(lái)源于甘肅省的4個(gè)牛羊肉產(chǎn)區(qū)，每個(gè)區(qū)又從不同的途徑取樣，所以樣品具有很好的代表性。樣品中未檢出3種人工合成的雌激素，說(shuō)明沒有添加或經(jīng)過(guò)休藥期已經(jīng)沒有殘留。至于天然雌激素雌二醇也未檢出，檢測(cè)結(jié)果與田軍等[6]的研究結(jié)果一致，認(rèn)為雌激素僅作用和存在于靶器官，肌肉中并不含雌激素。但與林奕芝等[7]的研究結(jié)果相悖，其檢測(cè)的深圳市市售牛羊肉均檢測(cè)出了雌二醇。而本研究中可能是市售牛羊肉的雌激素含量較低而未檢出，也有可能是有待于更精密的儀器仔細(xì)篩查。

參考文獻(xiàn)：

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[6] 田 軍，夏 夢(mèng)，朱 晨，等.閹割與不閹割對(duì)生長(zhǎng)肥育母豬生長(zhǎng)速度的影響及血液、肌肉中雌激素含量的測(cè)定[J].養(yǎng)豬，2012（5）：47-48.

[7] 林奕芝，司徒潮滿，劉 奮，等.深圳市市售肥牛、羊肉中雌激素殘留狀況分析[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2009，36（6）：1168-1169.