10 種殺菌劑對(duì)橡膠樹(shù)嘴突凸臍蠕孢菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

戴利銘，熊延林，李發(fā)昌，劉一賢，施玉萍，李嵐嵐，蔡志英

（云南省熱帶作物科學(xué)研究所，云南景洪666100）

我國(guó)植膠區(qū)溫暖濕潤(rùn)的氣候非常適宜多種病原微生物的生存繁衍，導(dǎo)致橡膠樹(shù)病害種類繁多［1］。葉病為橡膠樹(shù)毀滅性病害，是限制我國(guó)橡膠單產(chǎn)提高的關(guān)鍵因子之一。在前期研究中，云南省熱帶作物科學(xué)研究所植物保護(hù)和微生物利用中心在廣東、海南橡膠苗圃病害調(diào)查發(fā)現(xiàn)1 種新的橡膠樹(shù)葉部病害——嘴突凸臍蠕孢菌（Exserohilum rostratum），癥狀表現(xiàn)為：葉片感病后，最初出現(xiàn)黃色小斑點(diǎn)，隨后病斑逐漸擴(kuò)展成直徑5～15 mm 的近圓形至不規(guī)則形的灰褐色至灰色病斑。前期采用十字交叉法進(jìn)行該菌的生物學(xué)特性基礎(chǔ)數(shù)據(jù)庫(kù)研究，發(fā)現(xiàn)該菌具有較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)能力［2］。

林善海從香蕉葉斑病樣品中分離得到3 株突凸臍蠕孢菌，通過(guò)生防實(shí)驗(yàn)篩選到一株洋蔥伯克霍爾德氏菌（Burkholderia cepacia），該菌對(duì)香蕉突凸臍蠕孢葉斑病菌的盆栽防效達(dá)到74.71%［3］。張馳成等報(bào)道了從桂牧1 號(hào)雜交象草上分離得到嘴突凸臍蠕孢菌，并測(cè)定不同殺菌劑對(duì)此病菌的敏感性，發(fā)現(xiàn)殺菌劑咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑?qū)ψ焱煌鼓毴滏呔玖ψ顝?qiáng)［4］。

目前國(guó)內(nèi)對(duì)嘴突凸臍蠕孢菌引起橡膠樹(shù)葉斑病的相關(guān)研究報(bào)道僅此一例，對(duì)其防控研究還處于空白。病原菌遇到合適的氣候因素有引發(fā)病害大流行的可能，為使我國(guó)天然橡膠產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，有必要開(kāi)展對(duì)該病原菌殺菌劑的敏感性實(shí)驗(yàn)研究。本研究選用10 種殺菌劑對(duì)橡膠樹(shù)嘴突凸臍蠕孢菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，分析不同藥劑對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響，為后續(xù)生產(chǎn)上科學(xué)選擇防治橡膠樹(shù)葉斑病的田間藥效試驗(yàn)提供參考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試病原菌

本研究室前期分離、保存、鑒定的病原菌種［4］。

1.1.2 供試藥劑

咪鮮胺（江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司）、丙環(huán)唑（先正達(dá)作物保護(hù)有限公司）、苯醚甲環(huán)唑（先正達(dá)作物保護(hù)有限公司）、代森錳鋅（北京燕華永樂(lè)生物科技股份有限公司）、百菌清（世科姆化學(xué)貿(mào)易有限公司）、甲基硫菌靈（山東海迅生物科技有限公司）、三唑酮（江蘇劍牌農(nóng)化股份有限公司）、異菌脲（江門(mén)方大光明農(nóng)化新會(huì)有限公司）、多菌靈（江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司）、嘧菌酯（先正達(dá)南通作物保護(hù)有限公司）。

1.1.3 儀器

超凈工作臺(tái)（蘇州凈化SW-CJ-2FD）、恒溫培養(yǎng)箱（天津泰斯特DH5000BⅡ）、分析天平（梅特勒托利多PL203）

1.1.4 培養(yǎng)基

PDA 培 養(yǎng) 基：土 豆200 g，葡 萄糖15 g，瓊 脂18 g，水定容至1 000 mL，自然pH；在121℃高壓滅菌20 min 后備用。

1.2 方法

將供試殺菌劑用無(wú)菌水配制成不同濃度的母液（表1），按比例加入到PDA 培養(yǎng)基中，倒入直徑9 cm 的培養(yǎng)皿制成有毒培養(yǎng)基平板。在已培養(yǎng)5 d 的嘴突凸臍蠕孢菌菌落邊緣用打孔器打取直徑為5 mm 的菌餅，移入含藥PDA 平板中央，每皿接菌餅1個(gè)，每個(gè)濃度重復(fù)3 次，以不含藥PDA 平板作為對(duì)照，28℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)5 d 后采用十字交叉法測(cè)量菌落直徑。

表1 不同殺菌劑的有效濃度

菌絲生長(zhǎng)抑制率（%）＝（對(duì)照菌落直徑－處理菌落直徑）／（對(duì)照菌落直徑-0.5 cm）×100%。以藥劑濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)和對(duì)應(yīng)的菌絲生長(zhǎng)抑制率為縱坐標(biāo)做回歸分析，求毒力回歸方程［5-8］，計(jì)算相關(guān)系數(shù)、EC50值和EC75值，比較供試10 種殺菌劑對(duì)菌株的毒力大小。

采用Excel 2003 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和多重比較。

2 結(jié)果與分析

毒力測(cè)定結(jié)果顯示，不同殺菌劑對(duì)病原菌的毒力水平存在差異，殺菌劑對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)強(qiáng)弱與藥劑濃度均呈正相關(guān)，各藥劑的EC50值見(jiàn)表2。苯醚甲環(huán)唑毒力最強(qiáng)，EC50值為0.0133 μg/mL，其次為丙環(huán)唑、咪鮮胺、異菌脲，其平均EC50值分別為0.0581、0.1061、0.5572 μg/mL；代森錳鋅、百菌清、三唑酮的EC50為1～100 μg/mL；而多菌靈、甲基硫菌靈和嘧菌酯對(duì)病原菌基本無(wú)效，EC50分別為866.9619、809.8414、2 630.2680 μg/mL。

10 種供試藥劑可分為4 類，第1 類是丙環(huán)唑，抑菌效果最好，平均EC75值小于1 μg/mL；第2 類是咪鮮胺、異菌脲、苯醚甲環(huán)唑，平均EC75值小于10 μg/mL；第3 類是三唑酮、代森錳鋅，平均EC75值在34.4826～75.648 μg/mL，抑菌效果較差；第4類為多菌靈、百菌清，甲基硫菌靈、嘧菌酯，平均EC75值為104.61～236 210.93 μg/mL，對(duì)病原菌基本沒(méi)有抑制效果。

根據(jù)藥劑篩選試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果，推薦用苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑、咪鮮胺、異菌脲防治嘴突凸臍蠕孢菌引起的葉斑病。

表2 供試殺菌劑對(duì)嘴突凸臍蠕孢的毒力測(cè)定

3 結(jié)論

嘴突凸臍蠕孢菌作為植物致病菌，寄主范圍廣泛，危害馬唐草［9］、臺(tái)灣青棗［10］、香牛筋草［11］、香蕉［3］、桂牧［4］等，但對(duì)其藥劑篩選實(shí)驗(yàn)研究卻鮮見(jiàn)報(bào)道。張弛成［4］對(duì)桂牧葉斑病分離得到的病原菌進(jìn)行室內(nèi)毒力測(cè)定，發(fā)現(xiàn)對(duì)嘴突凸臍蠕孢菌毒力最強(qiáng)的殺菌劑為咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑，EC50分別為0.0071 μg/mL 和0.0072 μg/mL。本研究以10 種藥劑對(duì)嘴突凸臍蠕孢菌絲體生長(zhǎng)的EC50值和EC75進(jìn)行分析，最終發(fā)現(xiàn)咪鮮胺、異菌脲、苯醚甲環(huán)唑、丙環(huán)唑?qū)ψ焱煌鼓毴滏呔种菩Ч^好，其中苯醚甲環(huán)唑毒力最強(qiáng)，其EC50為0.0133 μg/mL。與張弛成［4］報(bào)道的結(jié)果相比，桂牧葉斑病上分離得到的嘴突凸臍蠕孢菌對(duì)苯醚甲環(huán)唑比橡膠葉上分離得到的更敏感，但是從整體考慮，咪鮮胺和苯醚甲環(huán)唑?qū)ψ焱煌鼓毴滏呔加休^為明顯的毒力作用；此外，與張弛成［4］報(bào)道的結(jié)果相似，多菌靈、嘧菌酯對(duì)嘴突凸臍蠕孢菌基本沒(méi)有抑制效果。由此我們推測(cè)，不同種類農(nóng)藥對(duì)嘴突凸臍蠕孢病原菌抑制效果存在差異的原因可能在于靶標(biāo)生物作用機(jī)理存在差異。

本研究以10 種供試藥劑對(duì)橡膠樹(shù)嘴突凸臍蠕孢葉斑病病菌菌絲體生長(zhǎng)的EC50、EC75值和毒力回歸方程斜率的分析發(fā)現(xiàn)，苯醚甲環(huán)唑?qū)ο鹉z樹(shù)葉斑病上的嘴突凸臍蠕孢病原菌抑制效果最好，室內(nèi)毒力測(cè)定采用了農(nóng)藥原藥，測(cè)定結(jié)果較客觀、準(zhǔn)確，研究結(jié)果可為生產(chǎn)上防治該病提供參考依據(jù)。