探討IL-34對慢性根尖炎中RANKL/OPG平衡的影響

王敏 徐麗 朱永娜 張曉東

[摘 要] 該文研究之目的：慢性根尖炎主要是以根尖炎性骨破壞為表現(xiàn)的口腔常見疾病，RANKL/OPG調(diào)節(jié)慢性根尖周病中的骨吸收。該文主要研究炎性因子IL-34對RANKL/OPG的平衡的影響，從而進(jìn)一步探索IL-34在該疾病中的致病機(jī)理。之方法：實(shí)驗(yàn)組選用18組根尖周炎病例的肉芽組織，對照組選用正畸拔牙中的健康牙周組織8例。應(yīng)用免疫組化檢測IL-34、RANKL及OPG的表達(dá)情況，并進(jìn)行數(shù)據(jù)測量及定量分析三者之間的相關(guān)性。之結(jié)果：在慢性根尖周炎中IL-34在根尖周炎和對照組的表達(dá)量分別為0.206±0.038和0.131±0.023，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。在根尖周炎組IL-34與RANKL呈負(fù)相關(guān)（r=-0.578，P=0.039）;IL-34與OPG呈正相關(guān)（r=0.778，P=0.000），差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。之討論：本次實(shí)驗(yàn)證明了IL-34與根尖周炎的發(fā)生有很大關(guān)系，但I(xiàn)L-34可能只是很多影響RANKL/OPG平衡的炎性因子的一種。

[關(guān)鍵詞] IL-34;RANKL;OPG

[基金項目] 蚌埠醫(yī)學(xué)院自然科學(xué)基金（BYKY17118）

[作者簡介] 王 敏，就職于蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科;徐 麗，就職于蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院口腔科;朱永娜，張曉東，就職于蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科。

[中圖分類號] G642.0? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A? ? [文章編號] 1674-9324（2020）23-0113-02? ? [收稿日期] 2019-11-13

慢性根尖周炎是口腔臨床上最為常見的一種疾病，臨床表現(xiàn)為炎癥性的骨吸收導(dǎo)致的根尖組織破壞[1]。骨吸收主要由破骨細(xì)胞負(fù)責(zé)。核因子κB受體活化因子配體RANKL是由成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞、T或B淋巴細(xì)胞等分泌的膜結(jié)合配體，其與受體RANK結(jié)合后，促進(jìn)破骨細(xì)胞的形成并產(chǎn)生骨吸收[2]。而OPG（骨保護(hù)素）是另外一種配體，它可以結(jié)合RANK受體，從而阻斷了其與RANKL的結(jié)合，破骨細(xì)胞的產(chǎn)生被抑制了，從而壓抑了炎性骨的破壞[3-4]。RANKL/OPG的平衡受炎癥因子IL-34的調(diào)節(jié)。本課題組前期研究表明IL-34與慢性根尖周病的發(fā)生密切相關(guān)[5-7]，但是其在該病中的致病機(jī)理還不清楚。因此本課題旨在前期研究的基礎(chǔ)上通過免疫組化研究慢性根尖周肉芽腫和慢性根尖周囊腫中三者的表達(dá)，揭示IL-34對慢性根尖周病中RANKL/OPG平衡的調(diào)節(jié)，從而進(jìn)一步探索IL-34在該疾病中的致病機(jī)理，為慢性根尖周病的臨床治療提供一定的理論依據(jù)。

一、資料與方法

（一）臨床資料

【實(shí)驗(yàn)組及對照組】

根據(jù)X線表現(xiàn)確定標(biāo)本

收集2018年1月—2018年6月在蚌埠醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院口腔科就診的病例，患者年齡均為成年，患者無其他口腔疾病和全身系統(tǒng)性疾病。由兩名口腔影像學(xué)醫(yī)生與主治大夫一起根據(jù)X線參考標(biāo)準(zhǔn)[8]確定慢性根尖炎病例，并收集其組織標(biāo)本40例。

收集因正畸拔除健康牙時切除的牙周組織10例為正常對照組。

（二）方法

1.HE染色。及時將收集的標(biāo)本（軟組織）用去離子水仔細(xì)清洗。放于甲醛溶液中（4%）固定。一天后行石蠟包埋，連續(xù)切片后進(jìn)行染色。在顯微鏡下觀察結(jié)果，嚴(yán)格遵照相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，并與影像學(xué)資料進(jìn)行對比，最終得出18例實(shí)驗(yàn)組，8例對照組。

2.免疫組化。嚴(yán)格按照SP免疫組化法，將實(shí)驗(yàn)組與對照組進(jìn)行抗原修復(fù)。每張切片加入相應(yīng)的IL-34、RANKL及OPG抗體，加入DAB顯色液，蘇木素復(fù)染后得到觀察切片。在顯微鏡下觀察，每張切片隨機(jī)選擇其中5個視野進(jìn)行拍照，用圖像軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析。

3.數(shù)據(jù)處理。將所得到的數(shù)據(jù)使用SPSS20.0軟件進(jìn)行分析，將所得到的結(jié)果計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，相關(guān)結(jié)果比較用t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析用Pearson法，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

二、結(jié)果

（一）HE染色結(jié)果

根尖炎中的肉芽組織HE染色明顯可見大量炎性細(xì)胞浸潤（包括GRA、LYN及Plasma cell等），很多微小的新生血管形成。因正畸而拔牙的健康牙周組織HE染色見大量纖維組織，炎性細(xì)胞較少。

（二）IL-34的表達(dá)

兩組切片行免疫組化，后對根尖組（n=18）和對照組（n=9）進(jìn)行IL-34表達(dá)測量，所得的兩組結(jié)果進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果參見表1，統(tǒng)計學(xué)分析所得（t=2.59，P=0.017）P<0.05，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

（三）IL-34與RANKL和OPG表達(dá)的關(guān)系

如表2所示，經(jīng)Pearson相關(guān)檢驗(yàn)，在根尖炎組中IL-34與RANKL的相關(guān)性分析結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），呈負(fù)相關(guān)。IL-34與OPG的相關(guān)性分析有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），呈正相關(guān)。

三、討論

本次實(shí)驗(yàn)證實(shí)了IL-34與根尖周炎的發(fā)生發(fā)展有著很大的聯(lián)系。IL-34的表達(dá)與RANKL表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，與OPG的表達(dá)呈正相關(guān)。彭彬等[9]在2005年就在SD大鼠的根尖周炎中發(fā)現(xiàn)了RANKL，在牙髓暴露后的7天觀察就發(fā)現(xiàn)破骨細(xì)胞樣細(xì)胞和RANKL呈陽性的細(xì)胞。14天后隨著炎性骨吸收進(jìn)一步發(fā)生，破骨細(xì)胞和RANKL陽性細(xì)胞繼續(xù)增多。但28天以后，骨吸收減弱，相對應(yīng)的破骨細(xì)胞和RANKL陽性細(xì)胞較少，正好與此次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不符。黃哲敏[ 10 ]在2015年發(fā)現(xiàn)，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的患者中的血清中發(fā)現(xiàn)，IL-34與RANKL陽性細(xì)胞表達(dá)呈正相關(guān)。國外學(xué)者在2012年在大鼠的根尖周炎模型中發(fā)現(xiàn)，在根尖周炎發(fā)生后的第7和第8周，發(fā)現(xiàn)RANKL表達(dá)明顯增加，OPG表達(dá)明顯減少。其第7周，兩者比值是正常的對照組的30倍。第8周，兩者的比例是對照組的41倍[ 11 ]。Menezes R等[ 12 ]在2008年發(fā)現(xiàn)RANKL和OPG之間的比值大小，可以作為根尖周炎病變不同時期的標(biāo)準(zhǔn)。

本次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的異常原因可能顯示影響RANKL/OPG平衡除了IL-34炎性因子外可能還有其他因子。另外和實(shí)驗(yàn)切片的選取，抗體的購買選擇都有可能產(chǎn)生異常結(jié)果，未達(dá)到預(yù)期的實(shí)驗(yàn)?zāi)康?。故下一步?shí)驗(yàn)增加樣本量，并且對樣本的質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格篩選，希望能找到除IL-34外其他能影響RANKL/OPG表達(dá)的炎性因子。

參考文獻(xiàn)

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The Effect of IL-34 on the Balance of RANKL/ OPG in Chronic Periapical Inflammation

WANG Mina，XU Lib，ZHU Yong-naa，ZHANG Xiao-donga

（a.Department of Stomatology，The Second Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu，Anhui Province 233000，China;b.Department of Stomatology，The First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College，Bengbu，Anhui Province 233000，China）

Abstract：Objective：Chronic apical inflammation is mainly a common oral disease characterized by apical inflammatory bone destruction.RANKL/OPG regulates bone resorption in chronic periapical disease.In this paper，the effect of inflammatory factor IL-34 on the balance of RANKL/OPG is studied，so as to further explore the pathogenic mechanism of IL-34 in the disease.Methods：The granulation tissue of 18 groups of periapical periodontitis was selected in the experimental group，and 8 cases of healthy periodontal tissue in orthodontic extraction were selected in the control group.The expression of IL-34，RANKL and OPG was detected by immunohistochemistry，and the data were measured and quantitatively analyzed.Results：In chronic periapical periodontitis，the expression levels of IL-34 in periapical periodontitis and control group were 0.206 ±0.038 and 0.131 ±0.023 respectively，and the difference was statistically significant （P<0.05）.In periapical periodontitis group，IL-34 was negatively correlated with RANKL （r=-0.578，P=0.039），and IL-34 was positively correlated with OPG （r=0.778，P=0.000）.Discussion：This experiment proves that IL-34 has a great relationship with the occurrence of periapical periodontitis，but IL-34 may only be one of the many inflammatory factors that affect RANKL/OPG balance.

Key words：IL-34;RANKL;OPG