寵物犬腸道可培養(yǎng)細(xì)菌耐藥性種類及其分布

Hafeez ul Haq 張沁怡 黎燁 陳明波 薛海曌 羅成松 方行 劉平平 蔣寧成 張婷 熊娟 田寶玉

摘?要：為探明寵物犬腸道微生物攜帶抗生素耐藥性的流行病學(xué)及闡釋飼養(yǎng)動(dòng)物中微生物抗性與人病原微生物抗性基因的關(guān)系。采用細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定以及影印平板技術(shù)對(duì)寵物犬腸道可培養(yǎng)腸桿菌攜帶的耐藥性及其種類、多樣性和生態(tài)分布進(jìn)行了調(diào)查。結(jié)果表明：寵物犬腸道可培養(yǎng)細(xì)菌具有較高的耐藥性比例和多重耐藥性。其中大腸桿菌對(duì)氨芐西林、磺胺類藥物、氯霉素、鏈霉素和四環(huán)素等較早使用的藥物耐藥率較高，反而對(duì)進(jìn)入臨床時(shí)間較短的頭孢菌素類藥物相對(duì)較敏感。在調(diào)查的細(xì)菌中幾乎所有的細(xì)菌至少有1種抗生素抗性，可分離的腸道細(xì)菌中一半以上具有5種以上的抗生素抗性。綜上所述，腸道微生物抗性的產(chǎn)生與抗生素的使用時(shí)間緊密相關(guān)，并且寵物犬腸道可培養(yǎng)細(xì)菌的抗性廣泛分布，表明寵物很可能成為耐藥性基因在環(huán)境和人類病原細(xì)菌間傳播的潛在途徑。

關(guān)鍵詞：寵物犬;抗生素;腸道可培養(yǎng)細(xì)菌;耐藥性

中圖分類號(hào)：S858.292?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?文章編號(hào)：0253-2301（2020）04-0009-08

DOI： 10.13651/j.cnki.fjnykj.2020.04.002

Types and Distribution of the Drug Resistance of the Culturable Bacteriain the Intestinal Tract of Pet Dogs

Hafeez ul Haq， ZHANG Qin?yi， LI Ye， CHEN Ming?bo， XUE Hai?zhao， LUO Cheng?song， FANG Xing，LIU Ping?ping， JIANG Ning?cheng， ZHANG Ting， XIONG Juan， TIAN Bao?yu*

（Engineering Research Center of Industrial Microbiology of Ministry of Education， Fujian Normal

University/College of Life Sciences， Fujian Normal University， Fuzhou， Fujian 350108， China）

Abstract： In order to explore the epidemiology of antibiotics resistance carried by pet dogs′ intestinal microorganisms and explain the relationship between the microbial resistance in raising animals and the resistance genes of human pathogenic microorganism， the antibiotic resistance carried by the culturable enterobacter in the intestinal tract of pet dogs was investigated， as well as the species， diversity and ecological distribution， by using the bacterial culture， isolation and identification and the replica plating technology. The results showed that the culturable bacteria in the intestinal tract of pet dogs had a high proportion of drug resistance and multi?drug resistance. Among which， Escherichia coli had a higher drug resistance rate to the drugs that were used earlier such as ampicillin， sulfonamides， chloramphenicol， streptomycin and tetracycline， while was more sensitive to cephalosporins with a short clinical time. Almost all of the bacteria surveyed had at least one antibiotic resistance， and more than half of the isolatable intestinal bacteria had at least five antibiotic resistance. In summary， the occurrence of intestinal microbial resistance was closely related to the usage time of antibiotics， and the wide distribution of the resistance of the culturable bacteria in the intestinal tract of pet dogs indicated that pets were likely to be the potential route for the transmission of resistance genes between the environment and human pathogenic bacteria.

Key words： Pet dogs; Antibiotics; Culturable intestinal bacteria; Drug resistance

自20世紀(jì)50年代Moore和Jukes等報(bào)道在畜禽和豬飼料中添加抗生素可以促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高生產(chǎn)效率以來，抗生素飼料生長(zhǎng)促進(jìn)劑的推廣和使用極大地促進(jìn)了畜牧業(yè)的發(fā)展，使規(guī)?；S化養(yǎng)殖成為可能?？股氐难邪l(fā)已經(jīng)不只是為了治療人畜感染，越來越多的抗生素被用作飼料添加劑[1]。然而隨著越來越多的抗生素在醫(yī)療保健及畜牧業(yè)生產(chǎn)上的廣泛應(yīng)用，抗生素使用導(dǎo)致的細(xì)菌耐藥性、禽畜產(chǎn)品藥物殘留等危害日益嚴(yán)重。一方面，新型抗生素研發(fā)和產(chǎn)生的速度總是跟不上細(xì)菌變異耐藥的速度。無論是臨床醫(yī)療還是畜牧業(yè)，都將面臨細(xì)菌耐藥性越來越強(qiáng)的問題。青霉素于1940年首次應(yīng)用于臨床，14年后（1954年）金黃色葡萄球菌被證實(shí)對(duì)其產(chǎn)生了耐藥;同樣耐甲氧西林金黃色葡萄球菌出現(xiàn)于甲氧西林上市8年后的1968年;而慶大霉素于1964年投入使用，4年后亦出現(xiàn)了耐慶大霉素綠膿桿菌[2]。另一方面，抗生素進(jìn)入到動(dòng)物體內(nèi)之后不能被完全吸收，有60%～90%的藥物隨動(dòng)物糞便排出體外。這些殘余的抗生素會(huì)隨著動(dòng)物糞便施肥過程釋放到環(huán)境中，并最終成為抗性細(xì)菌和多重抗性細(xì)菌的選擇因子和多重抗性因子。隨著抗生素的不斷研發(fā)和使用，各種耐藥菌伴隨而來，于是出現(xiàn)了“超級(jí)細(xì)菌”。所謂“超級(jí)細(xì)菌”并不是一種細(xì)菌的名稱，而是一類對(duì)絕大多數(shù)抗生素都有強(qiáng)耐藥性的細(xì)菌的統(tǒng)稱。它們能夠編碼新德里金屬?β?內(nèi)酰胺酶（New Delhi metallo?beta?lactamase，簡(jiǎn)稱NDM1），這是一種能催化水解多種β?內(nèi)酰胺類抗生素（包括碳青霉烯類廣譜抗生素等抗生素）的酶[3]。針對(duì)NDM1，世界衛(wèi)生組織（WHO）曾做出評(píng)估：雖然多重耐藥細(xì)菌并不屬于一個(gè)新問題，并且今后也還會(huì)繼續(xù)出現(xiàn)，但NDM1細(xì)菌的出現(xiàn)，表明細(xì)菌耐藥性已成為一個(gè)日益嚴(yán)重的全球性公共衛(wèi)生問題。

目前，在所有消費(fèi)的抗生素中，有50%用于畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)，其中將近一半用于動(dòng)物生長(zhǎng)促進(jìn)劑[4]?，F(xiàn)在我國(guó)大約有17種抗生素被用作添加劑進(jìn)入飼料中[5]。此類濫用抗生素的手段，是導(dǎo)致越來越多耐藥性細(xì)菌甚至超級(jí)細(xì)菌出現(xiàn)的一大原因。并且有關(guān)數(shù)據(jù)表明，近10年來，禽畜養(yǎng)殖中使用的抗生素劑量和種類一直在增加。禽畜糞肥也成為環(huán)境中抗性細(xì)菌和抗生素混合存在的一個(gè)重要的庫(kù)，由于其在農(nóng)業(yè)土壤肥力保持中的重要作用，因而很大程度上提高了抗性基因和抗性細(xì)菌在土壤中的選擇和傳播過程[6]。由此可見，研究動(dòng)物源性耐藥菌的產(chǎn)生不僅僅對(duì)動(dòng)物生長(zhǎng)具有重要意義，對(duì)人類的健康更具有重要作用。近年來，隨著中國(guó)經(jīng)濟(jì)的快速增長(zhǎng)和人民生活水平的提高，寵物行業(yè)得以高速發(fā)展，寵物越來越受到人們的青睞，家庭擁有的寵物總量以幾何倍數(shù)增長(zhǎng)。2013年中國(guó)寵物數(shù)量已增至1.2億只，隨之而來的寵物食品市場(chǎng)快速發(fā)展，寵物養(yǎng)殖正逐漸向規(guī)?；蛯I(yè)化方向發(fā)展[7]。與寵物數(shù)量快速增加所帶來的對(duì)公共安全危害和寄生蟲病傳播的廣泛關(guān)注不同，由于寵物和家庭成員的親密接觸，因此存在具有對(duì)抗生素抗性的微生物轉(zhuǎn)移至人類身上的可能。基于目前抗生素濫用情況的出現(xiàn)，本研究應(yīng)用細(xì)菌分離培養(yǎng)鑒定以及影印平板技術(shù)，對(duì)目前市場(chǎng)上主要的寵物犬腸道內(nèi)可培養(yǎng)微生物的抗生素抗性及其種類、多樣性和生態(tài)分布進(jìn)行系統(tǒng)調(diào)查，以期探明寵物犬腸道微生物攜帶抗生素耐藥性的流行病學(xué)及闡釋飼養(yǎng)動(dòng)物中微生物抗性與人類病原微生物抗性基因的關(guān)系等，為合理利用抗生素調(diào)節(jié)環(huán)境微生物的種類、數(shù)量以及抗生素抗性的分布奠定基礎(chǔ)。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

寵物犬的新鮮糞便收集于福州市花鳥市場(chǎng)寵物市場(chǎng)。采集新鮮糞便（3～5份）分別用密封袋密封，并用記號(hào)筆標(biāo)記采集地點(diǎn)、采集日期、采集人，放入4℃的冰箱中備用。采集的樣品在24 h內(nèi)處理。

1.2?培養(yǎng)基

1.2.1?液體培養(yǎng)基?LB液體培養(yǎng)基，胰蛋白胨10 g，酵母浸出粉5 g， NaCl 10 g， pH值自然，以蒸餾水定容至1 L， 1×105 Pa滅菌20 min備用。

1.2.2?固體培養(yǎng)基?LB固體培養(yǎng)基，胰蛋白胨10 g，酵母浸出粉5 g， NaCl 10 g，瓊脂粉15 g，pH值自然，以蒸餾水定容至1 L， 1×105 Pa滅菌20 min備用。

1.3?抗生素儲(chǔ)備液的制備

參照文獻(xiàn)[9]準(zhǔn)備10類抗生素制成儲(chǔ)備液，過濾除菌后于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3?試驗(yàn)方法

1.3.1?樣品處理?將收集的新鮮寵物犬糞便稱取5 g，放入帶有3～5粒玻璃珠并盛有25 mL無菌生理鹽水的50 mL離心管中，用渦旋攪拌儀旋轉(zhuǎn)振蕩使糞便與無菌生理鹽水充分混勻。靜置5 min后分別移取1.0 mL糞便上清液梯度稀釋至10-4，分別吸取100 uL涂布于LB固體平板培養(yǎng)基上，每份糞便樣品至少涂布5個(gè)LB平板，37℃培養(yǎng)24 h，觀察菌落形態(tài)差異并計(jì)數(shù)。

1.3.2?腸道腸桿菌細(xì)菌的分離純化、計(jì)數(shù)和初步鑒定?統(tǒng)計(jì)稀釋平板上細(xì)菌克隆數(shù)目，然后根據(jù)平板上細(xì)菌克隆的形態(tài)、顏色和大小，挑取圓形邊緣整齊、表面光滑、半透明的菌落進(jìn)行單克隆劃線。從劃線平板上選取單克隆再次劃線，經(jīng)過兩次純化，保證得到單一純化的菌株。為了確認(rèn)分離的細(xì)菌菌株是否為腸桿菌，純化菌株同時(shí)被接種于伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基上。培養(yǎng)后，分離的細(xì)菌菌株在伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基上呈現(xiàn)深紫色菌落被初步認(rèn)定為腸桿菌菌株，分離純化和初步確認(rèn)的腸桿菌菌株按20%比例加入甘油，置-20℃冰箱保種。為了進(jìn)一步驗(yàn)證，從保存菌種中隨機(jī)挑取5～8株接種到LB液體培養(yǎng)基，37℃、220 r·min-1培養(yǎng)24 h，用于基因組DNA的提取和分子鑒定。

1.3.3?腸道可培養(yǎng)腸桿菌16S rRNA的PCR擴(kuò)增、鑒定和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建?取動(dòng)物腸道細(xì)菌的代表性菌株菌液1.5 mL，8000 r·min-1離心5 min，去上清，采取改良的酚氯仿法抽提腸道細(xì)菌基因組[8]。以提取的細(xì)菌基因組為模板，采用通用引物27f/1492r進(jìn)行PCR擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA[9]。PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，94℃變性 45 s，56℃退火45 s，72℃延伸90 s，循環(huán)25次，72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物純化后送至上海生工雙向測(cè)序，獲得的序列遞交至RDP數(shù)據(jù)庫(kù)確定其分類地位。同時(shí)在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)各個(gè)序列進(jìn)行BLAST，篩選同源序列。將分離純化的可培養(yǎng)細(xì)菌的16S rRNA序列與下載的同源序列通過SeaView的ClustalX程序進(jìn)行完全比對(duì)。編輯后用SeaView的tree程序構(gòu)建PhyML系統(tǒng)進(jìn)化樹[10]。

1.3.4?菌落影印和抗生素抗性篩選[11] 取出保存的甘油菌液置于冰上，待完全融化后分別移取50 μL到對(duì)應(yīng)的96孔板中，標(biāo)記備用。將預(yù)先配制的固體LB培養(yǎng)基滅菌后冷卻至60℃，按表1中所需工作濃度分別加入相應(yīng)的抗生素，混勻后倒入方形平板，靜置，待培養(yǎng)基完全凝固后，用帶有96針的影印工具“印章”對(duì)準(zhǔn)96孔板，輕蘸使其均勻帶有相應(yīng)的菌液;再把此印章在含有不同抗生素的培養(yǎng)基平板上輕輕印一下。印好10個(gè)含有不同抗生素的培養(yǎng)基平板后，將平板放在37℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～16 h，觀察培養(yǎng)基平板上菌落生長(zhǎng)情況并計(jì)數(shù)。統(tǒng)計(jì)對(duì)每一種抗生素具有抗藥性的微生物的數(shù)目，計(jì)算抗性微生物比例。計(jì)算公式：抗性微生物比例=具有抗性菌株數(shù)/總測(cè)試菌株×100%。

2?結(jié)果與分析

2.1?寵物犬腸道可培養(yǎng)細(xì)菌的分離鑒定

從寵物犬糞便稀釋平板上一共挑取200個(gè)左右同一類別細(xì)菌單菌落，細(xì)菌菌落形態(tài)、大小和顏色，以及鏡檢比較一致，染色結(jié)果均為革蘭氏陰性。通過伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基的進(jìn)一步篩選，初步確認(rèn)菌株為腸桿菌菌株。挑選8株寵物犬腸道來源的腸桿菌菌株，提取基因組后，以通用引物27f/1492r擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA。測(cè)序后最終得到5條全長(zhǎng)16S rRNA序列，序列經(jīng)過對(duì)比并遞交RDP進(jìn)行分子鑒定，結(jié)果表明挑選的5株腸道細(xì)菌16S rRNA序列完全一致，確定挑取的5株來源于寵物犬腸道的革蘭氏陰性細(xì)菌均為腸桿菌科埃希氏大腸桿菌（Escherichia coli）。收集得到的5條全長(zhǎng)16S rRNA序列dog_4、dog_6、dog_7、dog_L4、dog_L5，用于下一步的系統(tǒng)進(jìn)化分析。

2.2?寵物犬腸道可培養(yǎng)細(xì)菌16S rRNA系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建

將得到的寵物腸道中的5株腸桿菌菌株16S rRNA序列分別在NCBI nt數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，選取并下載同源序列以及腸桿菌科主要屬典型菌株的16S rRNA序列，利用SeaView的ClustalX程序?qū)⒛康男蛄信c已知的腸桿菌科

16S rRNA序列進(jìn)行比對(duì)，編輯后用SeaView的tree程序構(gòu)建PhyML系統(tǒng)進(jìn)化樹（圖1）。細(xì)菌16S rRNA的系統(tǒng)發(fā)育分析表明，所分離的寵物犬腸道中可培養(yǎng)細(xì)菌聚于腸桿菌科的Ecoli?Shigella分支，由此可以看出這些寵物犬來源的腸道細(xì)菌菌株序列高度同源，彼此間的親緣關(guān)系很近。

2.3?寵物犬腸道可培養(yǎng)細(xì)菌抗生素抗性或敏感性分析

2.3.1?寵物犬腸道可培養(yǎng)細(xì)菌的耐藥性及抗性細(xì)菌在腸道微生物中的比例?在確定分離菌株為大腸桿菌菌株的基礎(chǔ)上，對(duì)其中的192株分離純化的寵物犬腸道大腸桿菌菌株抗生素耐藥性進(jìn)行分析，結(jié)果表明寵物犬腸道大腸桿菌對(duì)氨芐青霉素（AMP）的抗性最為普遍，耐藥性比例達(dá)到了90%。其次對(duì)萘啶酮酸（NaA）、鹽酸四環(huán)素（TC）、鹽酸克林霉素（DA）、磺胺嘧啶（SD）耐藥性比例也均在80%以上。在耐藥性比例較高的5種抗生素中，氨芐青霉素、四環(huán)素和磺胺類藥物都屬于應(yīng)用范圍廣，使用時(shí)間比較長(zhǎng)的臨床常備抗生素，較高的抗性微生物比例說明該類抗生素或者抗性微生物在家養(yǎng)犬或者環(huán)境中廣泛存在。寵物犬腸道微生物對(duì)其余幾種抗生素的抗性比例相對(duì)較低，除紅霉素（Ery）抗性比例達(dá)到42.5%外，其余均小于20%，其中對(duì)硫酸鏈霉素的抗性比例僅為5.8%，說明硫酸鏈霉素對(duì)所分離出的大腸桿菌菌株具有很好的抑制或殺害作用。

2.3.2?寵物犬腸道可培養(yǎng)微生物中的多重抗性細(xì)菌?根據(jù)鏡檢和分子鑒定結(jié)果，從寵物犬糞便分離培養(yǎng)得到的菌株均為大腸桿菌。測(cè)試的192株細(xì)菌中97%以上菌株具有至少1種以上的抗生素抗性，其中有60.3%的細(xì)菌具有5種或6種抗生素抗性，比例最多，說明被檢測(cè)細(xì)菌具有較廣泛的抗生素抗性，并且這些抗性集中在幾種抗生素上，表明這些耐藥性在寵物犬腸道微生物中已經(jīng)固化，形成了穩(wěn)定的菌群結(jié)構(gòu)和遺傳結(jié)構(gòu)。只有極少數(shù)不到3%的菌株沒有表現(xiàn)出對(duì)任何抗生素具有抗性，說明了寵物犬腸道細(xì)菌普遍具有抗生素抗性。被檢測(cè)的細(xì)菌中有6.4%對(duì)9種抗生素具有抗性，這表明在動(dòng)物腸道內(nèi)已有部分細(xì)菌進(jìn)化出了非常廣泛的抗性，這與臨床中廣泛存在超級(jí)細(xì)菌的結(jié)果是一致的。

2.4?寵物犬腸道可培養(yǎng)細(xì)菌在環(huán)境中的分布及其抗性的潛在傳播途徑

通過收集和統(tǒng)計(jì)NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中與鑒定的腸道可培養(yǎng)細(xì)菌具有高度序列同源性的細(xì)菌16S rRNA序列（序列同源性>99%），并對(duì)這些序列的來源與分布信息進(jìn)行整理分析，發(fā)現(xiàn)在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中已經(jīng)報(bào)道許多與分離的可培養(yǎng)細(xì)菌16S rRNA序列同源性大于99%的細(xì)菌。這些腸桿類細(xì)菌在環(huán)境中有非常廣泛的分布。與被測(cè)的大腸桿菌16S rRNA有高度相似的細(xì)菌菌株在歐洲、亞洲和美洲如（美國(guó)、中國(guó)、英國(guó)、捷克、巴基斯坦等眾多國(guó)家）都有報(bào)道，在豬、鼠、牛、雞、麝香鹿以及被污染的河水等均大量存在，從陸地到海洋都有分布，可以說明這些細(xì)菌具有廣泛的地區(qū)分布;這些有高度相似的細(xì)菌菌株主要分布在土壤、水、根中，然而這些細(xì)菌在動(dòng)物腸道內(nèi)也能被檢測(cè)出，說明了環(huán)境微生物與動(dòng)物體內(nèi)微生物之間的交叉感染。根據(jù)這些不同環(huán)境微生物之間的相互關(guān)聯(lián)，形成了細(xì)菌在不同環(huán)境之間可能存在的關(guān)系鏈或關(guān)系網(wǎng)。

有研究表明，病原菌主要是在基因水平進(jìn)行轉(zhuǎn)移，這些病原菌會(huì)從含有抗性基因的同一或親緣關(guān)系較近的細(xì)菌類群中獲得抗性基因。其次，Sommer等[12]研究表明腸道可培養(yǎng)細(xì)菌（通常為兼性厭氧細(xì)菌或機(jī)會(huì)致病菌）以及環(huán)境中的同類細(xì)菌與病原菌含有的抗性基因具有高度的同源性，說明動(dòng)物腸道中的可培養(yǎng)細(xì)菌可能會(huì)導(dǎo)致病原菌獲得抗性基因。大腸桿菌能夠適應(yīng)各種環(huán)境，具有非常廣泛的分布，而大量的人口流動(dòng)及動(dòng)物遷徙為細(xì)菌快速?gòu)V泛地傳播提供了有利條件。由此看來，動(dòng)物腸桿菌類細(xì)菌很可能是人體病原菌獲得抗性基因以及抗性基因傳播的重要載體。因此，同一環(huán)境中不同來源的腸桿菌類互相傳播，也可能是耐藥性基因在不同微生物和人類病原菌之間相互傳播的潛在途徑[13]。

3?討論與結(jié)論

寵物是一個(gè)潛在的細(xì)菌貯存庫(kù)，其糞便、口腔、對(duì)人的生理性傷害（包括咬傷、抓傷）都是細(xì)菌傳播的途徑。人與寵物的親密接觸和共同的生活環(huán)境是細(xì)菌傳播的條件。2006年美國(guó)有一病例報(bào)道，寵物主人被有抗菌藥治療史的犬咬后，發(fā)現(xiàn)感染了來自犬的多重耐藥大腸桿菌和腸球[14]。目前國(guó)內(nèi)對(duì)食品動(dòng)物抗菌藥的使用有嚴(yán)格規(guī)定，但是對(duì)于寵物醫(yī)療方面，始終很少人去關(guān)注。實(shí)際上隨著國(guó)內(nèi)寵物行業(yè)的蓬勃發(fā)展，抗菌藥的使用量非常大，加上小動(dòng)物臨床從業(yè)人員良莠不齊，或受經(jīng)濟(jì)利益驅(qū)使，無指征用藥、濫用和不合理使用抗菌藥現(xiàn)象很嚴(yán)重，由此導(dǎo)致的耐藥問題可能比較突出[15]。加上寵物活動(dòng)范圍相對(duì)較廣，不同環(huán)境之間微生物抗性基因之間的相互傳遞，導(dǎo)致耐藥譜越來越廣。

本研究通過對(duì)寵物犬的腸道可培養(yǎng)細(xì)菌耐藥性進(jìn)行調(diào)查研究及統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)寵物犬腸道細(xì)菌對(duì)不同家族抗生素抗性具有明顯差異。在測(cè)試的192株寵物犬腸道大腸桿菌中，超過80%菌株對(duì)氨芐青霉素鈉、萘啶酮酸、鹽酸四環(huán)素、鹽酸克林霉素、磺胺嘧啶具有明顯抗性;相反，只有不到20%測(cè)試菌株對(duì)氯霉素、硫酸鏈霉素、環(huán)丙沙星鹽酸鹽和頭孢氨芐具有抗性。根據(jù)報(bào)道，國(guó)內(nèi)獸醫(yī)臨床上最常用的抗菌藥物有青霉素類、頭孢菌素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、磺胺類、夫西地酸、四環(huán)素類、氯霉素類、林可胺類和氟喹諾酮類等。而其中氨芐青霉素、磺胺類藥物、四環(huán)素等是最早應(yīng)用在獸醫(yī)臨床并且使用時(shí)間也是最長(zhǎng)[16]。本研究對(duì)寵物犬腸道大腸桿菌耐藥性的調(diào)查也反映了這一趨勢(shì)，盡管有一定的差別，總的來說，測(cè)試的大腸桿菌對(duì)氨芐西林、磺胺類藥物、氯霉素、鏈霉素和四環(huán)素等較早使用藥物的耐藥率較高，對(duì)頭孢菌素類藥物相對(duì)較敏感。這一結(jié)論與先前國(guó)外類似的工作結(jié)果是一致的[16]。

在多重耐藥菌方面，寵物動(dòng)物中的細(xì)菌所攜帶的抗生素?cái)?shù)目不盡相同，寵物犬腸道細(xì)菌中97%以上菌株具有至少一種以上的抗生素抗性。在寵物腸道微生物中有超過一半的測(cè)試細(xì)菌攜帶4～6種耐藥性。寵物類腸道中耐藥性微生物的比例以及這些微生物對(duì)不同抗生素抗性的差異可能與抗生素的使用密切相關(guān)。寵物腸道中出現(xiàn)多株多重耐藥細(xì)菌的原因一方面可能是相關(guān)抗生素的廣泛使用甚至濫用有關(guān)。Rantala等[16]對(duì)芬蘭有過抗菌藥治療史的慢性皮膚病患犬與無用藥史犬身上的葡萄球菌、腸桿菌和腸球菌耐藥率進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)用藥犬的葡萄球菌對(duì)磺胺（TMP）耐藥率（57%）明顯高于未用藥犬的耐藥率（25%），且多重耐藥性更普遍（29%比9%）;另一方面可能是因?yàn)榭股乜剐曰蛑g的連鎖現(xiàn)象導(dǎo)致的共篩選。也就是說當(dāng)多重耐藥性共存于同一載體，比如轉(zhuǎn)座子或者抗性質(zhì)粒，當(dāng)其中一種耐藥性被環(huán)境中存在的抗生素篩選時(shí)，其他的耐藥性也同時(shí)被篩選[17]。Brenciani等[18]發(fā)現(xiàn)在125株攜帶大環(huán)內(nèi)脂類抗生素抗性基因erm（B）的釀膿葡萄球菌中有117株也同時(shí)攜帶四環(huán)素抗性基因tet（M），并證明基因erm（B）和tet（M）是連鎖的。Levy等[19]發(fā)現(xiàn)用添加亞治療劑量土霉素飼料喂養(yǎng)的雞排泄物中，大腸桿菌具有土霉素抗性，還具有鏈霉素、磺胺和氨芐西林抗性。

作為人的親密伙伴，寵物通常被賦予了比經(jīng)濟(jì)價(jià)值更大的社會(huì)價(jià)值，因而在其感染性疾病的治療中經(jīng)常會(huì)使用更高級(jí)和更昂貴的抗生素，甚至是最新一代的人用抗生素藥物。而在臨床上，由于抗生素的不正確使用、濫用和誤用，是導(dǎo)致這些動(dòng)物腸道微生物耐藥性產(chǎn)生的主要原因[20]。而寵物和人之間的密切接觸使得細(xì)菌更加容易通過寵物傳播給人或者人傳播給動(dòng)物從而傳播疾病。例如寵物犬和寵物貓攜帶的人獸共患病病原菌可通過糞-口途徑、皮膚外傷（犬咬傷或貓抓傷）或媒介昆蟲傳播給人，這種流行多為散發(fā)且難于統(tǒng)計(jì)。研究表明MRSA更多的是通過人傳播給寵物，寵物并不感染發(fā)病而是作為貯存宿主，從醫(yī)務(wù)人員家里養(yǎng)的寵物中更容易分離到MRSA[21]。寵物與人之間不僅僅存在細(xì)菌的相互傳播，也存在基因的傳遞，寵物的耐藥性基因可能通過細(xì)菌轉(zhuǎn)移到人體從而增加人患病的風(fēng)險(xiǎn)性。分離于尿路感染病犬的耐萬古霉素糞腸球菌攜帶與人VRE 相同的轉(zhuǎn)座子Tn1546，該轉(zhuǎn)移元件編碼萬古霉素耐藥基因vanA，證明了人和犬分離株可能存在著移動(dòng)元件的交換[22]。另一個(gè)研究較深的例子是對(duì)寵物病原菌葡萄球菌耐藥機(jī)制的研究。研究人員發(fā)現(xiàn)部分分離株的四環(huán)素類耐藥基因tet K、大環(huán)內(nèi)酯類及林可酰胺類耐藥基因ermC和氯霉素耐藥基因catpC221是由質(zhì)粒介導(dǎo)，這些質(zhì)粒與人源葡萄球菌質(zhì)粒具有很高的同源性[20，23]。綜合以上分析結(jié)果表明，由于抗生素被作為醫(yī)療用藥和飼料添加劑的長(zhǎng)期使用，動(dòng)物體內(nèi)細(xì)菌對(duì)抗生素產(chǎn)生耐藥性，并根據(jù)使用的抗生素種類和劑量的不同，耐藥也有所不同。而這些耐藥微生物及其攜帶的耐藥性基因?qū)⑼ㄟ^食物鏈或動(dòng)物活動(dòng)，例如直接接觸或者糞便轉(zhuǎn)移到人類體在動(dòng)物與人體之間相互傳播，從而對(duì)人體健康造成影響。

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（責(zé)任編輯：林玲娜）